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        動物血液采集及血清分離技術(shù)

        2021-12-01 10:45:30李紅艷張濤濤韓竹平胡芝金蔣宗仁
        貴州畜牧獸醫(yī) 2021年3期
        關(guān)鍵詞:血清

        李紅艷,張濤濤,張 艷,韓竹平,胡芝金,蔣宗仁

        (1. 貴州省綏陽縣動物疫病預(yù)防控制中心,貴州 綏陽 563300; 2. 貴州省綏陽縣畜牧漁業(yè)站,貴州 綏陽 563300)

        在基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測工作中,常常需要對動物進(jìn)行采血及血清分離,如果血液采集方法不當(dāng)、樣品編號遺忘或錯誤、樣品保存不符合要求、分離血清方法不規(guī)范等,會造成血液或血清樣品編號不明、分離不出血清、溶血、凝膠、腐敗變質(zhì)、檢測量不足等問題,從而導(dǎo)致重復(fù)抽血,影響動物正常生產(chǎn)生活,同時(shí)也會引起養(yǎng)殖戶的反感,造成防疫工作障礙和不必要的人力、物力、財(cái)力浪費(fèi),增加工作量,影響工作進(jìn)度,降低工作效率。為了改善和解決這一問題,筆者將多年來長期從事動物血液采集及血清樣品分離技術(shù)的一些經(jīng)驗(yàn)和有效做法介紹如下,供同行參考。

        1 動物血液采集技術(shù)

        1.1 采血管選擇根據(jù)不同的檢測項(xiàng)目選用合適的采集管。如:采集全血選用含有抗凝劑的一次性真空采血管(EDTA-紫色蓋)用于檢測非洲豬瘟病毒等;制備血清選用不含任何添加劑的一次性真空采血管(紅色蓋)或一次性采血器,用于檢測小反芻獸疫病毒抗體等。

        1.2 時(shí)間及動物選擇選擇早晨未飼喂(空腹)或者停食6 h后(保證飲水充足),體脂不能過多的動物。

        1.3 消毒保定好動物,對采血部位用剪毛剪剪毛(家畜)或拔毛(家禽)后用2%~5%碘伏棉球由里向外做點(diǎn)狀螺旋式消毒,停頓片刻后,再用75%酒精棉球由里向外做點(diǎn)狀螺旋式脫碘。

        1.4 采血方法

        1.4.1 真空采血管采集酒精脫碘停頓片刻(酒精揮發(fā)后),將采血針頭從采血部位穿刺進(jìn)入血管,見回血后,用采血針的橡膠帽端穿刺連接并稍微傾斜真空采血管,負(fù)壓使血液沿管壁自動抽血,待血量達(dá)到所需標(biāo)示后,用無菌干棉簽同時(shí)按壓皮膚針眼和血管壁針眼,迅速先拔出采血部位針頭,套上護(hù)針帽,再拔出采血管端針頭投入利器盒集中消毒無害化處理。無菌干棉簽繼續(xù)壓迫3 min以上,防止皮下淤血。如需多管積集血樣,可將連接真空采血管的橡膠帽端針頭拔出再刺入另一采血管即可。

        1.4.2 采血器采集酒精脫碘停頓片刻后從采血部位進(jìn)針,見回血后慢拉采血器活塞開始積集血液,采血量達(dá)到所需標(biāo)示后,用無菌干棉簽同時(shí)按壓皮膚針眼和血管壁針眼,同時(shí)繼續(xù)慢拉采血器活塞防止筒內(nèi)血樣因壓力差溢出,拔出針頭,用無菌干棉球繼續(xù)壓迫3 min以上,防止皮下淤血。另一人給采血器套上護(hù)針帽,將活塞外拉預(yù)留血清析出空間,去除推桿投入廢物盒集中消毒無害化處理[1]。

        1.5 信息記錄(1)抗凝血采集完后,立即緩緩轉(zhuǎn)動采集管,讓血液和抗凝劑充分混勻,然后在采血管上用油性記號筆按規(guī)定標(biāo)明樣品編號,放入裝有試管架的冷藏箱(4 ℃)中。(2)制備血清血采集完后,立即在采血管上用油性記號筆按規(guī)定標(biāo)明樣品編號,然后放入裝有試管架的保溫箱中(25~37 ℃)。 (3)按相關(guān)要求用簽字筆規(guī)范、真實(shí)、完整填寫采樣表,所填樣品編號應(yīng)與所采血樣編號對應(yīng)。

        2 血清分離技術(shù)

