姚武，崔朋，胡曉倩

（1.黃山學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，安徽 黃山 245041；2.黃山學(xué)院 生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，安徽 黃山 245041）

0 引言

人類基因研究揭示了單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNP）與遺傳性疾病有直接關(guān)系。因此，DNA 單堿基錯(cuò)配的識(shí)別和穩(wěn)定性研究在疾病分子診斷、臨床預(yù)測(cè)、疾病預(yù)防和治療等領(lǐng)域有重要作用［1-3］，得到國(guó)內(nèi)外研究者的持續(xù)關(guān)注。

基于DNA 雜交、聚合酶、連接酶、內(nèi)切酶等技術(shù)，結(jié)合不同信號(hào)表達(dá)方法，已有不同類型的DNA單堿基錯(cuò)配識(shí)別傳感器，包括熒光［4-6］、電化學(xué)［7-9］、電化學(xué)阻抗（EIS）［10-12］、電化學(xué)發(fā)光（ECL）［13-14］、石英晶體微天平（QCM）［15］、質(zhì)譜（MS）［16-17］、表面等離子體共振（SPR）［18］、可見(jiàn)光譜與可視化技術(shù)［19-21］等，并取得了長(zhǎng)足進(jìn)步。然而，單堿基錯(cuò)配識(shí)別仍存在巨大挑戰(zhàn)，由于單堿基錯(cuò)配識(shí)別取決于其熱力學(xué)穩(wěn)定性，所以DNA 鏈中不同類型和不同位點(diǎn)的單堿基錯(cuò)配識(shí)別和穩(wěn)定性差異研究尤為重要。

為發(fā)揮ECL 和EIS 技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行相互印證，提高研究結(jié)果的可靠性，本文在同一電化學(xué)DNA 傳感器（EE-DNA 傳感器）平臺(tái)上，首次同時(shí)采用ECL 和EIS 技術(shù)，研究與胞嘧啶堿基C 不同類型和不同位點(diǎn)單堿基錯(cuò)配堿基對(duì)的識(shí)別和穩(wěn)定性差異。EE-DNA 傳感器平臺(tái)的構(gòu)建參照文獻(xiàn)［13-14］并做適當(dāng)修改。傳感器表面具有莖環(huán)構(gòu)象的分子探針DNA（pDNA）與互補(bǔ)DNA（cDNA）雜交后，轉(zhuǎn)化為剛性線形的雙螺旋DNA，ECL 信號(hào)顯著減弱，EIS 信號(hào)顯著增強(qiáng)。pDNA 在與不同類型或不同位點(diǎn)的單堿基錯(cuò)配DNA 雜交時(shí)，由于單堿基錯(cuò)配的穩(wěn)定性減弱程度不同，ECL 信號(hào)有不同程度的減弱，而EIS 信號(hào)有不同程度的增強(qiáng)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

CHI660c 型電化學(xué)工作站（上海晨華儀器公司）用于三電極系統(tǒng)電解和EIS 信號(hào)采集。BPCL-2-KIC 型超微弱發(fā)光分析儀（中國(guó)科學(xué)院北京生物物理研究所）用于ECL 信號(hào)采集。日立U-3010 型紫外分光光度計(jì)（日本）用于測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。

二-（2，2'-聯(lián)吡啶）-4'-甲基-4-羧基聯(lián)吡啶釕（Ⅱ）琥珀酰胺酯-二-六氟磷酸鹽（Ru（bpy）2（cbpy）NHS）購(gòu)自Fluka 化學(xué)試劑公司，三丙基胺（TPA）（99%）購(gòu)自ACROS 化學(xué)試劑公司，三-（2-羧基乙基）膦鹽酸鹽（TCEP）和2-巰基乙醇（ME）購(gòu)自阿法埃莎（天津）化學(xué)有限公司。探針DNA（pDNA）、互補(bǔ)DNA（cDNA）和單堿基錯(cuò)配DNA（mDNA）等寡核苷酸鏈均購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司，寡核苷酸鏈序列見(jiàn)表1。pDNA 序列的兩端為6個(gè)互補(bǔ)堿基，可以形成莖環(huán)分子構(gòu)象，3'端修飾的氨基用于標(biāo)記聯(lián)吡啶釕分子，5'端修飾的巰基用于pDNA 通過(guò)Au—S 鍵在金電極上進(jìn)行自組裝。在含29 個(gè)堿基長(zhǎng)度的單堿基錯(cuò)配DNA 中，mDNA1、mDNA2、mDNA3、mDNA4、mDNA5 分別表示距5'端第1，8，13，20，27 號(hào)位點(diǎn)的C-A 單堿基錯(cuò)配的5種情形，mDNA6、mDNA7 分別表示 距5'端第13 號(hào)位點(diǎn)C-T 和C-C 單堿基錯(cuò)配的2 種情形。其他試劑均為分析純，使用時(shí)未經(jīng)純化。

