王康婷，伍福琳，周忠波,2，陳玉成,2①

(1.西南大學資源環(huán)境學院，重慶 400716；2.農(nóng)村清潔工程重慶市工程研究中心/ 重慶市生態(tài)環(huán)境農(nóng)用地土壤污染風險管控重點實驗室，重慶 400716)

隨著環(huán)境問題的日益凸顯，人們對環(huán)境質量的要求越來越高，不合理的沼液農(nóng)用產(chǎn)生的環(huán)境負面影響逐漸引起人們的關注。在實際生產(chǎn)中，沼液灌溉量為120～300 t·hm-2，折算成施氮量為600～1 500 kg·hm-2(以氮質量含量0.5%進行折算)，是歐洲農(nóng)業(yè)政策部規(guī)定的糞肥年施氮量限量標準(170 kg·hm-2)的3.5～8.8倍，也遠遠超出我國肥料領域專家朱兆良[1]認為的農(nóng)田氮肥安全施用量(150～180 kg·hm-2)。高負荷沼液灌溉存在一定環(huán)境風險。沼液含有豐富的氮、磷等營養(yǎng)元素，過量施用會引起土壤富營養(yǎng)化，出現(xiàn)燒苗、抑制作物生長等現(xiàn)象，也會明顯增加沼液中氮素的淋失風險和徑流污染風險[2]。同時，施用過量沼液將顯著降低土壤細菌群落多樣性，土壤中優(yōu)勢菌群將通過改變種群結構的方式來適應由于過量沼液灌溉所引起的土壤養(yǎng)分含量等變化。隨著灌溉時間的增加，施用過量沼液對土壤微生物種群結構的影響也會越來越大[3]。因此，高負荷(短期高頻)沼液灌溉對土壤生態(tài)環(huán)境的影響值得探討。黑麥草是長江流域主栽牧草，生長周期短，營養(yǎng)豐富，適應性強，對養(yǎng)殖廢水有良好的消納作用[4]?；诖?，筆者采用土柱試驗和高通量測序方法，研究高負荷豬場沼液灌溉對紫色土和紫色土-黑麥草系統(tǒng)氮素積累、淋溶以及土壤微生物種群多樣性、群落組成的影響，以期為紫色土沼液安全施用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

土壤采自西南大學國家紫色土肥力監(jiān)測基地(29°49′18″ N，106°25′45″ E)，pH為7.33，有機質為21.59 g·kg-1，全氮、全磷和全鉀質量含量分別為2.33、0.77和14.71 g·kg-1。采得的土壤經(jīng)自然風干后，挑出碎石和植物殘渣等雜質，過5 mm孔徑篩備用。沼液取自重慶市某養(yǎng)豬場，pH為8.58，總氮、銨態(tài)氮、硝態(tài)氮和總磷質量濃度分別為611.05、565.24、38.58和76.25 mg·L-1。復合肥由邦力達農(nóng)資連鎖有限公司提供，總養(yǎng)分質量含量≥40%，m(N)∶m(P2O5)∶m(K2O)為28∶6∶6。

1.2 試驗方法

1.2.1試驗裝置

選取h=80 cm、Φ=20 cm的硬聚氯乙稀圓柱作為土柱，內部由下至上依次鋪設孔徑為120 μm尼龍網(wǎng)、10 cm高度石英砂(粒徑為1.7 mm)、60 cm高度紫色土(容重為1.25 g·cm-3)、2 cm高度石英砂(粒徑為0.88 mm，以達到均勻布水的目的)。土柱外壁從上到下每隔20 cm土層設置1個內徑5 cm的取樣孔，土柱底部設置直徑為2 cm的取樣孔配以閥門用于收集淋溶液(圖1)。

1.2.2試驗設計

試驗設3個處理、2個對照(表1)，重復2次。各處理按等氮量原則灌溉78 d，累計灌溉量為7 800 mL，累計施氮量為1 517.88 kg·hm-2(CK2除外)。T3處理黑麥草播種量為40?！ぶ?1，播種后再鋪設石英砂。試驗前用水飽和穩(wěn)定7 d。每次灌溉前采集上一次灌溉產(chǎn)生的淋溶液和3層土壤樣品用于分析測定。

