畢月玲, 許 桐, 陳利琴,3*

(1. 天津市西青醫(yī)院藥劑科, 天津 300380; 2. 天津醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理與衛(wèi)生化學(xué)教研室, 天津 300070; 3. 天津市環(huán)境營養(yǎng)與人群健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 天津 300070)

神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是一類伴隨著兒茶酚胺類(CAs)物質(zhì)大量分泌的疾病[1]。由于兒茶酚胺類物質(zhì)在人體內(nèi)各種生理活動和免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)方面起到非常重要的作用,所以這類物質(zhì)除了能作為診斷神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤疾病的生物標(biāo)志物外,還與多種神經(jīng)系統(tǒng)和自身免疫性疾病有關(guān),例如阿爾茨海默病、抑郁癥、注意力缺陷多動障礙(ADHD)、精神分裂癥、帕金森病、焦慮和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等[2-4]。因此,生物樣本中這些分析物的測定對于支持疾病監(jiān)測和新的治療藥物開發(fā)具有重要的臨床意義。然而,生物樣本中兒茶酚胺類物質(zhì)含量極低,且其他內(nèi)源性物質(zhì)干擾測定,所以生物樣本中的此類痕量物質(zhì)分析往往面臨著巨大的困難,目標(biāo)物信號常常要么達(dá)不到儀器的檢出限,要么淹沒在復(fù)雜浩瀚的干擾物質(zhì)信號當(dāng)中。

兒茶酚胺類物質(zhì)主要包括腎上腺素(E)、去甲腎上腺素(NE)和多巴胺(DA)。另一種神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT)也是近年來研究中使用較多的一類指標(biāo)[5,6]。這一類物質(zhì)化學(xué)極性強(qiáng),在通常的C18等疏水性的固相介質(zhì)上幾乎無保留,所以說這類物質(zhì)的前處理是極具挑戰(zhàn)性的一類工作。而傳統(tǒng)的此類物質(zhì)樣品前處理方法一般都采用離線操作的方式進(jìn)行,耗時費(fèi)力且易造成損耗誤差,導(dǎo)致樣品前處理方法成為整個樣本分析流程的瓶頸問題[7]。而在線樣品前處理與高效色譜檢測方法聯(lián)用能夠?yàn)榻鉀Q此瓶頸問題提供方法和思路,此聯(lián)用方法不僅可以減輕技術(shù)人員的勞動強(qiáng)度,實(shí)現(xiàn)分析過程高度自動化,節(jié)約分析成本;更主要的是可以減少甚至消除由于手工操作中個體差異所產(chǎn)生的誤差,提高分析測試的靈敏度、準(zhǔn)確度與重現(xiàn)性[8]。再者,在線樣品前處理和檢測聯(lián)用方式更容易實(shí)現(xiàn)試劑無毒化操作,減少對操作人員及環(huán)境的危害,從而促進(jìn)綠色化學(xué)的發(fā)展。在線樣品前處理與高效色譜檢測方法聯(lián)用在具備多種檢測分析優(yōu)勢的基礎(chǔ)上,還能提高分析樣品的檢測通量,近年來在樣本分析領(lǐng)域得到了廣泛的發(fā)展應(yīng)用[9,10]。

基于電紡納米纖維固相萃取(packed-fiber solid phase extraction, PFSPE)的技術(shù)正在蓬勃發(fā)展,其核心是以納米纖維取代通行的顆粒狀微米級固相吸附材料進(jìn)行樣品前處理。其可以針對待捕集目標(biāo)分子的理化性質(zhì),用高壓電紡技術(shù)紡制與之有選擇性相互作用的納米纖維,從而為建立極性分子的在線固相萃取分析平臺奠定基礎(chǔ)[11,12]。本文在已有研究基礎(chǔ)[13]上,將PFSPE技術(shù)引入在線樣品前處理體系,并拓寬分析目標(biāo)物質(zhì),開發(fā)在線樣品前處理方法。本研究只用普通的HPLC-FLD系統(tǒng)外加一個切換閥就可以同時實(shí)現(xiàn)NE、E、DA以及5-HT的在線前處理與分離檢測,不僅能為神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)志物的準(zhǔn)確、靈敏檢測提供更為高效的在線樣品前處理檢測體系,還可以拓寬在線樣品前處理技術(shù)的應(yīng)用范圍。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