表1 寡核苷酸序列Table 1 Oligonucleotide sequences

1.2 聯(lián)吡啶釕分子標(biāo)記pDNA

依照文獻(xiàn)［22-23］的方法對(duì)pDNA 的聯(lián)吡啶釕發(fā)光分子標(biāo)記做適當(dāng)修改后進(jìn)行合成和表征。將0.25 mg 的Ru（bpy）2（cbpy）NHS 溶解于15 μL N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，然后將其加入85 μL 0.1 mol·L?1的硼砂緩沖溶液（pH 8.5）中，并將此溶液加入50 μL pDNA 水溶液（1 OD）中，振蕩搖勻，室溫下連續(xù)振蕩，過(guò)夜。此時(shí)，Ru（bpy）2（cbpy）NHS 中的琥珀酰胺酯被pDNA 3'端的氨基取代，生成酰胺鍵，從而Ru（bpy）2（cbpy）被標(biāo)記到pDNA 3'端，得到發(fā)光分子聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的pDNA（pDNARu）。振蕩過(guò)夜后，在其中加入30 μL 3 mol·L?1醋酸鈉溶液和600 μL 凍乙醇，振蕩搖勻，于?18 ℃冷凍放置24 h，在4 ℃和12 000 r·min?1條件下，進(jìn)行30 min 的冷凍離心，棄上層溶液，沉淀，用75%的凍乙醇溶液洗滌2 次，再次在4 ℃和12 000 r·min?1條件下離心，棄上層溶液，將所得沉淀物在室溫下干燥，再加37 μL 高純水溶解，作為pDNA-Ru 儲(chǔ)備液，置于4 ℃冰箱密封保存，待用。標(biāo)記產(chǎn)物用紫外可見(jiàn)吸收光譜進(jìn)行表征。

1.3 EE-DNA 傳感器構(gòu)建

依次用α-Al2O3粉進(jìn)行拋光，超純水和無(wú)水乙醇超聲清洗金電極，然后在0.5 mol·L?1H2SO4溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，直至出現(xiàn)典型且穩(wěn)定的金電極循環(huán)伏安曲線。取出金電極，用超純水清洗干凈，并用高純氮?dú)獯蹈纱谩?/p>

取一定量的pDNA-Ru 儲(chǔ)備液配制濃度為2 μmol·L?1的溶液（10 mmol·L?1PBS，0.1 mol·L?1NaCl，5 mmol·L?1MgCl2，1 mmol·L?1TCEP，pH 7.4）。將處理干凈且吹干的金電極迅速插入500 μL的上述溶液中，在室溫下浸泡4 h，pDNA-Ru 通過(guò)5'端修飾的巰基借助Au—S 鍵自組裝到金電極表面，用0.1 mol·L?1的PBS 緩沖溶液（pH 7.4）淋洗電極表面，洗去物理吸附的pDNA-Ru。將該電極浸泡于2 mmol·L?1ME 溶液（10 mmol·L?1PBS，1 mol·L?1NaCl，pH 7.4）中，鈍化30 min，除去非特異性鍵合的pDNA-Ru 和封閉未鍵合的pDNA-Ru 的金電極表面位點(diǎn)。完成EE-DNA 傳感器組裝，待用。

