張偉 盛迎濤 薛建秀

聽力障礙是人類常見的疾病之一。全球約3.5億人有聽力障礙，約50%～60%與遺傳因素有關，新生兒患病率為0.11%～0.2%[1]。遺傳性耳聾分為綜合征型耳聾（syndromic hearing loss,SHL）和非綜合征型耳聾（nonsyndromic hearing loss,NSHL）。聽力障礙的發(fā)生與多種基因突變有關。Sommen等[2]研究指出，人類有約600個基因位點與遺傳性耳聾的發(fā)生有關，其中與NSHL相關的位點達150余個。對新生兒進行聽力篩查操作簡便、成本低，世界各國均已廣泛開展。為應對遺傳性耳聾，我國早已立法規(guī)定全國范圍內(nèi)對新生兒進行聽力篩查。臨床實踐發(fā)現(xiàn)新生兒聽力篩查對遲發(fā)性耳聾與藥物性耳聾無法及早發(fā)現(xiàn)。耳聾基因檢測技術的發(fā)展有效彌補了聽力篩查的不足，其有助于遺傳性耳聾的早期診斷、早期干預。本研究回顧性分析7 457例新生兒聽力與耳聾基因篩查結果，以了解本地區(qū)耳聾基因常見的突變類型，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 回顧2017年7月至2020年8月在杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院出生并行聽力篩查與耳聾基因篩查的新生兒共7 457例。其中男3 917例，女3 540例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，新生兒家長均簽署知情同意書，自愿行耳聾基因篩查。

1.2 方法

1.2.1 聽力篩查 新生兒在出生后48 h內(nèi)常規(guī)行瞬態(tài)誘發(fā)耳聲發(fā)射篩查，篩查時新生兒處于安靜狀態(tài)，將探頭放入外耳道，儀器自動檢測篩查是否通過，重復2～3次。若初次篩查未通過者予以相應記錄，告知家長在出生后42 d左右再次進行復篩。復篩前至本院耳鼻喉科門診常規(guī)清潔外耳道，檢查有無耳部畸形等情況。復篩采用判別聽性腦干誘發(fā)電位進行。將電極放置于前額發(fā)際、第7頸椎后部及乳突或耳垂，儀器檢測，得出結果。

1.2.2 耳聾基因篩查 新生兒出生后3 d內(nèi)，采集足跟血2～5滴，運用血液核酸提取試劑盒進行基因組核酸提取，用PCR技術檢測4個耳聾基因（包括15個突變位點），包括GJB2基因的35del G、235del C、176_191del 16、299_300del AT；GJB3 基因的 538C＞T；SLC26A4基因的 IVS7-2A＞G、1229C＞T、2168A＞G、IVS15+5G＞A、1174A＞T、1975G＞C、1226G＞A、2027T＞A；mtDNA12SrRNA基因的1494C＞T、1555A＞G。本研究篩查采用博奧生物有限公司晶芯十五項遺傳性耳聾相關基因檢測試劑盒。

2 結果

2.1 聽力篩查結果 7 457例新生兒中，聽力初篩通過7 437例，未通過初篩20例（0.27%）。未通過者全部復篩，復篩仍有12例未通過（0.16%）。

2.2 常見耳聾基因篩查結果 7 457例新生兒中檢出常見耳聾基因陽性者323例，攜帶率4.33%。GJB2 235delC和SLC26A4 IVS7-2A＞G為本地區(qū)高發(fā)病率耳聾基因突變位點，見表1。篩查結果以短信方式告知家長，通知耳聾基因位點突變者家長前往?？崎T診進行遺傳學咨詢，但其中失訪36例。

表1 新生兒耳聾基因篩查各基因突變類型、位點及攜帶率

2.3 聽力與耳聾基因聯(lián)合篩查結果 7 457例新生兒聽力與耳聾基因聯(lián)合篩查，聽力復篩未通過者12例，其中4例未檢測到突變基因，4例GJB2基因235del C位點雜合突變，2例GJB3基因538C＞T位點雜合突變，1例SLC26A4基因 IVS7-2A＞G位點雜合突變，1例SLC26A4基因 1174A＞T位點雜合突變，均指導其后續(xù)治療。雙雜合突變者5例，其中235del CIVS7-2A＞G雙雜合3例、235del C2168A＞G雙雜合1例、IVS7-2A＞G1555A＞G雙雜合1例，均通過聽力篩查，建議定期隨訪。12例有聽力障礙家族史，新生兒聽力篩查均通過。

3 討論

聽力障礙是人類最常見的感覺障礙。永久性感音神經(jīng)性耳聾的患病率在新生兒中高達1.86%，青少年中達3.5%[3]。與以往的聽力篩查相比，耳聾基因篩查在分子病原學層面可以早期識別NSHL，彌補對遲發(fā)性耳聾及藥物性耳聾的漏檢，從而達到預防和及早干預的目的。近來研究分析我國西北地區(qū)重度和極重度聽力障礙患者，發(fā)現(xiàn)致病基因GJB2、GJB3、SLC26A4和mtDNA12S rRNA突變頻率分別為27.13%、2.01%、20.85%和2.26%[4]。本研究7 457例新生兒中，耳聾基因攜帶率為4.33%。基因突變位點檢出率自高到低依次為235del C雜合突變、IVS7-2A＞G雜合突變、1555A＞G均質(zhì)突變、299_300del AT雜合突變和538C＞T雜合突變。