UltiMate3000雙三元高效液相色譜儀、FLD-3100熒光檢測器、Chromeleon 7.2 SR5色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)(美國Thermo Scientific公司)。DW-P403-1AC高壓電源(天津東文高壓電源廠),微量注射泵WZ-50C6(浙江史密斯醫(yī)學(xué)儀器有限公司), 1-14小型臺式離心機(jī)(美國Sigma-Aldrich公司), Milli-Q Integral超純水系統(tǒng)(法國密理博公司)。

NE、E、DA、5-HT、3,4-二羥基苯乙胺氫溴酸(DHBA)、二苯硼酸2-氨基乙基酯(DPBA)均購自美國Sigma-Aldrich公司。甲醇、乙腈、冰乙酸(色譜純,天津市康科德科技有限公司),聚苯乙烯(PS,相對分子質(zhì)量1.8×105,上海化學(xué)試劑研究所),二苯并-18-冠-6醚(天津希恩思生化科技有限公司)。二苯并-18-冠-6醚聚合物樹脂冠醚(PCE)由天津醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生化學(xué)實(shí)驗(yàn)室合成提供。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)樣品制備和尿液樣本處理

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:分別配制加超純水溶解的1.0 mg/mL的NE、E、DA以及5-HT的母液(E標(biāo)準(zhǔn)品需先用30 μL 0.1 mol/L鹽酸溶解),再吸取各母液適量,充分混勻配制成100 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,密封、避免光照、于冰箱-20 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

內(nèi)標(biāo)(IS)溶液:取內(nèi)標(biāo)物質(zhì)DHBA適量,加入超純水溶解,配制成1.0 mg/mL的IS儲備液,密封、避免光照、于冰箱中-20 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

DPBA溶液:取DPBA適量加水配制成2.0 mg/mL溶液以備后用。

磷酸鹽緩沖液(PBS):先配制0.2 mol/L的NaH2PO3水溶液和Na2HPO3水溶液,二者按61∶39、81∶19、183∶17、947∶53的體積比分別混合,對應(yīng)緩沖液的pH分別為7.0、7.4、7.8和8.0。

人工尿液(AU):參考文獻(xiàn)[14]中的配比進(jìn)行人工尿液的配制,尿酸的加入量參考文獻(xiàn)[15],得到尿酸溶解完全的人工尿液。

尿液樣本:新鮮收集的尿液采用0.22 μm的水膜過濾,再加入等體積的PBS(pH 7.8)與之混勻。

1.3 聚冠醚復(fù)合納米纖維的制備

參考文獻(xiàn)[11]制備聚合冠醚復(fù)合納米纖維。取3.6 g(0.01 mol)二苯并-18-冠-6醚溶于20 mL甲酸溶液中;在三口燒瓶中加入0.6 g多聚甲醛,加入20 mL甲酸,加熱(50 ℃)攪拌使其溶解,然后將配好的20 mL二苯并-18-冠-6醚的甲酸溶液經(jīng)恒壓漏斗緩慢滴加到三口燒瓶中,保持50 ℃繼續(xù)攪拌4～5 h,觀察有絮狀物析出,室溫下繼續(xù)攪拌約20 h,有棕灰色固體沉淀產(chǎn)生,抽濾固體,用30 mL蒸餾水反復(fù)洗滌2～3次,置于送風(fēng)干燥箱中徹底烘干,得到固體產(chǎn)品即為聚合冠醚。