1.4 EE-DNA 傳感器的ECL 和EIS 信號(hào)測(cè)量

分別將新組裝的EE-DNA 傳感器、Ag/AgCl（飽和KCl）電極和鉑絲電極作為工作電極、參比電極和對(duì)電極，組成三電極系統(tǒng)。

第1步，將三電極系統(tǒng)插入2.0 mL 5 mmol·L?1的［Fe（CN）6］4?/3?（0.1 mol·L?1KCl）溶液中，選擇電化學(xué)工作站交流阻抗方法測(cè)量EE-DNA 傳感器的EIS 信號(hào)（電荷轉(zhuǎn)移電阻Rct）。交流電壓振幅為5 mV，EIS 測(cè)量的頻率范圍為0.05 Hz～100 kHz。用0.1 mol·L?1的PBS 緩沖溶液（pH 7.4）清洗三電極系統(tǒng)。再將三電極系統(tǒng)插入2.0 mL 0.1 mol·L?1的TPA 溶液（0.1 mol·L?1PBS，pH 7.4）中，選擇電化學(xué)工作站循環(huán)伏安法進(jìn)行電解，同時(shí)用超微弱發(fā)光儀測(cè)量EE-DNA 傳感器的ECL 信號(hào)。循環(huán)伏安掃描電位范圍為0～0.75 V，掃描速度為100 mV·s?1。超微弱發(fā)光儀的光電倍增管偏壓設(shè)為?900 V。

第2 步，將EE-DNA 傳感器放入cDNA 或不同單堿基錯(cuò)配DNA 溶液（10 mmol·L?1PBS，0.1 mol·L?1NaCl，5 mmol·L?1MgCl2，pH 7.4）中，于37 ℃下孵化雜交30 min，取出，用0.1 mol·L?1的PBS 緩沖溶液（pH 7.4）淋洗電極表面。重復(fù)第1步，分別測(cè)定孵化雜交后的EIS 和ECL 信號(hào)。

2 結(jié)果與討論

2.1 pDNA-Ru 的紫外可見(jiàn)吸收光譜表征

用紫外可見(jiàn)吸收光譜表征pDNA-Ru，如圖1 所示。圖內(nèi)插圖為pDNA-Ru 吸收光譜曲線的局部放大。450 nm 的吸收峰對(duì)應(yīng)聯(lián)吡啶釕琥珀酰胺酯452 nm 的特征吸收，是聯(lián)吡啶釕配離子中金屬釕到配體的電荷轉(zhuǎn)移特征吸收帶，說(shuō)明聯(lián)吡啶釕已被成功地標(biāo)記在pDNA 鏈上。

圖1 pDNA、Ru（bpy）2（cbpy）NHS 和pDNA-Ru 的紫外可見(jiàn)吸收光譜Fig.1 The UV-Vis spectra of pDNA、Ru（bpy）2（cbpy）NHS and pDNA-Ru

2.2 EE-DNA 傳感器的循環(huán)伏安表征

電化學(xué)探針［Fe（CN）6］4?/3?的循環(huán)伏安曲線常被用于表征電極修飾過(guò)程和DNA 雜交過(guò)程。圖2 是不同修飾階段的金電極在［Fe（CN）6］4?/3?溶液中的循環(huán)伏安曲線，由圖2 中a，b 曲線可知，裸金電極用pDNA-Ru 修飾，并經(jīng) ME 溶液鈍化后，探針［Fe（CN）6］4?/3?的氧化和還原峰電流均明顯減小，峰電位差顯著增大。這是由于pDNA 通過(guò)Au—S 鍵自組裝到金電極表面后，金電極表面被一層pDNA-Ru 覆蓋，DNA 鏈中帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)與帶負(fù)電荷的電化學(xué)探針［Fe（CN）6］4?/3?之間存在靜電排斥作用，減弱了探針［Fe（CN）6］4?/3?與電極表面的電荷傳遞。由圖2 中的c 和d 曲線可知，當(dāng)探針pDNA-Ru 分別與0.2 和20 nmol·L?1的目標(biāo)cDNA雜交后，探針［Fe（CN）6］4?/3?的峰電流進(jìn)一步減小，峰電位差進(jìn)一步增大。這是由于雜交形成雙鏈DNA后，金電極表面的DNA 進(jìn)一步增多，負(fù)電荷量繼續(xù)增加，進(jìn)一步阻礙了探針［Fe（CN）6］4?/3?在電極表面的電化學(xué)反應(yīng)。

