侯 粲，肖 杰，王黎明，陳潔瑜，趙曉山，范怡航，李 頌，郝彬秀，應(yīng) 劍,*，張均偉

（1.中糧營(yíng)養(yǎng)健康研究院有限公司，北京 102209；2.營(yíng)養(yǎng)健康與食品安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102209；3.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州 510515；4.中茶科技（北京）有限公司，北京 102209；5.梧州中茶茶業(yè)有限公司，廣西梧州 543001）

痰濕質(zhì)是一種病理體質(zhì)，由于水液內(nèi)停而痰濕凝聚所致，主要特征為黏滯重濁[1]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)一般人群中痰濕體質(zhì)所占比例為7.32%[2]。痰濕質(zhì)是代謝綜合征形成的風(fēng)險(xiǎn)因素，與其發(fā)展預(yù)后有著密切關(guān)系[3?6]?！疤禎耋w質(zhì)土壤論”認(rèn)為，通過(guò)調(diào)節(jié)痰濕質(zhì)狀態(tài)，可以實(shí)現(xiàn)高血脂、高血糖、高血壓等代謝類(lèi)疾病的“異病同防”[7?9]。痰濕質(zhì)還與特定人群肝內(nèi)膽汁淤積癥相關(guān)[10]，因此，應(yīng)用清熱利濕方劑有助于改善痰濕質(zhì)人群的膽汁淤積癥[11]。油膩飲食與痰濕質(zhì)的形成相關(guān)，多食過(guò)量導(dǎo)致脾胃運(yùn)化不及易形成痰濕[12]；反之，痰濕質(zhì)之人體內(nèi)痰濕之邪盛，易困阻脾陽(yáng)，脾再生濕，相互影響，導(dǎo)致脾系亞健康狀態(tài)的出現(xiàn)[13?18]?，F(xiàn)代研究認(rèn)為，腸道菌群紊亂影響消化功能，是脾虛濕困的重要病理因素[19]。與平和質(zhì)相比，痰濕質(zhì)中老年人腸道菌群的豐度及多樣性均顯著降低，擬桿菌門(mén)相對(duì)豐度較低，而厚壁菌門(mén)相對(duì)豐度較高，雙歧桿菌等厭氧菌減少[20]。

中醫(yī)體質(zhì)學(xué)說(shuō)認(rèn)為“體質(zhì)可調(diào)”，其調(diào)節(jié)方式包括心理、運(yùn)動(dòng)、飲食調(diào)整及適當(dāng)?shù)闹兴帯⑨樉牡确椒╗21?22]。薏苡仁、蓮子、山藥、陳皮、冬瓜、山楂等食藥同源食物具有健脾祛濕的作用，在藥理學(xué)上表現(xiàn)為抗菌、降脂、利尿、改善血管功能、調(diào)節(jié)腸道菌群、調(diào)節(jié)免疫力等作用[23?25]。六堡茶是黑茶的一種，產(chǎn)自廣西壯族自治區(qū)梧州市蒼梧縣六堡鎮(zhèn)，其品質(zhì)成分的形成與渥堆、窖藏等環(huán)節(jié)的微生物轉(zhuǎn)化緊密相關(guān)。隨著陳化時(shí)間延長(zhǎng)，六堡陳茶中茶褐素和茶多糖增加，茶黃酮和酚酸進(jìn)一步發(fā)生轉(zhuǎn)化，形成新結(jié)構(gòu)的化合物[26]。六堡茶具有抗氧化、調(diào)節(jié)糖脂代謝、保護(hù)肝臟、增強(qiáng)免疫功能、促消化、抗凝血、促進(jìn)胃排空和小腸推進(jìn)作用[27?30]，與健脾祛濕類(lèi)食藥同源物品有相似的藥理作用特點(diǎn)，特別是對(duì)于高脂飲食大鼠體現(xiàn)為抑制乙酸分泌、促進(jìn)丙酸和丁酸分泌的作用[31]；促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌、擬桿菌和腸球菌等厭氧菌的生長(zhǎng)，并抑制需氧菌生長(zhǎng)[29]。因此，民間所說(shuō)六堡茶具有“祛濕”作用，可能與調(diào)節(jié)腸道菌群、促進(jìn)代謝相關(guān)。但是，六堡茶的祛濕作用尚未得到論證，其可能的機(jī)制也尚未進(jìn)行闡述。