研究表明，GJB2是我國最常見的NSHL的致病基因[5]。在歐洲、美洲、非洲的大量NSHL患者中也存在GJB2突變[6]。GJB2 235del C雜合突變也是伊朗最常見突變，但因某些民族內(nèi)部傳統(tǒng)如群體內(nèi)婚姻，結果導致某些位點的高度同質(zhì)性和群體內(nèi)的突變，例如，312del14在伊朗亞茲德省的突變攜帶率達56%[7]。南西伯利亞聽力障礙患者中，GJB2突變的516g＞C、-23+1G＞A，235del基因占主導地位[8]。本研究數(shù)據(jù)顯示，GJB2突變攜帶率達2.37%。235del C雜合突變、299_300del AT雜合突變和176_191del 16雜合突變的攜帶率分別為1.90%、0.24%和0.23%。235del C雜合突變是本地區(qū)最常見的雜合突變類型，同時也是最常見的復合突變基因位點，與以往研究相符[9]。本研究數(shù)據(jù)未檢測到35del G突變。有研究報道，GJB2突變患者的聽力損失程度比SLC26A4或12S rRNA突變患者的聽力損失程度更嚴重[10]。

本研究篩查檢測到GJB3 538C＞T雜合突變新生兒18例，突變攜帶率0.24%。與文獻報道的數(shù)據(jù)一致[11]。且本研究篩查顯示SLC26A4基因突變?yōu)?8例，占1.31%。SLC26A4 IVS7-2A＞G雜合突變攜帶率達1.05%，僅次于235del C突變。大前庭水管綜合征（large vestibular aqueduct syndrome，LVAS）被認為與SLC26A4基因突變有關，突變是高度異質(zhì)性的，并且在種族群體中存在差異。捷克人群SLC26A4基因突變中，最常見位點為412G＞T，南美及北美人群中最常見的分別為1826T＞G和1001+1G＞A突變[12]，韓國人群為2168A＞G位點突變[13]。本研究中，有1例IVS7-2A＞G位點雜合突變新生兒，其聽力篩查通過，且父母聽力無異常，而該新生兒姐姐已確診LVAS，為SLC26A4 2168A＞G雜合突變，由此推斷，SLC26A4基因突變，再次懷孕后新生兒突變位點可有所不同。醫(yī)生已建議其父母行耳聾基因檢測，并告知家長新生兒盡量避免頭部受到撞擊、外傷，予以動態(tài)觀察，若發(fā)現(xiàn)有聽力下降情況，立即治療。

mtDNA12S rRNA基因為母系遺傳，攜帶者對于氨基糖苷類藥物極其敏感。研究表明，1555A＞G突變攜帶率以亞洲人為主，而我國攜帶人群占亞洲的85.3%[14]，應引起足夠重視。本研究篩查發(fā)現(xiàn)有25例新生兒mtDNA12S rRNA基因突變，其中1555A＞G均質(zhì)突變20例，攜帶率0.27%，1494C＞T均質(zhì)突變5例，攜帶率0.07%。告知其父母，新生兒禁用氨基糖苷類藥物治療，并提供用藥提示卡附于病歷本，方便就診時出示，避免造成耳聾。本研究發(fā)現(xiàn)有4例1555A＞G位點均質(zhì)突變的新生兒，其舅舅均有藥物致聾病史。1例1555A＞G位點均質(zhì)突變新生兒的2位表哥，分別為GJB2基因 235del C位點雜合突變，12S rRNA基因1555A＞G位點均質(zhì)突變，聽力篩查均通過。

聽力障礙的病因非常復雜，目前發(fā)現(xiàn)與耳聾相關的基因也越來越多，因此找出其致病機制是一項長期而艱巨的任務。我國是人口大國，先天性耳聾患兒的發(fā)現(xiàn)及診斷問題亟需解決。該病會加重家庭經(jīng)濟負擔，嚴重影響患兒生活質(zhì)量，在大多數(shù)情況下，通過早期診斷、及時干預和康復治療，可以有效避免耳聾引起的語言發(fā)育遲緩及行為障礙。Safka等[15]研究發(fā)現(xiàn)，應用高通量測序檢查，21%捷克患者中存在STRC、MYO15A、LOXHD1、TMPRSS3 和 CDH23基因突變，其中6%的患者STRC基因突變，證實可能因區(qū)域不同，存在其他常見基因突變。本研究檢測4個耳聾基因15個突變位點，相比以往國內(nèi)其他地區(qū)檢測位點已較多，但仍有4例聽力復篩未通過者沒檢測到突變基因，可能存在其他較少見基因位點突變，已建議其進一步檢測。

綜上所述，新生兒行聽力及耳聾基因聯(lián)合篩查，可檢測出耳聾基因位點，進行聽力學評估，及早發(fā)現(xiàn)潛在風險，針對性進行遺傳學咨詢，并為新生兒提供有價值的具體預后信息。本研究可為杭州市蕭山區(qū)耳聾基因突變頻率提供參考。