表1 不同處理的灌溉方式

1.2.3測試指標與方法

土壤全氮含量采用常規(guī)凱氏定氮儀法測定[5]。沼液及土壤淋溶液中總氮含量采用堿性過硫酸鉀消解-分光光度法測定(GB 11894—89《水質 總氮的測定 堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法》)。淋溶液硝態(tài)氮含量采用酚二磺酸光度法測定，銨態(tài)氮含量采用靛酚藍比色法測定。

沼液灌溉結束后，采用五點法(先確定對角線的中點作為中心抽樣點，再在對角線上選擇4個與中心樣點距離相等的點作為樣點)取各處理上層土壤(0～20 cm)送往上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進行土壤微生物Illumina MiSeq 高通量測序。所采用引物為338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)。對細菌的16S rRNA V3～V4 區(qū)進行擴增。反應體系：采用20 μL PCR反應體系，5×FastPfuButter 4 μL，dNTPs(2.5 mmol·L-1)2 μL，上游引物(5 μmol·L-1)8 μL，下游引物(5 μmol·L-1)8 μL，F(xiàn)astPfupolymerase 0.4 μL，牛血清蛋白(bovineserum alblumin, BSA)0.2 μL，DNA模板10 ng，用ddH2O補充至20 μL。PCR儀采用ABI GeneAmp?9700型。PCR反應程序：細菌熱循環(huán)包括在95 ℃條件下初始變性3 min，隨后35個循環(huán)在95 ℃條件下變性30 s，在55 ℃條件下退火30 s，在72 ℃條件下延伸45 s，最后在72 ℃條件下最終延伸10 min。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2016進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與計算，采用IBM SPSS Statistics 23進行方差分析和多重比較(P< 0.05)，使用Origin 2018繪圖。

氮素淋失率(R)計算公式為

(1)

式(1)中，Vi為第i次收集到的淋溶液體積，mL；ρi為第i次收集到的淋溶液中總氮濃度，mg·mL-1；Ni為第i次灌溉累計施氮量，mg。

采用RDP classifier貝葉斯算法對97% 相似水平的OTU(operational taxonomic units)代表序列進行分類學分析，對比silva數(shù)據(jù)庫，得到每個OTU對應的物種分類信息。利用mothur(v. 1.30.1)指數(shù)進行分析，以相似度0.97進行分析得到Chao1指數(shù)、Shannon指數(shù)和Coverage指數(shù)。

Chao 1指數(shù)可指示樣品物種豐富度，是用Chao1算法估計樣本中OTU數(shù)的指數(shù)，其公式為

SChao1=Sobs+[n1(n1-1)]/[2(n2+1)]。

(2)

式(2)中，SChao 1為OTU估計數(shù)；Sobs為實際觀測到的OTU數(shù)；n1為只含有一條序列的OTU數(shù)；n2為只含有兩條序列的OTU數(shù)。

Shannon指數(shù)(HShannon)是用于估算樣本中微生物多樣性的指數(shù)之一。

(3)

式(3)中，Sobs為實際觀測到的OTU數(shù)；ni為第i個OTU所含序列數(shù)；N為所有序列數(shù)。

各樣本覆蓋率(C)反映了該次測序結果是否代表了樣本中微生物的真實情況，其計算公式為

C=1-n1/N。

(4)

式(4)中，n1為只含有一條序列的OTU數(shù)；N為抽樣中出現(xiàn)的總序列數(shù)。

2 結果與討論

2.1 沼液灌溉對土壤氮素積累的影響

試驗發(fā)現(xiàn)，T1、T2和T3處理上層(0～20 cm)土壤全氮含量顯著高于CK2(P<0.05)，且各處理上層土壤全氮含量隨灌溉時間的增加呈現(xiàn)先升高再穩(wěn)定后下降的趨勢(圖2)。其中，在試驗36、54 d時T3處理土壤全氮含量最高，為2.95 g·kg-1，種植黑麥草能提高上層土壤中氮素含量。彭玲等[6]發(fā)現(xiàn)黑麥草栽培后果園土壤氮素主要積累在0～20 cm土層，減少了氮素的淋溶損失，有一定的保肥作用。試驗78 d時，T1、T2和T3處理全氮含量較CK1降低3.00%～4.38%。沼液灌溉條件下氮素在土壤上層的積累量略低于復合肥，T3處理全氮含量迅速下降，可能是隨著黑麥草的生長發(fā)育其對沼液中氮素吸收利用量大于本身的保肥能力所致。