靜電紡絲過程如下:配制5%(v/v)PCE的二甲基亞砜(DMSO)溶液和15%(v/v)聚苯乙烯(PS)的二甲基甲酰胺-四氫呋喃(DMF-THF, 4∶6, v/v)溶液,將兩種溶液按照4∶10(v/v)混勻作為紡絲前體溶液。將該溶液裝入玻璃注射器中,其不銹鋼針頭與高壓電源的陽極相連,鋁箔收集設(shè)備與高壓電源的陰極相連,二者距離為15 cm,電壓為20 kV,進(jìn)液速率為2.0 mL/h, PCE-PS溶液在高壓電場下噴射形成復(fù)合納米纖維。

1.4 PFSPE柱的制備

采用不銹鋼細(xì)棒(直徑為0.5 mm)將適量PCE-PS復(fù)合納米纖維約10 mg分次填充于金屬柱筒(10 mm×2.1 mm)中,壓緊填實(shí),裝上兩端篩板后放入外套管中組裝。將組裝好的PFSPE柱與UltiMate3000高效液相色譜儀相連接。

1.5 PFSPE-HPLC在線聯(lián)用程序

采用儀器自帶的雙位十通切換閥設(shè)計(jì)了PFSPE-HPLC在線聯(lián)用的程序,該程序分為3部分:(1)樣品富集過程(見圖1a),樣品經(jīng)自動進(jìn)樣器注入PFSPE柱中進(jìn)行富集凈化;(2)樣品洗脫轉(zhuǎn)移過程(見圖1b),通過切換十通閥的閥位至2-1,樣品被洗脫液洗脫,轉(zhuǎn)移到分析柱中;(3)樣品分析過程(見圖1a),閥位再次切換回10-1,在分析柱中進(jìn)行目標(biāo)物的分離和檢測,同時PFSPE柱再平衡,預(yù)備下針進(jìn)樣。程序的總運(yùn)行時間為16.00 min。

圖 1 PFSPE-HPLC在線聯(lián)用程序設(shè)計(jì)示意圖Fig. 1 Schematic diagram of PFSPE-HPLC online program design

1.6 色譜條件

色譜柱選用YMC-Pack pro C18色譜柱(100 mm×3.0 mm, 5 μm);柱溫設(shè)為35 ℃;熒光檢測器的激發(fā)波長(λex)設(shè)為286 nm,發(fā)射波長(λem)設(shè)為318 nm;流動相A:準(zhǔn)確稱量0.45 g庚烷磺酸鈉、7.6 g檸檬酸、7.3 g磷酸二氫鈉、0.1 g EDTA、1.9 g氫氧化鈉于燒杯中,再加入55 mL乙腈,用超純水定容至1 L,充分混勻,抽濾,超聲脫氣10 min,此時溶液的pH為4.15;流動相B: 1 mol/L冰醋酸;流速設(shè)為0.5 mL/min;進(jìn)樣量為100 μL。最佳梯度洗脫時間程序方法見表1。

表 1 最佳梯度洗脫時間程序方法

1.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

采用人工尿液配制1、5、10、20、50、100、200 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)混合溶液(其中IS的質(zhì)量濃度均為25 ng/mL),依次注入PFSPE-HPLC在線聯(lián)用系統(tǒng)中,測定各個質(zhì)量濃度下的各目標(biāo)物峰面積。以質(zhì)量濃度X(ng/mL)為橫坐標(biāo),各目標(biāo)物與IS的峰面積比值Y為縱坐標(biāo),分別繪制NE、E、DA和5-HT的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.8 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

采用人工尿液加標(biāo)以及健康人尿液測試基底值后加標(biāo)進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)。

尿液基質(zhì):吸取0.5 mL人工尿液或?qū)嶋H尿液,按照體積比1∶1加入pH 7.8的PBS后,再加入2.5 μg/mL的IS溶液10 μL和2.0 mg/mL DPBA溶液50 μL,混勻。

人工尿液加標(biāo)分為低、中、高3個水平(10、50、100 ng/mL)。吸取0.5 mL人工尿液,按照體積比1∶1加入pH 7.8的PBS后,分別加入10 μL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(1、5、10 μg/mL),再加入2.5 μg/mL的IS溶液10 μL和2.0 mg/mL DPBA溶液50 μL,混勻。

