邱 爽 劉永利 葛 艷 高立永 張 蓓

1.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬徐州市立醫(yī)院(221000)；2.江蘇省徐州市中心醫(yī)院

子宮內(nèi)膜癌(EC)是一種惡性程度高的女性生殖道腫瘤，在圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性較為多見[1-2]，其發(fā)生機制目前尚未明確，相關(guān)研究表明子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與內(nèi)源性及外源性雌激素長期刺激關(guān)系密切[3-4]。多項研究表明[5]，乙醛脫氫酶1(ALDH1)作為腫瘤干細胞的標志物之一，可預(yù)測多種類型癌癥生存預(yù)后。本文就雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)及ALDH1在子宮內(nèi)膜病變組織中表達特征進行分析，探究診斷子宮內(nèi)膜癌價值，為臨床治療及預(yù)后提高參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料

本研究在徐州醫(yī)科大學(xué)附屬徐州市立醫(yī)院和徐州市中心醫(yī)院進行，收集2018年12月-2020年6月因子宮內(nèi)膜疾病收治入院患者共計104例，根據(jù)常規(guī)病理診斷：正常增殖期子宮內(nèi)膜18例(A組)，子宮內(nèi)膜不典型增生20例(B組)，子宮內(nèi)膜癌66例(C組)。患者年齡(53.3±5.9)歲(31～75歲)。國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟FIGO分期為Ⅰ期41例、Ⅱ期18例、Ⅲ期7例；組織分化類型為高分化21例、中分化27例、低分化18例；浸潤深度為無子宮肌層浸潤10例、浸潤淺肌層者40例，深肌層或漿膜浸潤16例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。所有患者術(shù)前血常規(guī)、血凝分析、肝腎功能、心電圖均正常。

1.2 免疫組化實驗

1.2.1試劑免疫組化抗體ER(Servibio GB11843)、PR(Servibio GB11262)、ALDH1(abcam ab134188)；兔二步法檢測試劑盒(中杉金橋)、DAB顯色試劑盒(中杉金橋)。

1.2.2方法子宮內(nèi)膜組織用10%甲醛固定24h后使用石蠟包埋，以4μm切片行免疫組織化學(xué)染色。取4μm切片在65℃恒溫烤箱中烘烤過夜，放二甲苯中依次脫蠟,將脫蠟后切片在100%、90%、80%、70%酒精中進行梯度水化各2min，蒸餾水中沖洗；將切片放入檸檬酸鈉-EDTA修復(fù)液中煮沸、修復(fù)；冷卻后用磷酸緩沖液(PBS)清洗切片，把切片放入濕盒中滴加FBS封閉1h，封閉完成后清洗切片，滴加按比例稀釋的一抗，包括ALDH1、ER和PR 3個抗體，4℃孵育過夜；PBS沖洗3次后，滴加按比例稀釋的二抗，室溫放置2h，PBS沖洗3次，滴加按比例稀釋的DAB顯色試劑至切片顯色，顯微鏡下觀察后放入PBS終止顯色；蘇木素染核后用樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下采集圖像。

1.2.3結(jié)果判定ER、PR在細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，ALDH1在細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。觀察切片，并進行染色評分，按照染色深度分為4級：無染色0分、弱染色1分，中度染色2分，強染色3分。根據(jù)染色細胞百分比：未見0分，≤25% 1分，25%～50% 2分，≥50% 3分。將染色深度和染色密度分數(shù)相加得到總分，總分≤2分為陰性，>2分為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 不同子宮內(nèi)膜組織中ER、PR、ALDH1表達

ALDH1在A組和B組中表達率均很低，在C組表達率較高(P<0.05)。ER、PR在A組、B組、C組中的陽性表達率逐漸下降(P<0.05)。見表1。

表1 各組內(nèi)膜組織中ER、PR、 ALDH1表達陽性情況比較[例(%)]

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織中ER、PR、ALDH1表達

隨著病理分期越晚、分化程度越差、肌層浸潤越深者，子宮內(nèi)膜癌組織中ER、PR表達越低，ALDH1表達越高 (P<0.05)。但ER、PR、ALDH1與患者淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、是否肥胖、是否絕經(jīng)均未見差異(P>0.05)，見表2。

表2 子宮內(nèi)膜癌組織中ER、PR、ALDH1陽性表達與臨床病理特征關(guān)系(%)