各施肥處理中層(>20～40 cm)土壤全氮含量總體上低于上層土壤，但同樣顯著高于CK1。54 d時，各處理全氮含量達到最大值，其中，又以T2處理為最大。灌溉結束時，T2處理全氮含量仍最大，較CK2增長15.7%；而T1和T3處理比CK2分別提升9.06%和6.89%。這說明等量分次沼液灌溉處理有利于提升中層土壤全氮含量。

T1、T2處理和CK1底層(>40～60 cm)土壤全氮含量隨著灌溉時間的增加呈逐漸上升趨勢，78 d時土壤全氮含量分別比CK2高10.63%、10.70%和12.31%，T3處理全氮含量始終與CK2相當。相關研究表明施用沼液的土壤全氮殘留量低于化肥處理，沼液中氮素更利于植物的吸收利用[7]。沼液中營養(yǎng)元素多以速效養(yǎng)分形式存在，為作物的生長發(fā)育提供了直接營養(yǎng)；同時，施用沼液能改善土壤環(huán)境，促進植物根系發(fā)育，進而促進植物對營養(yǎng)元素的吸收。筆者研究中，在等量沼液灌溉條件下，種植黑麥草處理全氮含量與無肥灌溉處理的差異較小，這進一步說明栽種黑麥草對土壤上層、中層氮素有較好的固定、吸收和利用效果。

在筆者試驗條件下，沼液灌溉能增加紫色土中全氮含量，且在上層(0～20 cm)、中層(>20～40 cm)增加量更為明顯，下層(>40～60 cm)土壤中全氮含量隨著灌溉時間的增加處理間差異逐漸增大。鄭健等[7]發(fā)現(xiàn)沼液灌溉能顯著增加0～20 cm土層全氮含量，而在50～60 cm土層則無顯著差異。柴彥君等[8]認為施用沼液對毛竹林土壤全氮含量沒有顯著影響。也有部分結果顯示沼液灌溉在一定程度上能顯著增加土壤全氮含量[9]。土壤全氮的變化與生物固氮、礦化、氮固持、硝化和反硝化等過程相關[10]，這些過程的影響因素也較多，且沼液成分和土壤性質有一定的不確定性，沼液還田后土壤全氮的變化過程不確定性較大。在筆者研究條件下，豬場沼液灌溉能有效提升紫色土中氮素積累，但影響氮素積累的因素如土壤類型、沼液成分等尚無一致結論，仍待進一步深入研究。

2.2 沼液灌溉對土壤氮素淋溶的影響

圖3顯示，T3處理、CK2淋溶液總氮(TN)含量隨著灌溉的持續(xù)進行而略有上升。T1、T2處理和CK1淋溶液總氮含量則在灌溉一段時間后存在明顯上升趨勢。在前30 d，所有處理淋溶液總氮含量緩慢上升。36 d時，CK1淋溶液總氮含量激增，與上一次收集到的淋溶液相比，TN含量提高約1倍。T1處理淋溶液TN含量在42 d時開始迅速升高，且在72 d時超過CK1。而T2處理則從60 d后開始顯示出明顯的上升趨勢，之前收集到的淋溶液總氮含量略低于CK2，說明通過等量多次方式進行沼液灌溉能夠在一定程度上減緩土壤中氮素的淋溶損失。雖然T1、T2處理也出現(xiàn)了淋溶液總氮含量的激增，但比CK1出現(xiàn)總氮淋溶激增延遲6和24 d。T3處理淋溶液總氮含量始終低于T1、T2和CK1，與CK2基本持平，可能是黑麥草對由沼液澆灌所帶來的氮素有較好的吸收利用所致。相關研究表明，沼液因其對植物根系發(fā)育的促進作用，使得其中的營養(yǎng)物質易于被作物吸收[11]，進而減少土壤中無機氮含量，降低氮素淋失風險。此外，由于植物蒸騰作用會吸收水分，降低了土壤含水量，通過降低水分的縱向流失減少氮素淋失。