本研究納入亞健康狀態(tài)痰濕質(zhì)人群進(jìn)行隨機(jī)、對(duì)照的臨床試驗(yàn)，考察六堡茶改善痰濕質(zhì)的作用，以及重點(diǎn)圍繞腸道菌群對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行探討，為其合理應(yīng)用和推廣提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

六堡茶供試樣本 梧州中茶茶業(yè)有限公司提供；空腹血糖（FBG）、總膽紅素與直接膽紅素（TBIL、DBIL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒 中生北控生物科技股份有限公司；DNA 分離提?。∕OBIO PowerSoil DNA Isolation）試劑盒 深圳市安必勝科技有限公司。

ALLEGRAX-25R 多功能高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司；ThermoForma5995 超低溫冰箱 賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；Milli-Q Reference 純水儀 德國(guó)默克集團(tuán)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 研究對(duì)象的選擇標(biāo)準(zhǔn)及分組 依據(jù)《中醫(yī)體質(zhì)分類(lèi)與判定表》和人群亞健康調(diào)查問(wèn)卷，選擇18～30 周歲健康平和體質(zhì)及痰濕質(zhì)體質(zhì)人群作為研究對(duì)象，其中平和質(zhì)以體態(tài)適中、面色紅潤(rùn)、精力充沛、臟腑功能狀態(tài)強(qiáng)健壯實(shí)為主要特征，痰濕質(zhì)以體型肥胖、腹部肥滿(mǎn)、口黏苔膩等痰濕表現(xiàn)為主要特征[32]。

采用人群隨機(jī)對(duì)照研究，共納入健康平和質(zhì)42 人，痰濕質(zhì)70 人。在干預(yù)期間，將所有人群分為4 組，健康平和質(zhì)人群為平和質(zhì)對(duì)照組（PH），痰濕質(zhì)人群分為痰濕質(zhì)對(duì)照組（TS Control，27 人）、六堡茶新茶干預(yù)組（Tea，24 人）、六堡茶陳茶干預(yù)組（Aged Tea，19 人），進(jìn)行兩療程（45 d/療程，共90 d）的標(biāo)準(zhǔn)化干預(yù)及評(píng)價(jià)，干預(yù)方式見(jiàn)1.2.2。本研究經(jīng)中國(guó)注冊(cè)臨床試驗(yàn)倫理審查委員會(huì)倫理審查，文號(hào)：ChiECRCT20190168，中國(guó)臨床試驗(yàn)注冊(cè)中心臨床研究注冊(cè)號(hào)碼：ChiCTR1900026342。

1.2.2 六堡茶干預(yù)物制作及干預(yù)方法 毛茶經(jīng)篩選、拼配、渥堆、蒸、壓制成型、陳化（相對(duì)濕度在75%～90%、溫度在23～28 ℃）等工藝制成新茶成品。新茶成品轉(zhuǎn)至清潔、陰涼、干爽、無(wú)異雜味的倉(cāng)庫(kù)中繼續(xù)陳化五年后，制得六堡茶五年陳茶樣品。

平和質(zhì)對(duì)照組（PH）、痰濕質(zhì)對(duì)照組（TS Control）給予生活方式指導(dǎo)，包括膳食營(yíng)養(yǎng)指導(dǎo)、體力活動(dòng)指導(dǎo)、睡眠指導(dǎo)[22]。六堡茶新茶干預(yù)組（Tea）、六堡茶陳茶干預(yù)組（Aged Tea）除生活方式指導(dǎo)外，分別給予六堡茶新茶、六堡茶五年陳茶干預(yù)，每次1 袋（10 g），200 mL 沸水浸泡2 min 口服，每日2 次，服用兩個(gè)療程（45 d/療程）。