實(shí)際尿液加標(biāo)100 ng/mL。吸取0.5 mL尿液,按照體積比1∶1加入pH 7.8的PBS后,加入10 μL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(10 μg/mL),再加入2.5 μg/mL的IS溶液10 μL和2.0 mg/mL DPBA溶液50 μL,混勻。

分別取人工尿液和實(shí)際尿液基質(zhì)及其加標(biāo)溶液各100 μL進(jìn)樣分析,記錄各峰面積。計(jì)算加標(biāo)回收率:加標(biāo)回收率=(測定值-基質(zhì)本底值)/加標(biāo)水平×100%。

2 結(jié)果與討論

2.1 PFSPE-HPLC在線聯(lián)用程序的優(yōu)化

PFSPE-HPLC在線聯(lián)用程序的重要操作參數(shù)是流速、流動相梯度,以及富集、轉(zhuǎn)移時間、分析和平衡時間。如果富集時間過短,會導(dǎo)致目標(biāo)物質(zhì)沒有吸附充分,過長會導(dǎo)致不必要的運(yùn)行時間。轉(zhuǎn)移時間過短會導(dǎo)致目標(biāo)物質(zhì)沒有充分轉(zhuǎn)移。分析時間過短則會造成目標(biāo)物質(zhì)不能全部出峰,過長也會導(dǎo)致運(yùn)行時間過長。凈化平衡時間過短也會造成PFSPE柱和分析柱未平衡完全。此外,色譜柱的填料、粒度、內(nèi)徑及柱長等都會影響其柱效,進(jìn)而影響分離度及靈敏度等。因此,本實(shí)驗(yàn)對以上影響因素都進(jìn)行了優(yōu)化,最終優(yōu)化的條件見1.5、1.6節(jié),NE、E、DA、5-HT和IS的分離色譜圖如圖2所示,在此優(yōu)化條件下,雜質(zhì)峰較少,基線較為平穩(wěn),分離較充分,有利于準(zhǔn)確的定性定量分析。

圖 2 最佳梯度洗脫時間程序方法下的100 ng/mL NE、E、 DA、5-HT和IS標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合水標(biāo)液分離色譜圖Fig. 2 Separation chromatograms of 100 ng/mL NE, E, DA, 5-HT and IS mixed standard solution dissolved in water under optimal gradient elution time program method NE: norepinephrine; E: epinephrine; IS: internal standard, 3,4-dihydroxybenzylamine hydrobromide; DA: dopamine; 5-HT: serotonin.

2.2 絡(luò)合劑DPBA加入量的影響

由于DPBA和兒茶酚胺基團(tuán)之間存在可逆的絡(luò)合作用[5,16],而絡(luò)合反應(yīng)產(chǎn)物可以提高在PFSPE柱上的吸附效率,所以本試驗(yàn)測試了DPBA加入量對分析物的檢測影響。采用人工尿液配制加標(biāo)溶液1 mL(NE、E、DA和5-HT的質(zhì)量濃度為100 ng/mL, IS為25 ng/mL),加入不同體積的DPBA(2 mg/mL)。從圖3可知,DPBA的加入對于CAs的作用非常明顯,而對5-HT的作用有限。總體而言,加入量為50 μL的條件下,各目標(biāo)物質(zhì)的峰面積最高,說明此條件為DPBA的最佳加入量。因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)都采取此條件,加入50 μL DPBA。

圖 3 絡(luò)合試劑DPBA(2 mg/mL)加入量對分析物 提取效果的影響(n=3)Fig. 3 Effect of the amount of complexing agent diphenylborinic acid 2-aminoethyl ester (DPBA, 2 mg/mL)on extraction of analytes (n=3)