氮素累積淋失率(圖3)的變化趨勢與淋溶液中總氮含量變化趨勢基本吻合。在等量灌溉情況下，T1、T2和T3處理氮素累積淋失率比CK1更低。其中，T3處理氮素累積淋失率在0.8%～1.3% 之間，低于其他沼液灌溉處理，說明植物可以降低氮素損失率，提高氮素利用率。

在整個灌溉期內，銨態(tài)氮含量在前、中期保持平穩(wěn)，后期逐漸上升(圖3)。在48 d后，淋溶液中銨態(tài)氮含量明顯升高，但仍小于3.0 mg·L-1，且遠小于沼液中銨態(tài)氮含量。淋溶液中銨態(tài)氮占總氮比例最高為7.22 %，銨態(tài)氮并非氮素的主要流失形式。硝態(tài)氮含量總體上隨灌溉時間的增加而增加(圖3)。T1、T2處理淋溶液硝態(tài)氮含量在灌溉36 d時出現(xiàn)激增，與淋溶液中總氮含量變化趨勢一致；灌溉54 d時各處理硝態(tài)氮含量略有下降；60 d時，T1、T2和T3處理硝態(tài)氮含量達到整個灌溉周期的最大值，隨后硝態(tài)氮含量逐漸下降。淋溶液中硝態(tài)氮占總氮比例較大，最高可達97.92%，遠高于淋溶液中銨態(tài)氮占淋溶總氮的比例，說明硝態(tài)氮在土壤中易隨水流向下遷移。隨著灌溉時間的增加，淋溶液中硝態(tài)氮含量增幅較小，而淋溶液中總氮含量大幅提升，淋溶液中硝態(tài)氮占總氮比例逐漸降低，可能是因為沼液中有機氮向下淋失造成淋溶液中總氮含量上升。

外源氮素輸入量直接影響氮素的淋失風險。在等氮量條件下，復合肥處理淋失的氮素更多，沼液灌溉則可延緩氮素縱向遷移與淋失(圖3)。在相同養(yǎng)分投入下，化肥比沼液灌溉更容易引發(fā)淋溶液富營養(yǎng)化[12]。土壤氮素淋溶受降雨、土壤類型、作物體系和肥料種類等多種因素影響[13]。氨氮在土壤中易被膠體吸附和被礦物晶穴固定，且在土壤硝化作用下轉變?yōu)橄鯌B(tài)氮，在土壤中積累[14]。氮素的過量施用會導致土壤體系的高凈礦化和硝化作用[15]，且硝態(tài)氮帶負電荷，不易被土壤膠體吸附，灌溉管理、季節(jié)降雨和土壤質地等因素共同影響硝酸鹽淋失。韋高玲等[16]的研究表明，硝態(tài)氮淋失量最高可達淋失總氮量的99.3%。有研究表明在小麥-玉米輪作系統(tǒng)滲濾液中硝酸鹽濃度和硝酸鹽浸出通量均隨沼液濃度增加而增加，一般在施用后10 d時達到峰值[15]。有研究表明與直接施用糞肥相比，等量沼液施用能有效減少氮素徑流流失和淋溶損失[17]。也有研究顯示，在無植物條件下沼液灌溉處理氮素淋失率比施用化肥處理高30%以上[18]，而筆者研究并未觀測到類似現(xiàn)象，可能與供試沼液的成分、灌溉條件和土壤類型等有關。因此，沼液灌溉是否會加劇氮素淋溶損失，尚需更多更深入的研究。

2.3 沼液灌溉對土壤微生物的影響

2.3.1沼液灌溉對土壤微生物多樣性的影響

在土壤微生物多樣性方面，各處理Chao 1指數(shù)由大到小依次為T3、T1、CK1、CK2和T2(表2)，Chao 1指數(shù)越大，則樣品豐富度越大，因此，T3處理土壤微生物群落豐富度最大，T1、T3處理大于CK1、CK2，T2處理最小。Shannon指數(shù)由大到小依次為CK2、T3、T1、T2和CK1(表2)。

