龔春梅 徐敬根 彭玲 鄧春燕

成都市雙流區(qū)第一人民醫(yī)院，四川 成都 610200

非小細胞肺癌(NSCLC)是由上皮引起的惡性腫瘤，最常見于肺實質(zhì)，并可侵襲轉(zhuǎn)移周圍鄰近組織，在實體瘤惡性腫瘤發(fā)病率中居于首位[1]。DDP是治療非小細胞肺癌的重要化療藥物，被用于非小細胞肺癌的輔助治療，可促進腫瘤細胞死亡[2]。然而，在非小細胞肺癌治療中存在 DDP耐藥的發(fā)生，導致治療效果差。

在腫瘤調(diào)節(jié)過程中，microRNAs(miRNAs)作為癌基因或腫瘤抑制因子發(fā)揮作用，microRNAs有助于探索非小細胞肺癌進展的發(fā)病機制[3]。既往研究顯示，miR-155在多種腫瘤中均發(fā)揮重要功能，可以被作為腫瘤預后相關的標記物[4]。我們的研究探討miR-155在非小細胞肺癌發(fā)生、發(fā)展以及DDP耐藥性機制。

1 材料與方法

1.1Real-time PCR檢測各組A549細胞和A549/DDP細胞中miR-155和Bax和Bcl-2的表達

采用Trizol試劑提取各組A549細胞和A549/DDP細胞，進行DNA反轉(zhuǎn)錄合成。引物依據(jù)各基因序列(見表1)。對目的基因進行Real-time PCR檢測。根據(jù)2-△Ct法進行半定量分析。

表1 引物序列

1.2Western blot檢測Wnt/β-catenin信號通路蛋白表達變化 BCA法蛋白定量后于-20℃保存。分離蛋白利用10%SDS-PAGE電泳，并將膠用半干轉(zhuǎn)膜法轉(zhuǎn)移至PVDF膜，100mA,1.5h去除非特異性背景利用室溫，5%脫脂奶粉作用，2 h。分別加入一抗1:1000，1:1500稀釋的Wnt1，β-catenin單抗，搖床，4℃，過夜，避光條件下加入1:2000羊抗兔二抗，孵育30 min，PBST洗滌，化學發(fā)光劑顯色1 min，X片曝光成像，觀察結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1調(diào)控MiR-155對非小細胞肺癌細胞A549和耐藥細胞株A549/DDP中MiR-155表達影響 轉(zhuǎn)染miR-155 mimics于非小細胞肺癌細胞A549中，可促進MiR-155表達增加；而轉(zhuǎn)染miR-155 inhibitor于耐藥細胞株A549/DDP，可顯著下調(diào)MiR-155表達。

2.2調(diào)控MiR-155對非小細胞肺癌細胞A549和耐藥細胞株A549/DDP中Bax和Bcl-2表達影響 上調(diào)非小細胞肺癌細胞A549中MiR-155表達后，可減少Bax表達，增加Bcl-2表達；而轉(zhuǎn)染miR-155 inhibitor于耐藥細胞株A549/DDP下調(diào)其在耐藥細胞中的表達，增加Bax表達，減少Bcl-2表達。

2.3調(diào)控MiR-155對非小細胞肺癌細胞A549和耐藥細胞株A549/DDP中Wnt1/β-catenin信號通路的影響 上調(diào)非小細胞肺癌細胞A549中MiR-155表達后，可導致Wnt1、β-catenin表達增加；而轉(zhuǎn)染miR-155 inhibitor于耐藥細胞株A549/DDP下調(diào)其在耐藥細胞中的表達，可導致Wnt1、β-catenin表達減少。

3 討 論

目前對非小細胞肺癌采用放療和化療結(jié)合的多模式治療成為控制其局部發(fā)展的重要方式，取得了重大進展，但非小細胞肺癌的化療耐藥問題導致治療容易失敗。MiRNA具有廣泛的調(diào)控功能，在生理病理環(huán)境中都有重要的作用，可參與細胞增殖、分化和凋亡等生物學過程。

Wnt/β-catenin信號通路在腫瘤增殖、EMT以及侵襲過程發(fā)揮重要作用[5-6]。本研究證實上調(diào)MiR-155可通過激活Wnt/β-catenin通路，減少Bax表達，增加Bcl-2表達，進而導致凋亡受到抑制，腫瘤細胞進一步增殖。結(jié)論：MiR-155可調(diào)控Wnt/β-catenin信號通路，促進非小細胞肺癌細胞的增殖，抑制其凋亡。MiR-155在非小細胞肺癌耐藥細胞中表達顯著增高，抑制MiR-155表達可抑制Wnt/β-catenin通路，促進耐藥細胞凋亡，抑制耐藥細胞增殖。