2.3 PBS的影響

在普通膳食條件下,正常人的尿液偏酸性,pH均值保持在6.3左右[17]。由于DPBA絡(luò)合實(shí)驗(yàn)需要在近中性條件下反應(yīng)為佳,所以采用PBS對尿液pH進(jìn)行調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)測試了不同pH的PBS以及人工尿液與不同pH的PBS等體積混合溶液中的各分析物響應(yīng)值。如圖4所示,在單純PBS中,pH 7.0條件下各分析物的峰響應(yīng)值最大。而在人工尿液與PBS等體積混合的溶液中,pH 7.8條件下各分析物的峰響應(yīng)值最佳。此結(jié)果也說明采用一定量的PBS調(diào)節(jié)人工尿液的pH至近中性后,各分析物能夠得到較好的提取。

圖 4 PBS對分析物檢測的影響(n=3)Fig. 4 Influence of PBS on the detection of analytes (n=3)PBS: phosphate-buffered saline solution; AU: artificial urine.

此外,在4種體積比條件下混合人工尿液和pH 7.8的PBS,各分析物的峰響應(yīng)值差異較小,1∶1條件下各分析物的峰響應(yīng)值稍好于其他3種配比條件,說明此條件已達(dá)到最佳吸附pH條件,所以在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中人工尿液或?qū)嶋H尿液的pH調(diào)節(jié)都采用pH 7.8的PBS等體積比混合。

2.4 PFSPE柱的穩(wěn)定性及重復(fù)使用次數(shù)

前期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),PFSPE柱經(jīng)上百次使用后,納米纖維只有略微的機(jī)械變形,直徑無顯著變化,納米結(jié)構(gòu)保持完整,可以重復(fù)使用[15]。本實(shí)驗(yàn)對PFSPE柱的重復(fù)使用次數(shù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì),以進(jìn)一步考察PFSPE柱的穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),該P(yáng)FSPE柱在PFSPE-HPLC系統(tǒng)中可以進(jìn)行近200次CAs和5-HT的在線自動化富集和分析。取1.2節(jié)配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液加超純水稀釋至100 ng/mL(IS質(zhì)量濃度為25 ng/mL)進(jìn)樣100 μL, NE、E、DA、5-HT及IS的峰面積及NE、E、DA、5-HT與IS的峰面積比隨使用次數(shù)的變化見圖5(統(tǒng)計(jì)到95次),圖中顯示出NE、E、DA及IS的峰面積均隨使用次數(shù)的增加先下降后上升,然后緩慢下降到一定水平,再在該水平的基礎(chǔ)上有長時間的小幅波動,最后又繼續(xù)下降。而5-HT的峰面積能夠在較長時間內(nèi)保持較好的穩(wěn)定性(5-HT和CAs類化學(xué)結(jié)構(gòu)有差異,所以變化趨勢有可能不一致)。這些都說明PFSPE柱具有一定的重復(fù)使用性和較好的穩(wěn)定性,可以在一定時間內(nèi)保持穩(wěn)定,建議使用過程中隨時采用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行質(zhì)控,以保持對PFSPE性能的了解,確保標(biāo)準(zhǔn)溶液和實(shí)際尿液的測試條件盡量在較短時間內(nèi)保持一致,減少因PFSPE前處理柱的性能因素而導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。

圖 5 PFSPE柱的重復(fù)使用次數(shù)對分析物檢測的影響(n=95)Fig. 5 Influence of reuse times of PFSPE column on the detection of analytes (n=95)

2.5 方法學(xué)

2.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)法定量。在1～200 ng/mL的范圍內(nèi),NE、E、DA、5-HT的色譜峰清晰可見。以NE、E、DA、5-HT與IS的色譜峰面積比值(Y)對各單胺的質(zhì)量濃度(X)做線性回歸,結(jié)果顯示NE、E和DA在1～200 ng/mL之間呈線性,5-HT在5～200 ng/mL之間呈線性,且線性關(guān)系良好(相關(guān)系數(shù)r≥0.996)。檢出限為1 ng/mL (S/N=3, CAs)和2.5 ng/mL (S/N=3, 5-HT),定量限為2.5 ng/mL (S/N=10, CAs)和5 ng/mL (S/N=10, 5-HT)。NE、E、DA、5-HT的線性方程分別為:Y=0.008 9X+0.033 5 (NE,r=0.999 3),Y=0.007 3X+0.055 8(E,r=0.996 1),Y=0.013 6X+0.004 2(DA,r=0.999 7),Y=0.005 2X+0.003 0(5-HT,r=0.999 8)。