圖2 裸金電極（a），pDNA-Ru 修飾電極（b），pDNA-Ru 分別與0.2 和20 nmol·L?1 cDNA 雜交后的修飾電極（（c）和（d））在5 mmol·L?1［Fe（CN）6］4?/3?（0.10 mol·L?1 KCl）溶液中的循環(huán)伏安曲線Fig.2 CVs of the modified electrode at different stages in 5 mmol·L?1［Fe（CN）6］4?/3?（0.10 mol·L?1 KCl）solution.（a）bare Au electrode；（b）pDNA-Ru modified Au electrode；（c）and（d）pDNA-Ru modified Au electrode after hybridization with 0.2 and 20 nmol·L?1 cDNA solution，respectively

2.3 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

探針pDNA-Ru 的自組裝時(shí)間對(duì)ECL 信號(hào)有顯著影響。當(dāng)自組裝時(shí)間低于4 h 時(shí)，pDNA-Ru 組裝量不夠，ECL 信號(hào)較弱。當(dāng)自組裝時(shí)間接近4 h 時(shí)，ECL 信號(hào)最強(qiáng)。當(dāng)自組裝時(shí)間大于4 h 時(shí)，ECL 信號(hào)減弱，這可能是由于自組裝時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，在金電極表面非特異性吸附的pDNA-Ru 增多，在后續(xù)的鈍化過(guò)程中不能完全排除，雖然聯(lián)吡啶釕分子增加了，但電極表面的電阻也大大增加，導(dǎo)致導(dǎo)電性減弱，不利于電極表面發(fā)生電化學(xué)反應(yīng)，從而使ECL 信號(hào)減弱。因此，選擇pDNA-Ru 自組裝時(shí)間為4 h。

EE-DNA 傳感器的電解電位是影響ECL 信號(hào)強(qiáng)度和重復(fù)性的重要參數(shù)，如圖3 所示。當(dāng)電位為0～0.60 V 時(shí)，幾乎無(wú)ECL 信號(hào)產(chǎn)生。當(dāng)電位為0～0.70 V 時(shí)，ECL 信號(hào)很弱，連續(xù)測(cè)定2 次，信號(hào)基本穩(wěn)定。當(dāng)電位為0～0.75 V 時(shí)，ECL 信號(hào)顯著增強(qiáng)，連續(xù)測(cè)定3 次，信號(hào)基本穩(wěn)定。當(dāng)電位為0～0.80 V時(shí)，第1 次掃描測(cè)定，ECL 信號(hào)強(qiáng)度比高位為0.75 V時(shí)還高，但繼續(xù)掃描第2，3 次，ECL 信號(hào)顯著減小。繼續(xù)增高電位，ECL 信號(hào)顯著降低。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因可能是電位達(dá)到0.80 V 或更高后，Au—S 鍵因氧化被破壞，探針pDNA-Ru 從金電極表面脫落，導(dǎo)致ECL 信號(hào)減弱且不穩(wěn)定。因此，選擇循環(huán)伏安電解電位為0～0.75 V。

圖3 電解電位對(duì)EE-DNA 傳感器ECL 信號(hào)強(qiáng)度的影響Fig.3 The dependence of the ECL intensity and reproducibility on the applied potential

pDNA-Ru 與目標(biāo)DNA 的孵化雜交時(shí)間對(duì)傳感器ECL 信號(hào)的變化也有顯著影響。隨著EEDNA 傳感器與cDNA 孵化雜交時(shí)間從10 min 增至30 min，ECL 信號(hào)逐漸減弱，當(dāng)孵化雜交時(shí)間超過(guò)30 min 后，ELC 信號(hào)基本保持穩(wěn)定?？梢?jiàn)孵化30 min 可以使雜交達(dá)到飽和。因此，選擇孵化雜交時(shí)間為30 min。

2.4 pDNA-Ru 與cDNA 和單堿基錯(cuò)配mDNA3 雜交前后ECL 和EIS 信號(hào)的變化

在上述優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，pDNA-Ru 與0.2 和20 nmol·L?1的目標(biāo)cDNA 雜交前后，EE-DNA 傳感器的ECL 信號(hào)強(qiáng)度（IECL）和EIS 信號(hào)強(qiáng)度（Rct）發(fā)生了顯著變化，如圖4 所示。在pDNA-Ru 與互補(bǔ)cDNA 雜交前，其IECL為2 182 a.u.，Rct為705 Ω。在pDNA-Ru 分別與0.2 和20 nmol·L?1的cDNA 雜交后，IECL顯著降低，降至922 和365 a.u.，Rct分別增至1 381 和1 709 Ω。雜交前后的IECL變化（?ΔIECL）和電荷轉(zhuǎn)移電阻變化（ΔRct）分別為1 260，1 817 a.u.和676，1 004 Ω。