2.3 子宮內(nèi)膜癌中ER、PR、ALDH1相關(guān)性

Person相關(guān)分析顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中ALDH1的表達與ER(γ=-0.61)及PR(γ=-0.57)表達存在負相關(guān)， ER與PR表達存在正相關(guān)(γ=0.99)(均P<0.05)。

2.4 ER、PR、ALDH1對子宮內(nèi)膜癌的診斷價值

ROC曲線分析顯示，ALDH1診斷子宮內(nèi)膜癌有一定準確性，ER、PR診斷準確性較低。以ROC曲線靠左上方約登指數(shù)的最大切點作為最佳臨界值，該點診斷敏感度、特異度見表3。

表3 各指標對子宮內(nèi)膜癌的診斷價值

3 討論

由于子宮內(nèi)膜癌目前已經(jīng)成為嚴重影響女性健康的三大腫瘤之一，所以有越來越多的研究人員將研究集中于一些分子標志物與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系，為子宮內(nèi)膜癌的診斷、治療以及判斷預(yù)后提供新思路[6-10]。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病研究中，目前一致認為與患者雌、孕激素密切相關(guān)[10]。在子宮內(nèi)膜的周期性變化中，雌激素和孕激素的周期性變化是最主要原因。本研究，子宮內(nèi)膜癌組織中ER、PR陽性率低于正常子宮內(nèi)膜組織表達，且陽性表達率與肌層浸潤深度、病理分期及細胞分化程度呈負相關(guān)。與徐珂等[11]研究結(jié)論相同。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)ER、PR在子宮內(nèi)膜組織中陽性是良好預(yù)后的表現(xiàn)，其表達率與5年生存率呈正相關(guān)[12]。這些研究能夠幫助人們認識子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機制，指導(dǎo)后續(xù)治療藥物選擇及預(yù)測患者結(jié)局[13]。本文行ROC曲線分析顯示，ER、PR診斷子宮內(nèi)膜癌的價值一般，推測可能與本研究選用抗體、樣本數(shù)及樣本區(qū)域局限性有關(guān)。

ALDH1對多種器官的正常發(fā)育和同源性非常重要，同時在胚胎形成過程中至關(guān)重要；是肝臟中一種重要的解毒酶，也表達在腎臟以及造血原細胞中，在干細胞的正常分化中發(fā)揮關(guān)鍵作用[14]。多個學(xué)者對ALDH1蛋白的表達及位置進行研究后發(fā)現(xiàn)，其表達水平與視黃醛表達有密切聯(lián)系。視黃醛也稱維生素A醛，其合成初期 ALDH1蛋白發(fā)揮一定作用，而視黃酸在維持機體正常發(fā)育和穩(wěn)態(tài)同時抑制細胞生長，對腫瘤細胞凋亡有促進作用，所以ALDH1可能通過視黃醛參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[15]。本研究子宮內(nèi)膜癌組織中ALDH1的陽性率高于正常的宮內(nèi)膜組織，與周彤等[16]研究結(jié)果一致；且子宮內(nèi)膜不典型增生組織中ALDH1表達低于子宮內(nèi)膜癌組織。行ROC曲線分析顯示，ALDH1診斷子宮內(nèi)膜癌的敏感度、特異度均尚可，提示可將ALDH1作為一種簡便、無創(chuàng)的子宮內(nèi)膜癌早期診斷標志物。本研究發(fā)現(xiàn)，正常子宮內(nèi)膜組織和不典型增生組織中ALDH1的陽性表達率差異不大，可能與實驗選用抗體、實驗樣本數(shù)和實驗樣本區(qū)域局限性有關(guān)。

最近研究發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌的病程中雌激素含量會隨著腫瘤的發(fā)展而發(fā)生變化，敲除ALDH1基因后抑制了腫瘤細胞增長[17-20]。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中ALDH1含量隨之增高，從而抑制細胞凋亡。本研究證實ER、PR與ALDH1表達呈負相關(guān)，推測在子宮內(nèi)膜癌中ALDH1與ER、PR的平衡關(guān)系會對子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展及病程、預(yù)后等產(chǎn)生影響，但3者在凋亡通路上如何相互制衡、相互作用尚需在細胞水平上進行研究才有可能得到明確的答案。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌組織中ALDH1的陽性率異常升高，且隨著病理分期、深淺肌層浸潤及細胞分化程度增加而升高，ALDH1有望成為一種腫瘤干細胞標志物預(yù)測子宮內(nèi)膜癌預(yù)后。ALDH1和ER、PR可能成為評估子宮內(nèi)膜癌早期診斷、術(shù)前病理分期、靶向治療方案制定以及預(yù)后的有效指標。