李蘭蘭 虎亞光 魏秀娟 賈新燁 譚建偉

甘肅省婦幼保健院，甘肅 蘭州730050

王不留行（又名不留行，王不流行，王母牛，大麥牛，金剪刀草，金盞銀臺(tái)，麥藍(lán)子）為石竹科植物麥藍(lán)菜Vaccaria segetalis（Neck）Garcke的干燥成熟種子。廣泛分布于亞洲、歐洲等地，我國(guó)除華南外，全國(guó)各地區(qū)都有分布。王不留行呈球形，直徑約2mm，表面黑色，少數(shù)紅棕色，略有光澤，有細(xì)密顆粒狀突起，一側(cè)有一凹陷的縱溝，質(zhì)硬，胚乳白色，胚彎曲成環(huán)，子葉2，氣微，味微澀、苦。炒王不留行呈類球形爆花狀，表面白色，質(zhì)松脆。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，言其“主金瘡，止血逐痛。出刺，除風(fēng)痹內(nèi)寒。”王不留行性味苦，平。歸肝、胃經(jīng)。具有活血通經(jīng)，下乳消腫，利尿通淋的作用；化學(xué)成分多樣，至少含有63種不同的化合物，包括三萜皂苷、環(huán)肽、黃酮類等化合物［1-2］。

1 對(duì)乳汁分泌量的影響

《本草綱目》言曰“王不留行能走血分，乃陽明沖任之藥，俗有穿山甲、王不留行，婦人服了乳長(zhǎng)流。”在傳統(tǒng)應(yīng)用中，王不留行具有顯著催乳作用。給健康泌乳期荷斯坦奶牛每日添加19g王不留行水提取物，與對(duì)照組相比，在飼養(yǎng)22d、30d時(shí)，產(chǎn)奶量提高了8.44%和13.95%；增加每日王不留行添加量至38g，與對(duì)照組相比，在飼養(yǎng)22d、30d時(shí)，產(chǎn)奶量提高了7.14%和11.3%［3］，提示王不留行可能對(duì)奶牛產(chǎn)奶量的影響有“封頂”效應(yīng)，適宜的量效關(guān)系還需進(jìn)一步研究。Wistar大鼠灌服王不留行提取物200mg/（kg·d），連續(xù)14天，每天泌乳量從（1.818±0.027）g/pup增加至（10.182±0.187）g/pup［4］。王不留行水提取物（1g/mL）可增加兔泌乳量，且呈一定的量效關(guān)系，連續(xù)灌服5天后各組泌乳量均顯著增加［5］。單味王不留行動(dòng)物臨床應(yīng)用的研究較多，對(duì)哺乳期動(dòng)物的泌乳量有明顯的促進(jìn)作用，但也存在“封頂”效應(yīng)。王不留行用于產(chǎn)婦產(chǎn)后缺乳多配伍當(dāng)歸、通草、路路通等使用，其用量一般為10～60g［6］。