2.5.2加標(biāo)回收率

人工尿液和實(shí)際尿液加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見表2, NE、E、DA及5-HT的加標(biāo)回收率分別為87.0%～117.7%、87.6%～110.7%、83.5%～110.0%及98.7%～111.7%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于10%。回收率和精密度都符合測試要求,說明該檢測方法適用于尿液樣本中NE、E、DA及5-HT的定量分析。

表 2 人工尿液和實(shí)際尿液樣品的加標(biāo)回收率(n=6)

2.6 實(shí)際尿液樣本的檢測

取健康人的隨機(jī)尿中段尿1份,按照1.8小節(jié)項(xiàng)下的操作配成尿液基質(zhì),進(jìn)樣100 μL,計(jì)算尿液基質(zhì)中NE、E、DA及5-HT對IS的峰面積比值,將峰面積比值代入到各分析物的標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出尿液中NE、E、DA及5-HT的質(zhì)量濃度。

由圖6可知,實(shí)際尿液樣本中的NE、E、DA、5-HT經(jīng)PFSPE柱在線富集和凈化后能夠在HPLC-FLD系統(tǒng)中得到較好的分離與檢出,峰形優(yōu)良,與雜質(zhì)分離效果好,便于NE、E、DA及5-HT的定性定量分析。該方法中,樣品在線富集凈化及檢測所需的時間在16 min內(nèi),方便快捷、大大節(jié)省人力物力。實(shí)際尿液樣本中NE、E、DA和5-HT的質(zhì)量濃度分別為100.0、45.9、311.7和197.8 ng/mL。3種CAs和5-HT的含量范圍與文獻(xiàn)[18]報(bào)道中的數(shù)值范圍基本吻合,說明此方法能夠應(yīng)用于測定尿液中的NE、E、DA和5-HT的含量。

圖 6 檢測實(shí)際尿液的色譜圖Fig. 6 Chromatograms for the determination of actual urine

3 結(jié)論

本研究采用靜電紡絲法制備聚合冠醚復(fù)合納米纖維,將其作為SPE的吸附劑裝填固相萃取柱,同時選擇雙泵柱切換閥系統(tǒng),設(shè)計(jì)在線聯(lián)用程序,將PFSPE與HPLC-FLD進(jìn)行在線聯(lián)用。該方法成功應(yīng)用于人體尿液中NE、E、DA及5-HT的檢測,能夠有效地富集目標(biāo)分析物和凈化尿液中的內(nèi)源性雜質(zhì),該方法加標(biāo)回收率高,精密度良好,在1～200 ng/mL范圍內(nèi)有著良好的線性。此外,聚冠醚復(fù)合納米纖維的穩(wěn)定性較好,10 mg裝填量的PFSPE柱可以重復(fù)使用近百次,相比離線操作一次使用2～3 mg,使用效率成百倍提高,大大節(jié)省物力。

總之,本研究建立的PFSPE-HPLC在線聯(lián)用方法是一種更簡便、有效、環(huán)境友好的檢測方法。該方法能夠集樣品前處理與分析檢測于一體,分析的自動化程度高,在很大程度上擴(kuò)展了PFSPE樣品前處理技術(shù)的應(yīng)用。此外,該聚冠醚復(fù)合納米纖維可以重復(fù)使用,因此可長時間自動運(yùn)行,實(shí)現(xiàn)大批量尿液中NE、E、DA及5-HT的在線自動化富集和分析。該方法展現(xiàn)出很大的臨床應(yīng)用前景,適用于臨床尿液樣本中NE、E、DA及5-HT的檢測,可以為相關(guān)疾病提供輔助診斷技術(shù)支持。