萬遂如

(中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會，吉林 長春 130122)

養(yǎng)豬生產中長期在飼料或飲水中添加抗生素，用于促進動物生長和藥物預防保健，治療動物疾病時又大量濫用抗生素已造成嚴重后果，不僅導致許多病原微生物耐藥性增強，誘發(fā)“超級細菌”的出現，而且造成嚴重的藥物殘留以及對生態(tài)環(huán)境的污染，威脅著動物生產安全、動物性食品安全、生態(tài)環(huán)境安全、公共衛(wèi)生安全和人類健康，應引起大家高度重視。目前，我國畜牧業(yè)生產正在深入貫徹落實農業(yè)農村部頒布的《獸用抗菌藥使用減量化行動試點工作方案(2018—2021年)》，并已取得初步成果。促生長用抗菌藥物、人獸共用抗菌藥物及易產生交叉耐藥性的抗菌藥物等都要退出養(yǎng)殖生產，這對加快我國畜牧業(yè)生產轉型升級、高質量、高速度、健康綠色發(fā)展具有重要的戰(zhàn)略意義。不濫用抗生素如何保障豬只健康生長，防止疾病的發(fā)生與流行、提高其生產效率和經濟效益？使用生物獸藥與中獸藥制劑代替獸用抗生素，可有效保障養(yǎng)豬生產中的安全與健康發(fā)展。本文就生物抗菌藥物中的溶菌酶制劑在養(yǎng)豬生產中的科學應用問題談點個人意見，僅供養(yǎng)豬場參考。

1 溶菌酶定義

溶菌酶(Lysozyme)又稱為胞壁質酶或N-乙酰胞壁質聚糖水解酶或糖苷水解酶，為細菌的代謝產物，是一種對細菌細胞壁有水解作用的蛋白質，也是生物體內重要的非特異性免疫因子之一，被WHO(世界動物衛(wèi)生組織)、FAO(聯合國糧農組織)公認為無毒、無害、無殘留、安全性高、專一作用于目的微生物細胞壁的天然蛋白質，可用作添加劑應用于食品領域。2010年我國已批準其為食品添加劑。溶菌酶易溶于水，不易溶于丙酮和乙醚等有機溶劑?；瘜W性質非常穩(wěn)定，對熱也穩(wěn)定，在干燥室溫條件下可長期保存。在pH 4～7范圍內，100 ℃處理1 min仍能保持原酶活性。 pH為3時能耐100 ℃加熱處理45 min。其等電點為10.5～11，最適溫度為45～50 ℃、pH為6.6，在酸性環(huán)境中對熱的穩(wěn)定性很強，但在堿性環(huán)境中對熱的穩(wěn)定性較差。

2 溶菌酶的分類

溶菌酶在自然界分布極為廣泛，存在于人和動物的許多組織分泌液和一些植物、微生物、噬菌體的體液中，比如鳥類和家禽的蛋清中就含有豐富的溶菌酶；哺乳動物的淚液、唾液、血漿、乳汁、胎盤、體液及組織細胞內；海洋生物貝類、魚蝦、海星、海膽、海參等組織中；以及許多植物細胞內等都含有溶菌酶。目前根據溶菌酶來源不同可將其分為動物源溶菌酶、植物源溶菌酶、微生物溶菌酶、基因工程溶菌酶及噬菌體溶菌酶等。

2.1 動物源溶菌酶

雞蛋清中溶菌酶占雞蛋清的3.5%左右，人和動物的眼淚、鼻黏液、唾液、血漿、乳汁、體液等分泌物及胎盤、肝、腎、淋巴組織等均含有溶菌酶。

2.2 植物源溶菌酶

目前已發(fā)現含有溶菌酶的植物有170多種，在木瓜、無花果、胡蘿卜及大麥等植物中都分離出溶菌酶。植物溶菌酶分子量較大，對革蘭氏陽性菌抑制作用很強。

2.3 微生物溶菌酶

目前商業(yè)化應用的許多溶菌酶均來自于微生物，主要是通過大腸桿菌表達系統(tǒng)和酵母表達系統(tǒng)而獲得的。微生物溶菌酶分為5種：①N-乙酰己糖胺酶，此酶可破壞細菌細胞壁肽聚糖中的β-1，4糖苷鍵；②酰胺酶，此酶可切斷細菌細胞壁肽聚糖中NAM與肽“尾”之間的N-乙酰胺壁酸-L-丙氨酸鍵；③內肽酶，可使肽“尾”與肽“橋”內的肽鍵斷裂；④β-1，3、β-1，6葡聚糖酶和甘露聚糖酶，能分解酵母細胞的細胞壁；⑤殼聚糖酶，可分解霉菌細胞壁，防霉解除毒素。