1.2.3 體質(zhì)轉(zhuǎn)化分計(jì)算 體質(zhì)得分（轉(zhuǎn)化分）采用中醫(yī)體質(zhì)調(diào)查表對(duì)體質(zhì)的轉(zhuǎn)化進(jìn)行評(píng)價(jià)，按照《中醫(yī)體質(zhì)分類(lèi)與判定表》評(píng)分，每一問(wèn)題按5 級(jí)評(píng)分，每個(gè)條目原始最低分是1 分，最高分是5 分，計(jì)算原始分及轉(zhuǎn)化分，依標(biāo)準(zhǔn)判定體質(zhì)類(lèi)型。原始分=各條目的分?jǐn)?shù)相加。痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分?jǐn)?shù)=[（原始分?條目數(shù)）/（條目數(shù)×4）] ×100，按照公式計(jì)算干預(yù)0、25、45 和90 d 體質(zhì)轉(zhuǎn)化分?jǐn)?shù)。平和質(zhì)轉(zhuǎn)化分大于等于60 分且其他八種體質(zhì)轉(zhuǎn)化分均小于30 分，記為平和體質(zhì)。痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分大于等于40 分且平和質(zhì)轉(zhuǎn)化分小于60 分、其他七種體質(zhì)轉(zhuǎn)化分不高于40 分，記為痰濕質(zhì)。

1.2.4 生化指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)第0、25 和45 d 上午10 點(diǎn)抽取靜脈血5 mL 于EP 管中，血漿樣品靜置2 h后，3500 r/min、4 ℃條件下離心10 min 取上清液，嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行血清FBG、TBIL、DBIL、ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C 的測(cè)定。

1.2.5 腸道微生物16S 基因靶向測(cè)序分析 試驗(yàn)第0、25 和45 d 留取糞便樣品3～5 g 于取樣管中（內(nèi)含裂解液和穩(wěn)定液），由深圳譜元科技有限公司完成腸道微生物16S 基因靶向測(cè)序分析[33]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果通過(guò)SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組比較應(yīng)用ANOVA分析，P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 六堡茶干預(yù)后痰濕質(zhì)改善情況

六堡茶干預(yù)后痰濕質(zhì)改善結(jié)果如圖1 所示，與平和質(zhì)對(duì)照組相比，痰濕質(zhì)對(duì)照組的痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化評(píng)分會(huì)出現(xiàn)明顯的升高趨勢(shì)。六堡茶陳茶干預(yù)組和新茶干預(yù)組在干預(yù)25、45 和90 d 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分均有下降趨勢(shì)，六堡茶陳茶干預(yù)組痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分從0 d 的38.97±7.10 下降到25 d 的36.57±5.68、45 d 的33.72±3.12 和90 d 的27.80±3.49，六堡茶新茶干預(yù)組由0 d 的40.76±7.95 下降到25 d 的30.86±4.87、45 d 的29.76±5.42 和90 d 的24.29±2.94。六堡茶新茶干預(yù)組在干預(yù)25、45 和90 d 的痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分均與痰濕質(zhì)對(duì)照組有顯著差異（P<0.05），六堡茶陳茶干預(yù)組痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分在干預(yù)45 d 之后與痰濕質(zhì)對(duì)照組相比有所下降，且在干預(yù)90 d 時(shí)，與痰濕質(zhì)對(duì)照組有顯著差異（P<0.05）。

圖1 試驗(yàn)各組痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化評(píng)分Fig.1 The phlegm-dampness quality translation score of each group

2.2 六堡茶干預(yù)對(duì)血液生化指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)分別對(duì)干預(yù)前（0 d）、第一療程中期（25 d）和第一療程干預(yù)末期（45 d）三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)的空腹血糖（FBG）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖2、圖3、圖4 和圖5 所示。

圖2 試驗(yàn)各組空腹血糖水平Fig.2 The fasting blood glucose of each group

圖3 試驗(yàn)各組總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平Fig.3 The total cholesterol, triglycerides, high-density lipoprotein cholesterol and low-density lipoprotein cholesterol of each group

圖4 試驗(yàn)各組總膽紅素和直接膽紅素水平Fig.4 The total bilirubin and direct bilirubin of each group

2.2.1 六堡茶干預(yù)對(duì)空腹血糖的影響 實(shí)驗(yàn)干預(yù)45 d 后，平和質(zhì)對(duì)照組空腹血糖水平為（4.74±0.37）mmol/L，痰濕質(zhì)對(duì)照組為（4.67±0.29）mmol/L，六堡茶新茶干預(yù)組和六堡茶陳茶干預(yù)組空腹血糖分別為（4.78±0.32）、（4.74±0.26）mmol/L，與平和質(zhì)對(duì)照組和痰濕質(zhì)對(duì)照組相比，六堡茶新茶干預(yù)和陳茶干預(yù)對(duì)空腹血糖無(wú)顯著影響(P>0.05)。