T1、T2、T3處理土壤微生物群落物種多樣性較CK1有所提高，3者土壤微生物所受擾動更小，合理的沼液灌溉能提升土壤微生物多樣性。李美霖[19]采用Biolog法研究秸稈還田配施沼液條件下稻田土壤群落變化，與施用商品有機肥相比，施用沼液能顯著提升稻田土壤微生物代謝活性和微生物多樣性。過量的沼液灌溉可能對微生物多樣性有不利影響。王飛等[20]向水稻土長期灌溉沼液，在高量(22.5 t·hm-2)施用情況下，Shannon指數(shù)顯著低于對照組，土壤微生物活性降低。筆者研究中，與T1、T2處理相比，T3處理Chao 1指數(shù)和Shannon指數(shù)顯著提高，說明種植黑麥草能增加土壤微生物豐富度和多樣性，在一定程度上改善沼液灌溉對土壤微生物多樣性和均勻度的擾動。T3處理微生物多樣性、豐富度高于其他沼液處理，可能是因為沼液灌溉向土壤中提供了微生物生長所需的碳源，同時增加土壤中速效養(yǎng)分含量，促進植物根系生長以及根系分泌物的產(chǎn)生，進而提高土壤微生物數(shù)量和活性[21]。各沼液灌溉處理中，T2處理Chao 1指數(shù)和Shannon指數(shù)低于T1、T3處理；這可能與等量分次灌溉使土壤上層長期處于淹水狀態(tài)有關，這種狀態(tài)將對好氧細菌和兼性厭氧細菌造成一定的不利影響。余薇薇等[22]研究發(fā)現(xiàn)，沼液灌溉使紫色土和河沙土壤上層、中層含氧量降低，從而降低一些好氧或兼性厭氧細菌活性，微生物豐富度和多樣性均降低。也有研究表明，隨著沼液灌溉年限的增加，細菌群落物種豐富度和多樣性均逐漸降低[23]。

2.3.2沼液灌溉對土壤微生物群落組成的影響

由OTU水平的Venn圖(圖4)可知，各處理OTU總數(shù)由多到少依次為T3(2 391)、CK2(2 291)、T1(2 251)、CK1(2 086)和T2(1 978)。各施肥處理中，僅T3處理高于無肥灌溉處理(CK2)；等量一次沼液灌溉處理(T1)OTU總數(shù)高于復合肥處理(CK1)；等量分次沼液灌溉處理(T2)OTU總數(shù)最低。這說明與施肥處理相比，種植黑麥草處理(T3)能有效豐富微生物種群數(shù)量，這與Chao 1、Shannon指數(shù)所反映的結果一致。所有處理共有OTU數(shù)為1 218，占各處理共有微生物OTU總數(shù)的50.94%～61.58%；不同處理條件下有2.04%～5.67%的OTU為該處理特有OTU。這說明在各處理條件下，微生物群落組成較為相似，但仍有部分微生物物種發(fā)生了一定變化，產(chǎn)生了不同的特有物種。宋三多[24]研究發(fā)現(xiàn)，沼液灌溉的土壤OTU數(shù)均高于對照組，筆者試驗結果與之基本一致，僅T2處理OTU數(shù)低于對照，可能是沼液灌溉方式對土壤微生物OTU數(shù)量有一定影響。

所有處理微生物優(yōu)勢物種相似，基本上為變形菌門(Proteobacteria)、酸桿菌門(Acidobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)、綠彎菌門(Chloroflexi)、芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)、髕骨細菌門(Patescibacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、棒狀桿菌門(Rokubacteria)、疣微菌門(Verrucomicrobia)、浮霉菌門(Planctomycetes)和匿桿菌門(Latescibacteria)，但不同處理優(yōu)勢物種相對豐度則有所不同(圖5)。

對比發(fā)現(xiàn)，與無肥灌溉(CK2)相比，各施肥處理放線菌門相對豐度略有提升。復合肥處理(CK1)酸桿菌門相對豐度最低。與CK1相比，沼液灌溉處理綠彎菌門相對豐度提高3.3～4.2個百分點。在3個沼液灌溉處理中，T2處理髕骨細菌門相對豐度大幅提升。