2 促進(jìn)泌乳的作用機(jī)制

乳汁的分泌與乳腺上皮細(xì)胞的數(shù)量、體積、活力以及細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)密切相關(guān)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)包括泌乳素介導(dǎo)的Jak2/Stat5細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；雌激素介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；過氧化物酶體增殖物激活受體等。王不留行水提取液可顯著提高奶牛乳腺上皮細(xì)胞活力以及增殖能力，促進(jìn)絲裂原活化蛋白激酶和cyclin D1的表達(dá)；促進(jìn)乳蛋白合成信號(hào)因子p-STAT5、p100、GAS、S6K1、AKT1、GARs、p-mTOR、泌乳素受體以及雌激素受體的表達(dá)，且效果優(yōu)于雌激素和泌乳素；王不留行激活或增強(qiáng)與雌激素相同的靶蛋白，提示王不留行具有和雌激素、泌乳素相似的作用，并在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平調(diào)節(jié)泌乳基因表達(dá)［7-8］。泌乳素與其受體結(jié)合，激活Jak2激酶，導(dǎo)致Stat5的磷酸化，激活cyclin D1，啟動(dòng)cyclin D1的轉(zhuǎn)錄［9］，而且通過改變信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的活性來調(diào)控cyclin D1在細(xì)胞核的募集，進(jìn)而調(diào)節(jié)乳腺發(fā)育。Stat5還可能在泌乳期通過協(xié)調(diào)脂肪酸和蛋白質(zhì)合成進(jìn)而決定乳汁的組成。雌激素可以激活雌激素受體，促進(jìn)導(dǎo)管的伸長(zhǎng)；活化的雌激素受體激活PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使3-磷酸磷脂酰肌醇（PIP3）激活A(yù)kt1并經(jīng)過一系列的級(jí)聯(lián)反映激活p-mTOR，最終激活其下游的S6K1促進(jìn)蛋白的合成；活化的雌激素受體還可激活Src/Ras/ERK信號(hào)通路，進(jìn)一步激活MAPK從而調(diào)節(jié)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖；活化的雌激素受體還可能通過一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)進(jìn)而激活Jak2/Stat5信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

王不留行化學(xué)成分多樣，包括三萜皂苷類、環(huán)肽類、黃酮類、香豆素類等化合物，其中環(huán)肽類成分具有雌激素樣作用［10-11］。王不留行黃酮苷類成分能夠促進(jìn)小鼠乳腺上皮細(xì)胞中cyclin D1的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖，并通過激活Jak2-stat5信號(hào)通路β-酪蛋白基因的表達(dá)；但皂苷類成分對(duì)小鼠乳腺上皮細(xì)胞的增殖有抑制作用，這兩種成分如何協(xié)同發(fā)揮作用有待進(jìn)一步研究；香豆素類成分對(duì)小鼠乳腺上皮細(xì)胞的增殖和β-酪蛋白的表達(dá)均無明顯作用［12］。王不留行催乳作用主要與黃酮類、環(huán)肽類及皂苷類成分等相關(guān)，通過促進(jìn)絲裂原活化蛋白激酶和cyclin D1、乳蛋白合成信號(hào)因子、泌乳素受體以及雌激素受體的表達(dá)促進(jìn)泌乳。