2.2.2 六堡茶干預(yù)對(duì)血脂水平的影響 六堡茶陳茶和新茶干預(yù)后，總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇均有一定程度的下降趨勢(shì)，六堡茶陳茶干預(yù)組總膽固醇由0 d 的（4.58±0.97）mmol/L下降為45 d 的（4.44±0.83）mmol/L，高密度脂蛋白膽固醇由（1.53±0.38）mmol/L（0 d）下降至（1.44±0.34）mmol/L（45 d），低密度脂蛋白膽固醇由（2.62±0.94）mmol/L（0 d）下降至（2.51±0.82）mmol/L（45 d）；六堡茶新茶干預(yù)組總膽固醇由（4.64±0.81）mmol/L（0 d）下降至（4.41±0.70）mmol/L（45 d），高密度脂蛋白膽固醇由（1.54±0.29）mmol/L（0 d）下降至（1.47±0.34）mmol/L（45 d），低密度脂蛋白膽固醇由（2.68±0.72）mmol/L（0 d）下降至（2.51±0.66）mmol/L（45 d），但與平和質(zhì)對(duì)照組、痰濕質(zhì)對(duì)照組相比，變化沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)，且下降后的值在正常范圍內(nèi)。本試驗(yàn)所納入人群的甘油三酯水平整體較低，干預(yù)第25 d 和45 d，六堡茶新茶干預(yù)組和六堡茶陳茶干預(yù)組的甘油三酯較0 d 略有升高（其原因可能與受試人群的飲食結(jié)構(gòu)和習(xí)慣有關(guān)），但均在正常值范圍內(nèi)，說(shuō)明本試驗(yàn)中六堡茶的干預(yù)對(duì)正常范圍內(nèi)的血脂水平?jīng)]有顯著影響。

2.2.3 六堡茶干預(yù)對(duì)膽紅素的影響 六堡茶陳茶和新茶干預(yù)后，六堡茶陳茶干預(yù)組的總膽紅素由（14.31±8.42） μmol/L（ 0 d） 下降至（ 8.24 ±3.72） μmol/L（45 d），六堡茶新茶干預(yù)組的總膽紅素由0 d 的（11.25±5.30）μmol/L 下降至45 d 的（8.34±3.70）μmol/L。六堡茶陳茶干預(yù)組直接膽紅素由（5.79±3.44）μmol/L（0 d）下降為（3.52±1.58）μmol/L（45 d），六堡茶新茶干預(yù)組直接膽紅素由0 d 的（4.34±2.00）μmol/L 變化為45 d 的（3.43±1.41）μmol/L。即六堡茶陳茶和新茶均具有降低膽紅素（總膽紅素和直接膽紅素）的作用，其中六堡茶陳茶干預(yù)組在45 d 干預(yù)期內(nèi)下降值更為明顯，說(shuō)明其對(duì)于總膽紅素和直接膽紅素的調(diào)節(jié)作用較為明顯。

2.2.4 六堡茶干預(yù)對(duì)肝功的影響 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）及天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）是反映肝功的重要指標(biāo)，常用于肝臟或消化系統(tǒng)性疾病的診斷以及評(píng)估[34]，各組檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖5。結(jié)果顯示，在整個(gè)干預(yù)期內(nèi)，ALT 及AST 均保持在正常水平，即40 U/L以下。各組ALT 及AST 均出現(xiàn)一定的下降趨勢(shì)，六堡茶陳茶干預(yù)后，ALT 由（33.53±27.85）U/L（0 d）下降為（29.10±25.43）U/L（45 d），AST 由0 d 的（21.26±11.88）U/L 下降為45 d 的（17.00±6.76）U/L；六堡茶新茶干預(yù)組，ALT 由（18.67±9.54）U/L（0 d）下降至（16.09±11.22）U/L（45 d），AST 由（16.30±5.76）U/L（0 d）下降為（14.17±5.52）U/L（45 d），但無(wú)顯著差異（P>0.05)，說(shuō)明六堡茶飲茶干預(yù)對(duì)于ALT 和AST 影響作用不顯著。

圖5 試驗(yàn)各組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平Fig.5 The alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase of each group