施肥強度和方式不同將影響土壤養(yǎng)分含量和組成，進而影響土壤微生物。施肥能顯著提升放線菌門相對豐度[25]，筆者研究結果與之一致。酸桿菌門豐度與土壤有機質含量呈正相關[26]。復合肥降低了酸桿菌門豐度，可能與其成分以無機N、P和K為主有關，對土壤有機質含量影響較?。欢右菏┤氲耐瑫r向土壤中輸入了一定的有機質，有助于提高酸桿菌門豐度。綠彎菌門更傾向于在營養(yǎng)充足的環(huán)境中生長[27]。沼液中營養(yǎng)成分豐富，有利于綠彎菌門生長，提高其相對豐度。

灌施沼液后，種植水稻、小麥和皇竹草的土壤主要菌門為變形菌門、酸桿菌門、放線菌門、綠彎菌門和擬桿菌門[24]，筆者試驗結果與之基本一致。沼液中主要菌門為厚壁菌門(Firmicutes)、柔壁菌門(Tenericutes)、擬桿菌門、廣古菌門(Euryarchaeota)、疣微菌門、變形菌門和螺旋菌門(Spirochaetae)。沼液灌溉引起土壤某些微生物相對豐度的增加可能與以下兩點有關：一是來自于沼液的微生物定殖于土壤中所致；二是沼液提供了微生物繁殖所需的營養(yǎng)物質進而引起部分微生物相對豐度增加。

基于bray_curtis算法對各樣本進行層級聚類(圖6)，顏色由藍到紅分別代表距離由遠到近，即樣本間微生物群落組成的相似度由低到高。T2與其他處理(CK1、CK2、T1、T3)的距離較遠，說明等量多次灌溉對土壤微生物群落組成的影響較大。將T2處理與其他處理進行屬水平上的費舍爾精確檢驗，結果見圖7。

與CK1，CK2，T1、T3處理相比，T2處理鞘氨醇單胞菌(Sphingomonas)相對豐度顯著降低15.31、11.20、13.61和10.00個百分點。分別與CK2，T1、T3處理相比，T2處理norank_o__Saccharimonadales相對豐度顯著提高9.72、6.98和6.37個百分點。與T1、T3處理相比，T2處理norank_c__KD4-96相對豐度無顯著差異。與T1、CK2處理相比，T2處理norank_c__TK10相對豐度無顯著差異。

鞘氨醇單胞菌屬于好氧革蘭陰性菌，等量分次沼液灌溉處理使得土壤長期處于厭氧淹水狀態(tài)，不利于鞘氨醇單胞菌生長，進而使其相對豐度顯著降低。土壤中脲酶活性與norank_o__Saccharimonadales相對豐度呈顯著正相關[28]，且厭氧條件下可以提高土壤中脲酶活性[29]，等量分次沼液灌溉處理norank_o__Saccharimonadales相對豐度增加可能與灌溉方式引起的溶解氧含量較低有關。

3 結論

(1)在沼液灌溉前期(18 d)，3種處理方式均很快表現(xiàn)為氮素在土壤上層(0～20 cm)和中層(>20～40 cm)積累，僅在灌溉后期(78 d)，沼液灌溉處理才表現(xiàn)為下層(>40～60 cm)土壤氮素積累。

(2)在氮素淋溶方面，雖然等量一次灌溉、等量分次灌溉的淋溶液總氮含量在42、60 d時出現(xiàn)激增，但比大田復合肥處理出現(xiàn)氮淋溶激增時間延遲6、24 d；沼液灌溉條件下淋溶液硝態(tài)氮含量在灌溉60 d時達到峰值；淋溶液中硝態(tài)氮占總氮比例遠高于銨態(tài)氮占總氮比例；種植黑麥草的沼液灌溉處理并未觀測到氮素淋溶的激增，表明種植作物可以延緩氮素向地下水的遷移，降低氮淋失風險。

(3)土壤微生物Chao 1指數(shù)由大到小依次為T3、T1、CK1、CK2和T2；Shannon指數(shù)由大到小依次為CK2、T3、T1、T2和CK1。與施復合肥(CK1)相比，沼液灌溉能提升土壤微生物群落物種豐富度和多樣性，其中，以種植黑麥草的沼液灌溉(T3)最為顯著。等量分次沼液灌溉處理土壤微生物群落結構與其他處理的差異最大，T2處理顯著降低鞘氨醇單胞菌相對豐度，norank_o__Saccharimonadales相對豐度顯著提高。