        (1)制備血清血采集完并編號后,立即輕放入能固定采血管的試管架內(nèi)(如原裝采血管泡沫盒)。(2)將試管架放在25~37 ℃室溫下靜置3~12 h(靜置時(shí)間與室溫成反比),讓血清自然析出。如果氣溫低于25 ℃,可用礦泉水瓶、高溫瓶等裝1~3瓶60~100 ℃ 熱水放在疫苗保溫箱里可達(dá)所需溫度,注意放瓶時(shí)瓶和血樣距離5 cm以上,避免燙壞血樣。(3)血樣靜置3~12 h后,剔除溶血樣品,挑選血清析出效果好、管內(nèi)血樣基本一致的采血管對稱放入普通離心機(jī)。對血清析出效果不好或凝血塊未下沉堵住血清上溢的采血管,可在生物安全柜內(nèi)將1份血樣用1根無菌牙簽(注意不能混用)輕繞管壁1周松動血塊,蓋好蓋子靜置15~30 min,挑選血樣基本一致的采血管對稱放入普通離心機(jī)。(4)以2 000~3 000 r/min離心5~10 min,離心后靜置15~30 min,待氣溶膠沉淀后取出采血管,按編號順序放入泡沫試管架。(5)在生物安全柜內(nèi)打開采血管,直接用手(戴好橡膠手套)或移液器小心將血清緩慢倒入或移入潔凈、干燥的1.5~2 mL無菌EP離心管中,注意勿倒入(或移入)凝血塊。然后在EP離心管上用油性記號筆按采血管上的原始編號對應(yīng)編號。(6)將已編號血清放入2~8 ℃冷藏柜(箱)中,在最短時(shí)間內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。血清樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后若暫時(shí)不進(jìn)行處理或檢測,則應(yīng)放入 -15 ℃冷凍柜中保存。

        3 注意事項(xiàng)

        (1)上述所有接觸動物和樣品的環(huán)節(jié)均應(yīng)做好個(gè)人防護(hù),穿戴好防護(hù)服,做好動物的消毒、防護(hù)及環(huán)境、用具的無害化處理等。(2)采血前應(yīng)事先通知養(yǎng)殖場(戶),準(zhǔn)備好被采血動物,保證充足的飲水,做好清潔衛(wèi)生、消毒工作等。采血時(shí)盡量不打亂飼養(yǎng)習(xí)慣,如盡量在早上9:00放養(yǎng)羊前進(jìn)行采血。(3)氣溶膠擴(kuò)散力較強(qiáng),操作人員在采集血液時(shí)要站在上風(fēng)方向,分離血清時(shí)要在生物安全柜下操作。(4)采集血液前采血部位要剪毛或拔毛,嚴(yán)格由里向外做點(diǎn)狀螺旋式消毒,嚴(yán)禁手或物品等接觸針頭,避免皮毛、手或物品上的異物、病原微生物等隨針頭混進(jìn)采集管使樣品出現(xiàn)腐敗、溶血等現(xiàn)象,從而影響動物疫病監(jiān)測進(jìn)度和監(jiān)測結(jié)果。(5)動物耳靜脈、翅下靜脈采血完畢針頭拔出后采血部位容易出現(xiàn)淤血,特別是禽類容易出現(xiàn)且短期內(nèi)難以恢復(fù),引起畜主的反感情緒。為了得到畜主對動物采血工作的支持和配合,要求操作人員在采集血液時(shí)技術(shù)熟練、利索,能達(dá)到“一針見血”,采血后嚴(yán)格止血3 min以上等。(6)集血時(shí)采血管應(yīng)稍微傾斜,避免血液直接滴入底部產(chǎn)生氣泡,或紅細(xì)胞受撞擊發(fā)生破裂引起溶血等。(7)劇烈晃動、冷凍溫度不合適會使紅細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)物質(zhì)釋放入血漿,發(fā)生溶血現(xiàn)象,影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,在混勻血液和抗凝劑時(shí)應(yīng)緩緩轉(zhuǎn)動采集管;在血樣運(yùn)輸途中、血清移出前應(yīng)盡量保持靜置狀態(tài);抗凝血混勻后冷藏保存,血清樣品析出途中應(yīng)在25~37 ℃條件下保存。(8)血清在析出過程中,如果血液中比紅細(xì)胞比重小的纖維蛋白原不能聚集紅細(xì)胞形成比重較大的血凝塊,會發(fā)生凝固不全形成膠凍狀樣品。原因可能是采血時(shí)動物剛進(jìn)食不久、飲水過少、脂肪過多、血液保存溫度過低或者保存靜置時(shí)間不夠等。要避免此種現(xiàn)象,就應(yīng)嚴(yán)格在早晨飼喂前(空腹)或停食后6 h(保證飲水充足)采集體脂不能過多的動物血,血樣采集后立即放在室溫(25~37 ℃)靜置3~12 h。(9)注意動物、采樣表、血液樣品編號、血清樣品編號“四統(tǒng)一”,相互對應(yīng),以防混淆。(10)血清不宜反復(fù)凍融,否則會使血清中的脂蛋白和纖維蛋白變性,導(dǎo)致出現(xiàn)絮狀沉淀物,影響血清檢測效價(jià)[2]。

        4 小結(jié)

        在動物采血及血清分離工作中,采血動物的選擇是前提,是采集有效血量、合格血液的基礎(chǔ);保定牢固、部位準(zhǔn)確、規(guī)范操作、方法得當(dāng)是保障,是采集足量合格血液的保證;控溫保存、平穩(wěn)運(yùn)輸是關(guān)鍵,是分離出合格血清的重要環(huán)節(jié);工作細(xì)致、環(huán)節(jié)緊扣、步步對應(yīng)是結(jié)果,是圓滿完成血液采集與血清分離的基本要求。

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