2.2.5 體質(zhì)與血生化指標(biāo)相關(guān)性分析 通過(guò)血生化檢測(cè)指標(biāo)與平和質(zhì)轉(zhuǎn)化分、痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)（圖6），痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶呈正相關(guān)（P<0.05，相關(guān)系數(shù)為0.131），與總膽紅素呈極顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01，相關(guān)系數(shù)為?0.139），與直接膽紅素呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05，相關(guān)系數(shù)為?0.141），與其他生化指標(biāo)相關(guān)性不顯著（P>0.05）。莊耀東等[35]指出代謝綜合征與中醫(yī)的“痰濁”或“痰濕”關(guān)系密切，研究結(jié)果為痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分與直接膽紅素呈負(fù)相關(guān)，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。同時(shí)痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分與膽固醇和甘油三酯呈正相關(guān)，而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分與膽固醇和甘油三酯相關(guān)性不顯著（P>0.05），其原因可能是本實(shí)驗(yàn)所招募人群年齡普遍較輕，存在高血脂的人群占比較小，有待后續(xù)進(jìn)一步證實(shí)。

圖6 痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分與血生化指標(biāo)相關(guān)性熱圖Fig.6 Correlation heat-map between phlegm-dampness quality translation score and blood biochemical indicators

2.3 六堡茶干預(yù)對(duì)腸道菌群的影響

采用干預(yù)后（45 d）的腸道菌群豐度數(shù)據(jù)分析腸道菌群α-多樣性及門(mén)屬水平變化情況，多樣性分析包含豐富度（Obeserved_OTUs，反映樣品中含有的物種數(shù)目，數(shù)值越高表明樣品物種豐富度越高）和均勻度（Shannon 指數(shù)，評(píng)估樣本中物種組成的豐富度和均勻度，值越大表示該環(huán)境的物種越豐富，各物種分配越均勻）[36]。

從圖7A 可以看出，平和對(duì)照組、痰濕對(duì)照組與六堡茶新茶干預(yù)組的Obeserved _OTUs 值相差不大，而六堡茶陳茶干預(yù)組的Obeserved_OTUs 值低于其他三組，說(shuō)明六堡茶新茶對(duì)腸道菌群物種豐富度影響較小，而六堡茶陳茶對(duì)腸道菌群物種豐富度影響大于新茶，其物種豐富度稍小于其他各組。從圖7B 可以看出，平和質(zhì)組、痰濕對(duì)照組、新茶干預(yù)組的Shannon 指數(shù)相差不大，各組均勻度基本一致，六堡茶陳茶干預(yù)組略有下降，但組內(nèi)差異較大。六堡茶新茶經(jīng)陳放數(shù)年后，小分子物質(zhì)氧化、聚合以及被微生物分解、利用，形成六堡茶陳茶，水浸出物增加，且大分子物質(zhì)增加，更容易到達(dá)腸道，從而影響腸道微生態(tài)，這可能是六堡茶陳茶干預(yù)組腸道微生物物種豐富度和均勻度稍小的原因之一，有待后續(xù)進(jìn)一步進(jìn)行論證。

圖7 六堡茶干預(yù)對(duì)腸道菌群α-多樣性的影響Fig.7 Effect of Liupao tea on α-diversity

從腸道菌群門(mén)水平變化來(lái)看（如圖8 所示），痰濕質(zhì)對(duì)照組中擬桿菌門(mén)（Bacterioidetes）水平下降，相對(duì)豐度由平和質(zhì)對(duì)照組的0.52±0.28 變化為0.51±0.06，厚壁菌門(mén)（Firmicutes）水平有所上升，由平和質(zhì)對(duì)照組的0.39±0.14 變化為0.41±0.13；飲茶后這一變化更為顯著，六堡茶新茶干預(yù)組擬桿菌門(mén)（Bacterioidetes）相對(duì)豐度下降為0.49±0.17、厚壁菌門(mén)（Firmicutes）相對(duì)豐度上升至0.42±0.23，六堡茶陳茶干預(yù)組擬桿菌門(mén)（Bacterioidetes）相對(duì)豐度下降為0.48±0.35、厚壁菌門(mén)（Firmicutes）相對(duì)豐度上升至0.45±0.08，以六堡茶陳茶干預(yù)變化更為明顯。