2.4 基因工程溶菌酶

利用基因工程技術研究擴大溶菌酶產量，并通過對溶菌酶進行適當的化學改造或蛋白修飾擴大溶菌酶的抗菌譜，加大其對革蘭氏陰性細菌的殺傷能力。宋增健等(2018)以甲醇誘導蛋清溶菌酶基因重組畢赤酵母NCY-3為研究菌株，通過優(yōu)化發(fā)酵條件來提高溶菌酶的表達量，為溶菌酶的工業(yè)化生產提供了成功經驗。

2.5 噬菌體溶菌酶

噬菌體又稱細菌病毒，是一種在細菌體內完成增殖，通過裂解細菌將自身釋放到環(huán)境中的微生物。噬菌體感染細菌宿主后通過其溶菌酶、穿孔素、膜融合蛋白等裂解細菌膜及肽聚糖層，在細胞內壓的作用下使細菌細胞破裂，從而釋放子代噬菌體。

3 溶菌酶的作用機理

溶菌酶是一種堿性水解酶，它能催化水解細胞，水解細菌細胞壁中的N-乙酰細胞壁酸(NAM)和N-乙酰氨基葡萄糖胺(NAG)之間的β-1，4糖苷鍵，破壞肽聚糖支架，在內部滲透壓的作用下導致細菌的細胞壁破裂，細胞質外泄，造成細菌破裂而死亡?，F在研究證實，溶菌酶對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、巴氏桿菌、李氏桿菌、沙門氏菌、布魯氏菌、肺炎球菌、魏氏梭菌、結核分枝桿菌及破傷風梭菌等均有很強的抑制與殺滅作用。溶菌酶能與帶負電荷的病毒蛋白質直接結合，與其DNA、RNA脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失去活性。現研究發(fā)現，溶菌酶對流感病毒、腺病毒、皰疹病毒、偽狂犬病病毒、細小病毒和輪狀病毒等具有抑制作用。溶菌酶還能與各種誘發(fā)炎癥的酸性物質相結合，使其失去活性，而增強動物機體的免疫力，改善組織基質的黏多糖代謝，從而達到消炎、修復組織、提高胃腸道功能的作用。溶菌酶作為一種非特異性免疫因子，可參與動物機體的各種免疫反應，在動物機體正常的防御功能和非特異性免疫中，具有保持機體生理平衡的重要作用，能增強巨噬細胞的吞噬與消化功能；激活白細胞的吞噬功能、改善細胞抑制所導致的白細胞減少；激活淋巴細胞和肥大細胞的活性，提高免疫應答能力，從而增強動物機體的免疫力與抗病力。溶菌酶還能特異性水解引發(fā)飼料霉變的青霉菌、曲霉菌等真菌細胞的胞壁，與聚合磷酸鹽和甘氨酸等配合使用，還具有良好的防腐作用。

4 溶菌酶在養(yǎng)豬生產中的科學應用

溶菌酶在殺滅細菌與抑制病毒繁殖的同時，不影響動物腸道益生菌的生態(tài)平衡，不產生耐藥性，不出現藥物殘留，無毒、無害、安全性高，作用效果好。因此，目前溶菌酶已被廣泛用于醫(yī)藥學、獸醫(yī)學、生物獸藥工程、畜牧業(yè)生產與食品工業(yè)等許多領域。此外，溶菌酶又具有耐酸耐熱的理化特性，使其在飼料加工過程中以及通過畜禽胃內酸性環(huán)境時仍可保持很高的酶活性。所以在畜牧業(yè)生產中可用作飼料添加劑防腐殺菌，防止飼料霉變，延長飼料儲存期；用于防治動物疾病，提高生產性能與免疫力，都可發(fā)揮重要作用。溶菌酶在養(yǎng)豬生產中的科學應用，本文主要從保健預防與疾病治療兩個方面作一介紹，養(yǎng)豬場可結合養(yǎng)豬生產中存在的實際問題與豬群的健康狀況選用。