圖4 pDNA-Ru 雜交前、分別與0.2 和20 nmol·L?1 cDNA 雜交后的ECL 曲線和EIS 曲線Fig.4 ECL spectra and EIS spectra of pDNA-Ru，pDNA-Ru after hybridization with 0.2 and 20 nmol·L?1 cDNA，respectively

產(chǎn)生此結(jié)果的原因是，當(dāng)pDNA-Ru 與cDNA充分雜交后，莖環(huán)構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)閯傂跃€形的雙鏈DNA結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致ECL 信號(hào)分子聯(lián)吡啶釕遠(yuǎn)離電極表面，電極反應(yīng)速率下降，ECL 信號(hào)強(qiáng)度顯著降低。同時(shí)，由于電極表面DNA 量增多，負(fù)電荷數(shù)增加，進(jìn)一步阻礙了電化學(xué)探針［Fe（CN）6］4?/3?在電極表面的電化學(xué)反應(yīng)，電荷轉(zhuǎn)移電阻顯著增大，導(dǎo)致?ΔIECL和ΔRct較大。

pDNA-Ru 與0.2 和20 nmol·L?1的單堿基錯(cuò)配mDNA3（距5'端第13 位點(diǎn)C-A 單堿基錯(cuò)配DNA）雜交前后，IECL和Rct變化相對(duì)較小，如圖5 所示。雜交前IECL為2 300，Rct為625 Ω，雜交后IECL分別降至1 624 和1 174 a.u.，Rct分別 增至789 和804 Ω。此時(shí)，雜交前后的?ΔIECL和ΔRct分別為676，1 126 a.u.和164，179 Ω。

圖5 pDNA-Ru 雜交前、分別與0.2 和20 nmol·L?1 mDNA3雜交后的ECL 曲線和EIS 曲線Fig.5 ECL spectra and EIS spectra of pDNA-Ru，pDNA-Ru after hybridization with 0.2 and 20 nmol·L?1 mDNA3，respectively

當(dāng)具有莖環(huán)構(gòu)象的pDNA-Ru 與第13 位點(diǎn)的C-A 單堿基錯(cuò)配mDNA3 孵化時(shí)，雜交前后的?ΔIECL和ΔRct大大減小，說(shuō)明pDNA-Ru 與mDNA3 的結(jié)合較弱，雜交穩(wěn)定性明顯降低，使得具有頸環(huán)構(gòu)象的pDNA-Ru 形成剛性線形雙鏈DNA的概率大大降低，導(dǎo)致?ΔIECL減小，ΔRct降低。

2.5 不同類型或不同位點(diǎn)單堿基錯(cuò)配DNA 的識(shí)別和穩(wěn)定性差異

圖6 為探針pDNA-Ru 分別與0.2 nmol·L?1的cDNA 和不同類型或不同位點(diǎn)單堿基錯(cuò)配DNA 雜交前后的?ΔIECL和ΔRct。可 知，pDNA-Ru 與cDNA 雜交前后，?ΔIECL和ΔRct分別為1 260 a.u.和676 Ω。探 針 pDNA-Ru 與 mDNA1、mDNA2、mDNA3、mDNA4、mDNA5 雜交前后，?ΔIECL和ΔRct分別為1 177，991，660，906，788 a.u.和587，365，164，295，271 Ω。探針pDNA-Ru 與mDNA6、mDNA7 雜交前后，?ΔIECL和ΔRct分別為813，594 a.u.和288，157 Ω。因此可根據(jù)?ΔIECL和ΔRct對(duì)不同類型、不同位點(diǎn)單堿基錯(cuò)配DNA 進(jìn)行識(shí)別和穩(wěn)定性差異研究。