圖8 腸道菌群門(mén)水平的變化情況Fig.8 Changes of gut microbiota in the level of phylum

從腸道菌群屬水平變化來(lái)看（如圖9 所示），痰濕質(zhì)對(duì)照組的需氧菌大腸桿菌/志賀菌（Escherichia-Shigella，需氧菌）的相對(duì)豐度為0.013±0.026，略高于平和質(zhì)對(duì)照組（豐度為0.010±0.016），飲茶后下降，六堡茶新茶干預(yù)組相對(duì)豐度為0.009±0.012，六堡茶陳茶干預(yù)組相對(duì)豐度為0.005±0.034，以六堡茶陳茶干預(yù)后下降更為明顯，提示腸道健康情況得到改善。痰濕質(zhì)對(duì)照組的擬桿菌屬（Bacteroides）和考拉桿菌屬（Phascolarctobacterium）的相對(duì)豐度（分別為0.29±0.16、0.034±0.021）比平和質(zhì)對(duì)照組高（分別為0.26±0.18、0.030±0.028），六堡茶新茶干預(yù)使得擬桿菌屬（Bacteroides）和考拉桿菌屬（Phascolarctobacterium）的相對(duì)豐度降低，分別為0.24±0.17、0.027±0.013。痰濕質(zhì)對(duì)照組的糞桿菌屬（Faecalibacterium）相對(duì)豐度（0.091±0.059）比平和質(zhì)對(duì)照組略低（0.094±0.057），新茶和陳茶干預(yù)均使得糞桿菌屬（Faecalibacterium）的相對(duì)豐度略有升高（0.092±0.025、0.094±0.041），糞桿菌屬與丁酸代謝等密切相關(guān)，丁酸與腸道屏障改善、炎癥改善等密切相關(guān)[37]。與平和質(zhì)對(duì)照組相比，痰濕質(zhì)對(duì)照組的嗜膽菌（Bilophila）相對(duì)豐度升高，由0.0019±0.0020 上升為0.0021±0.0022，與攝入油膩飲食的菌群變化現(xiàn)象一致[12]。嗜膽菌的作用可能是降低動(dòng)物性飲食帶來(lái)的心血管風(fēng)險(xiǎn)[38]，飲用六堡茶后，嗜膽菌（Bilophila）的相對(duì)豐度提高至六堡茶新茶干預(yù)組的0.0024±0.0013 和六堡茶陳茶干預(yù)組的0.0022±0.0034，以六堡茶新茶干預(yù)組升高更為明顯。嗜膽菌可在膽汁酸豐富的腸道中增殖，其相對(duì)豐度的升高，表明飲用六堡茶后膽汁酸分泌進(jìn)一步增加，可能是解膩、去痰濕的機(jī)制之一。

圖9 腸道菌群屬水平的變化情況Fig.9 Changes of gut microbiota in the level of genus

2.4 體質(zhì)與菌群相關(guān)性分析

通過(guò)《中醫(yī)體質(zhì)分類(lèi)及判定表》所定的人群體質(zhì)類(lèi)型，對(duì)試驗(yàn)所納入人群的腸道菌群進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)平和質(zhì)轉(zhuǎn)化分、痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分與目水平菌群的相關(guān)性進(jìn)行分析，如圖10 所示。結(jié)果顯示痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分與 Bifidobacteriales 菌、 Sphingomonadales 菌、Izimaplasmatales 菌呈顯著正相關(guān)（P<0.05，相關(guān)系數(shù)分別為0.130、0.120、0.131），與Synergistales 菌呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01，相關(guān)系數(shù)為?0.152），且在六堡茶干預(yù)后，Bifidobacteriales 菌、Sphingomonadales菌、Izimaplasmatales 菌的豐度呈下降趨勢(shì)、Synergistales 菌豐度呈上升趨勢(shì)，即腸道微生物中含有更高豐度的Bifidobacteriales 菌、Sphingomonadales 菌、Izimaplasmatales 菌和更低豐度的Synergistales 菌的人群在體質(zhì)上更偏向痰濕質(zhì)體質(zhì)，更易被六堡茶干預(yù)，達(dá)到改善痰濕質(zhì)體質(zhì)的效果。

圖10 體質(zhì)轉(zhuǎn)化分與目水平菌群相對(duì)豐度水平相關(guān)性Fig.10 The correlation between traditional Chinese medicine constitution translation score and gut microbiota in the level of order