4.1 保健預防

4.1.1 保育豬的保健預防 哺乳仔豬斷奶時易發(fā)生斷奶應激、溫度應激、飼料應激、營養(yǎng)應激和環(huán)境應激等；同時由于母源抗體保護力下降，機體各器官的生理功能尚發(fā)育不完善，易誘發(fā)仔豬腹瀉、多系統(tǒng)衰竭綜合征及呼吸道病綜合征等多種疾病的發(fā)生，造成仔豬死亡、生長緩慢、成活率低。因此，在仔豬斷奶時，母豬先離開哺乳舍，仔豬在原舍內停留3天，然后轉入保育舍飼養(yǎng)。從這時開始對斷奶仔豬實施藥物保健7～10天，可以有效防止仔豬的斷奶應激與腹瀉等疾病的發(fā)生，保障仔豬健康生長、提高成活率。保健預防方案推薦如下，可結合實際選用。

方案2：斷奶前兩天，注射豬用轉移因子方法同上一方案。同時在飼料中添加甘草多糖粉800克、免疫核糖核酸600克、溶菌酶400克，拌入1噸料中，連續(xù)飼喂7～10天(秋、冬與早春季節(jié)使用)。

方案3：電解質多維700克、葡萄糖粉600克(對水1噸)、干擾素粉800克(每100克對水150千克)、豬用轉移因子300克(每100克對水400千克)、溶菌酶300克(100克對水400千克)，混合飲水10天(顆粒飼料不好添加藥物時，可使用飲水添加實施保健預防)。

以上方案具有抗病毒、抗細菌、抗應激、抗氧化、提高機體免疫力與抗病力之功能。

4.1.2 肥育豬與后備母豬的保健預防 保育豬在結束保育期前7天驅蟲1次，然后轉入肥育舍實施保健預防7天；肥育中期再保健預防7天，然后驅蟲1次，直至出欄上市不再進行藥物保健預防與驅蟲，按正常生產加強飼養(yǎng)管理即可。引進后備種母豬群在隔離檢疫期間驅蟲1次，保健預防7天；發(fā)情配種前20天保健預防7天，然后驅蟲1次，發(fā)情時及時配種即可。保健預防方案推薦如下，結合生產實際選用。

方案1：板藍根多糖粉1 200克、豬用干擾素1 000克、豬用轉移因子400克、溶菌酶400克，拌入1噸料中，連續(xù)飼喂7天。

方案2：柴葛解肌散(柴胡、葛根、黃芩、甘草等)800克、免疫核糖核酸700克、白細胞介素-4(400克)、溶菌酶400克，拌入1噸料中，連續(xù)飼喂7天。

方案3：金銀花粉1 000克、甘草粉200克、白細胞介素-4(400克)、電解質多維800克，混合對水1噸，連續(xù)飲用7～10天。

以上方案具有清熱解毒、散風化痰、止咳平喘，保肝利膽，抗病毒、抗細菌、抗應激、抗氧化與提高免疫力之功能。可有效預防豬流感、呼吸道病綜合征、高熱綜合征、免疫抑制性疾病、腹瀉性疾病以及多種病原體混合感染和繼發(fā)感染而引發(fā)的傳染性疾病。

4.1.3 生產母豬的保健預防 生產母豬配種前15天、妊娠后2個月，產仔前15天及產后各實施保健預防7天，其他期間不要使用藥物保健預防。保健預防主要是清除母體內的病原體，提高機體免疫力，保護母體和胎兒的健康。預防母豬產前便秘、流產、難產、胎衣不下以及“三炎征”即子宮內膜炎、乳腺炎與陰道炎的發(fā)生。保健預防方案推薦如下，可結合母豬健康狀況選用。