圖6 pDNA-Ru 與cDNA（0.2 nmol·L?1）和單堿基錯(cuò)配DNA（0.2 nmol·L?1）雜交前后的?ΔIECL（a）和ΔRct（b）Fig.6 ?ΔIECL（a）和ΔRct（b）of pDNA-Ru before and after hybridization with cDNA（0.2 nmol·L?1）and different singlebase mismatch DNAs（0.2 nmol·L?1）

比 較 pDNA-Ru 與 mDNA1、mDNA2、mDNA3、mDNA4、mDNA5 雜交前后的?ΔIECL和ΔRct，可知在DNA 鏈中間位點(diǎn)的C-A 單堿基錯(cuò)配mDNA3 的?ΔIECL和ΔRct最小，而鏈兩端位點(diǎn)C-A單堿基錯(cuò)配DNA 的?ΔIECL和ΔRct相對(duì)較大，說(shuō)明鏈中間位點(diǎn)的C-A 單堿基錯(cuò)配的穩(wěn)定性小于鏈兩端位點(diǎn)的，該結(jié)論 與ABAD-VALLE 等［24］和LI等［25］的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

KELLEY 等［26］認(rèn)為，錯(cuò)配的單堿基對(duì)離電極表面越近，對(duì)雜交的穩(wěn)定性影響越大，而ITO 等［12］和TAWA 等［27］得到了相反的結(jié)論，認(rèn)為在DNA 雜交過(guò)程當(dāng)中，單堿基錯(cuò)配出現(xiàn)在離固體基底最遠(yuǎn)的位置，即越接近溶液的單堿基錯(cuò)配越不穩(wěn)定，越容易被識(shí)別。通過(guò)比較本文圖6 中mDNA1 和mDNA5、mDNA2 和mDNA4 的?ΔIECL和ΔRct的變化可知，靠近鍵合電極表面雙鏈鏈端的C-A 單堿基錯(cuò)配的穩(wěn)定性小于非鍵合電極表面雙鏈鏈端的，此結(jié)果與KELLEY［26］等的研究結(jié)果相同。

WU 等［20］采用可見(jiàn)光譜與可視化技術(shù)研究了與胞嘧啶C 單堿基錯(cuò)配的識(shí)別，得到的穩(wěn)定性順序?yàn)镃-G?C-T>C-A>C-C。HUANG 等［5］用氧化石墨烯熒光淬滅技術(shù)進(jìn)行了與胞嘧啶C 單堿基錯(cuò)配的識(shí)別檢測(cè)，得到的穩(wěn)定性順序?yàn)镃-G?C-A≈C-C≈C-T。本文研究了單堿基錯(cuò)配DNA 中心位點(diǎn)分別為C-A、C-T、C-C 3 種錯(cuò)配情況對(duì)雜交穩(wěn)定性的影響，通過(guò)比較研究cDNA、mDNA3、mDNA6 和mDNA7 的?ΔIECL和ΔRct變化，發(fā)現(xiàn)C-T 單堿基錯(cuò)配的穩(wěn)定性略高于C-A 和C-C 的，穩(wěn)定性順序?yàn)镃-G ?C-T>C-A≥C-C。該結(jié)果 與WU 等［20］的研究結(jié)果較接近。

3 結(jié)論

將具有莖環(huán)構(gòu)象、標(biāo)記有聯(lián)吡啶釕分子的DNA鏈作為探針，構(gòu)建DNA 生物傳感器，通過(guò)該pDNARu 與cDNA 和單堿基錯(cuò)配DNA 雜交前后ECL 和EIS 信號(hào)變化的差異進(jìn)行單堿基錯(cuò)配DNA 識(shí)別，并研究了不同類型和不同位點(diǎn)單堿基錯(cuò)配的穩(wěn)定性差異。結(jié)果表明，DNA 鏈中心位點(diǎn)的C-A 單堿基錯(cuò)配穩(wěn)定性小于鏈兩端的，靠近鍵合電極表面雙鏈鏈端的C-A 單堿基錯(cuò)配穩(wěn)定性小于非鍵合電極表面雙鏈鏈端的，同一中心位點(diǎn)的堿基對(duì)穩(wěn)定性順序?yàn)镃-G ?C-T>C-A≥C-C。研究結(jié)果可為核酸多態(tài)性研究提供參考。