3 討論與結(jié)論

人群隨機(jī)對(duì)照研究顯示，經(jīng)六堡茶陳茶和新茶干預(yù)后，六堡茶陳茶干預(yù)組痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分由0 d 的38.97±7.10 下降到25 d 的36.57±5.68、45 d 的33.72±3.12 和90 d 的27.80±3.49，六堡茶新茶干預(yù)組痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分由0 d 的40.76±7.95 下降到25 d 的30.86±4.87、45 d 的29.76±5.42 和90 d 的24.29±2.94。六堡茶陳茶干預(yù)組的總膽紅素由14.31±8.42 μmol/L（0 d）、下降至8.24 ±3.72 μmol/L（45 d），直接膽紅素由0 d 的5.79±3.44 μmol/L 下降為45 d 的 3.52±1.58 μmol/L。六堡茶新茶干預(yù)組的總膽紅素由0 d的11.25±5.30 μmol/L 下降至45 d 的8.34±3.70 μmol/L，直接膽紅素由0 d 的4.34±2.00 μmol/L 變化為45 d的3.43±1.41 μmol/L。說(shuō)明六堡茶新茶和5 年陳茶能夠降低痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分、降低直接膽紅素和總膽紅素水平，均具備改善痰濕質(zhì)狀態(tài)的作用，在飲茶25 d即可看到改善作用，每日飲茶量為10 g，200 mL 沸水浸泡2 min 口服，每日2 次，其中六堡茶新茶的改善作用優(yōu)于六堡茶陳茶。

將中醫(yī)體質(zhì)評(píng)分與腸道菌群的豐度進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)痰濕質(zhì)人群的大腸桿菌/志賀菌（Escherichia-Shigella） 、 擬桿菌（Bacteroides） 和考拉桿菌（Phascolarctobacterium）、嗜膽菌（Bilophila）等菌豐度高于平和質(zhì)人群，而糞桿菌（Faecalibacterium）Cloacibacillus菌、溶桿菌（Lysobacter）、嗜冷桿菌（Psychrobacter）等菌的豐度低于平和質(zhì)人群，證明腸道菌群紊亂與痰濕質(zhì)的形成相關(guān)。

將受試人群體質(zhì)與本研究的重要生理指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)痰濕質(zhì)轉(zhuǎn)化分與總膽紅素、直接膽紅素水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，飲用六堡茶陳茶和新茶均具有降低膽紅素（總膽紅素和直接膽紅素）的作用，以陳茶更為顯著，提示六堡茶特別是陳茶的祛濕機(jī)制之一是改善膽紅素代謝。腸道菌群分析證實(shí)，飲茶促使表達(dá)膽鹽水解酶的擬桿菌屬豐度下降，提示結(jié)合型膽汁酸的分解代謝受到抑制，可能通過(guò)進(jìn)一步作用于FXR 受體通路，將促使膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸。而腸道嗜膽菌的增殖則在飲用新茶組更為明顯，嗜膽菌有助于降低動(dòng)物性飲食帶來(lái)的心血管風(fēng)險(xiǎn)，是人體保護(hù)機(jī)體的一個(gè)反饋機(jī)制。因此，盡管新茶和陳茶均可能通過(guò)腸道菌群-膽汁酸代謝通路發(fā)揮祛濕作用，但是其機(jī)制存在差別，是否與其內(nèi)含的茶多酚、茶多糖、酚酸等含量和結(jié)構(gòu)的差異有關(guān)，有待進(jìn)一步研究予以論證。

本研究所納入的人群按體質(zhì)進(jìn)行遴選和分組，由于招募人群的年齡普遍較輕，在血液診斷指標(biāo)上處于糖脂代謝不同階段的兼而有之，存在高血脂、高血糖、高血壓等多種代謝綜合征的人群占比較小，因此六堡茶對(duì)于空腹血糖、脂代謝的調(diào)節(jié)作用在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著。而飲茶后與代謝疾病、能量代謝有關(guān)的薩特氏菌屬（Sutterella）、Izimaplasmatales菌和瘤胃球菌屬（Ruminococcus）的相對(duì)豐度水平均發(fā)生改變。本研究提示，通過(guò)飲用六堡茶帶來(lái)祛濕作用，可能有助于在亞健康階段，實(shí)現(xiàn)代謝病的“異病同治”，其機(jī)制與調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)相關(guān)。