秀容月明氣得肺都炸了，揮拳沖向叢時敏?？伤恕败浌穷^”，沒打幾下就藥性發(fā)作，只能任由叢時敏把自己打翻在地，再在他脖子上套上鐵枷，手腳上鎖了鐵鏈。

方案1：黃芪多糖粉(也可用香菇多糖粉)1 200克、豬用干擾素1 000克、豬用轉移因子400克、溶菌酶400克，拌入1噸料中，連續(xù)飼喂7天。

方案2：魚腥草粉1 500克、清抑(圓環(huán)-藍耳復合抗體、MHC-Ⅱ類分子、白細胞介素-4等)600克、溶菌酶400克，拌料1噸，連續(xù)飼喂7天。

方案3：電解質多維800克、葡萄糖粉800克、轉移因子400克、溶菌酶400克、維生素C 200克，對水1噸，連續(xù)飲用7～10天。

以上方案具有清熱解毒、潤肺通便、抗病毒、抗細菌、抗應激、抗氧化，提高免疫力與抗病力之功能。

4.2 發(fā)病豬只的治療

目前，我國養(yǎng)豬場發(fā)生的疾病絕大多數都是由多種病原體共感染與繼發(fā)感染而引發(fā)的，單一病原體引發(fā)的疫病很少見。加之病原體廣泛發(fā)生變異，新的毒株和新的血清型不斷地出現，濫用抗生素又造成耐藥性菌株與“超級細菌”的產生，以及霉菌毒素的危害，導致免疫抑制和免疫力低下，養(yǎng)殖環(huán)境的嚴重污染等多重因素的影響下，致使豬群疫病的發(fā)生呈現病原體多元化、臨床癥狀復雜化、病情嚴重化，給豬病的診斷與防治增加了一定的難度。因此，養(yǎng)豬場發(fā)生疫病流行時，一定要主動的采取隔離、封鎖、診斷、消毒、撲殺與凈化等綜合措施進行處理。對病豬要做到早發(fā)現、早診斷、早治療，采取細胞因子療法、中獸藥制劑療法、抗病毒療法、抗細菌療法與支持療法等進行對癥治療，方可收到良好的臨床治療效果?，F代研究發(fā)現溶菌酶對豬偽狂犬病病毒、豬細小病毒、輪狀病毒、圓環(huán)病毒2型、口蹄疫病毒和豬流感病毒等均有抑制作用，對豬場常見多發(fā)的許多致病性細菌有殺滅作用。因此，獸醫(yī)臨床上應用溶菌酶與中獸藥制劑(如常用的清開靈、銀黃、大敗毒、板藍根、大青葉、穿心蓮、魚腥草、銀翹、柴胡、黃芪多糖、香菇多糖、甘草多糖等注射液)和細胞因子制劑(如豬用干擾素、轉移因子、白細胞介素-4、免疫核糖核酸及高免球蛋白等制劑)聯合使用，通過注射或拌料或飲水給藥，可治療豬的高熱綜合征、呼吸道病綜合征、豬流感、腹瀉性疾病、生殖系統(tǒng)疾病和免疫抑制性疾病，以及多種病原體共感染與繼發(fā)感染引發(fā)的傳染性疾病。實踐證實臨床治療效果良好，可替代抗生素使用。據王曉可等報道，在飼糧中按每噸料添加500克溶菌酶飼喂斷奶仔豬，可使斷奶仔豬日增重提高16.6%，料重比降低12%，腹瀉發(fā)病率降低92%。

4.3 使用溶菌酶注意事項

(1)溶菌酶制劑禁止與堿性及含碘物等直接接觸使用，否則使溶菌酶失效。

(2)溶菌酶與細胞因子制劑無配伍禁忌，可聯合使用，兩者具有協(xié)同作用，并可提高藥物的防治效果。

(3)溶菌酶與中獸藥制劑可以聯合使用，并能明顯的加快中藥發(fā)揮藥效的速度，達到標本兼治，提高臨床防治效果。獸醫(yī)臨床實踐證實，溶菌酶與細胞因子和中獸藥制劑三者聯合使用防治效果更佳，而且安全無不良反應。

(4)溶菌酶對乳酸桿菌、雙歧桿菌和蠟樣芽孢桿菌等益生菌在同等濃度下沒有抑制作用，對沒有細胞壁的動物體細胞不產生不利影響，因而使用溶菌酶防治動物疾病安全性很高。