3 對(duì)乳汁成分的影響

乳蛋白、乳糖和乳脂是構(gòu)成乳汁的主要成分，普通牛乳中乳蛋白、乳脂肪和乳糖的含量分別為3.2%、3.9%和4.6%。乳蛋白主要由酪蛋白和乳清蛋白組成，β-乳球蛋白是乳清蛋白的主要蛋白，一定程度上反映乳腺上皮細(xì)胞的泌乳能力。乳蛋白的來源有兩個(gè)：一是由乳腺從頭合成，如酪蛋白、β-乳球蛋白等，這一部分蛋白是乳腺所特有的；二是來自血液中的蛋白質(zhì)，主要有免疫蛋白和血漿蛋白等。乳糖含量可體現(xiàn)乳腺上皮細(xì)胞泌乳量的高低。通過考察乳汁乳蛋白、乳糖和乳脂的改變可評(píng)價(jià)王不留行對(duì)乳汁成分的影響。高學(xué)軍等［13］研究顯示，連續(xù)注射王不留行提取單體鄰苯二甲酸二丁酯，5d后奶牛的泌乳能力提高，其中泌乳量增加了17.82%，乳脂率增加了6.39%，乳糖增加了6.97%，乳蛋白和非脂固形物變化不明顯。李楠等［14］研究顯示，王不留行2mg/mL（生藥濃度）時(shí)，β-酪蛋白的表達(dá)和乳糖分泌量達(dá)最高值。王不留行增乳活性單體成分鄰苯二甲酸二丁酯對(duì)可顯著提高β-酪蛋白的表達(dá)以及乳糖的分泌［2］。郭玉新［3］研究顯示，與對(duì)照組相（n=8）比，試驗(yàn)組［低劑量組（n=8）：5.7g/（d·頭），中劑量組（n=8）19g/（d·頭），高劑量組（n=8）38g/（d·頭）］乳汁乳蛋白和乳脂率差異不顯著，各個(gè)試驗(yàn)組乳糖含量隨著時(shí)間延長(zhǎng)均有提高，但差異不顯著。王芳芳等［15］研究了王不留行黃酮苷對(duì)哺乳母豬乳汁成分的影響，結(jié)果提示，飼糧添加王不留行黃酮苷對(duì)初乳和常乳中乳脂肪、乳糖及乳蛋白含量無顯著影響，初乳中乳脂肪含量高于對(duì)照組，但初乳和常乳中胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ含量高于對(duì)照組。在6～36h的觀察時(shí)間內(nèi)，王不留行活性單體鄰苯二甲酸二丁酯組乳腺上皮細(xì)胞中乳糖含量顯著高于對(duì)照組，隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)，乳糖表達(dá)量在48h后較對(duì)照組不顯著［16］。目前王不留行對(duì)乳汁成分的影響研究結(jié)果并不一致，可能與王不留行的提取部位不同有關(guān)。單體鄰苯二甲酸二丁酯在用藥初期可提高乳糖的分泌量，用藥2天后乳糖恢復(fù)至用藥前；水提取液可提高乳汁β-酪蛋白的表達(dá)和乳糖分泌量；黃酮苷初乳和常乳的主要成分無顯著影響。另外，已有研究的入組數(shù)量均較少，王不留行各提取部位對(duì)乳汁成分的影響還需進(jìn)一步的大樣本研究。

4 對(duì)血液指標(biāo)的影響

有研究發(fā)現(xiàn)［3，17］，王不留行提取物對(duì)奶牛血液生化指標(biāo)的影響不顯著；與對(duì)照組相比，低劑量組泌乳素和生長(zhǎng)激素水平有所提高，中劑量組和高劑量組泌乳素和生長(zhǎng)激素水平均顯著提高。大鼠灌服王不留行100mg/kg提取液兩周后血清、乳腺和腦垂體中泌乳素含量與對(duì)照組之間存在顯著差異［4］。王不留行黃酮苷（0.2g/kg）連續(xù)飼喂哺乳母豬21d，與對(duì)照組相比，第1、10天血清雌激素含量無明顯差異，第21天血清雌激素含量高于對(duì)照組，第1、21天血清中生長(zhǎng)激素含量高于對(duì)照組［15］。王不留行對(duì)血液生化指標(biāo)無顯著影響，中、高劑量時(shí)可顯著提高泌乳素和生長(zhǎng)激素水平，對(duì)雌激素的影響可能與用藥療程相關(guān)。

谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是機(jī)體細(xì)胞內(nèi)清除自由基的主要內(nèi)源抗氧化物酶。丙二醛（MDA）是各種氧自由基損傷機(jī)體的重要指標(biāo)。王不留行黃酮苷可顯著升高血清中GSH-Px活性，降低MDA含量［15］，這可能與王不留行中含有多羥基酚類有關(guān)，其可與自由基結(jié)合，抑制自由基的產(chǎn)生，終止自由基連鎖反應(yīng)。奶牛日糧中添加王不留行提取物有提高泌乳中期奶牛血清中IgA水平的趨勢(shì)，對(duì)IgG和IgM無影響［3］。

綜上所述，王不留行可顯著增加泌乳量，潛在機(jī)制與其促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞增殖、促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)重塑、促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞吸收細(xì)胞外游離氨基酸有關(guān)，可顯著影響血清激素水平，不影響血液生化指標(biāo)。另外，王不留行有助于機(jī)體自由基的清除，提高IgA水平。不同提取部位對(duì)乳汁成分的影響有待進(jìn)一步研究。