劉 婷，黃 凱，林 勇，羅雨蕭，蔣士宋，梁藝馨，龐琳星，莫翠琴

( 1.廣西大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530004； 2.廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530021； 3.全州縣科學(xué)技術(shù)情報(bào)研究所，廣西 桂林 541500 )

禾花鯉(Cyprinuscarpio)，屬鯉科溫水性魚類，原產(chǎn)于桂林市全州縣龍水鄉(xiāng)和融水縣苗山等地，是具有地方特色的土著養(yǎng)殖魚類，因主食稻田禾花并帶有特色風(fēng)味而得名。禾花鯉食性廣，生長(zhǎng)速度快，繁殖能力強(qiáng)，肉質(zhì)鮮美，魚骨柔軟無泥腥味。有研究表明，禾花鯉具有4種呈味氨基酸，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高且礦物質(zhì)含量豐富，證實(shí)其是適宜推廣養(yǎng)殖和加工利用的魚類品種[1-2]。隨著稻田種養(yǎng)模式產(chǎn)業(yè)化和規(guī)?；l(fā)展，禾花鯉已成為華南地區(qū)稻田養(yǎng)殖對(duì)象研究的熱點(diǎn)[3-4]。與普通鯉魚相比，禾花鯉上市規(guī)格較小，通常規(guī)格為30～50 g/尾，稻田中養(yǎng)殖的禾花鯉旺季價(jià)格可達(dá)30元/kg。然而，市場(chǎng)面臨著需求量大的問題，且在禾花鯉仔稚魚階段尚無較為理想的人工開口餌料。

消化器官的發(fā)育影響魚類對(duì)攝取食物的消化和吸收程度，且與魚類的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)。國(guó)內(nèi)外關(guān)于魚類消化器官發(fā)育的組織學(xué)研究已有諸多報(bào)道，包括魚(Lizahaematocheila)[5]、泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)[6]、日本白姑魚(Argyrosomusjaponicus)[7]等，但對(duì)禾花鯉仔魚到稚魚消化器官發(fā)育的組織學(xué)變化研究尚未見報(bào)道。在早期生長(zhǎng)發(fā)育過程中，隨著消化器官的逐步完善，消化酶活性也隨之改變。幼魚早期不同發(fā)育階段消化酶活性變化已經(jīng)作為幼魚發(fā)育程度、成活率和人工飼料投喂初始時(shí)間的參考依據(jù)[8]。因此，筆者測(cè)定禾花鯉早期生長(zhǎng)、攝食選擇與消化酶活性變化，并采用組織切片技術(shù)對(duì)消化器官組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，了解飼養(yǎng)階段禾花鯉的食性和消化生理特性，為開發(fā)出適宜的禾花鯉仔稚魚開口飼料提供理論基礎(chǔ)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)魚為2018年5月2日于廣西農(nóng)業(yè)良種海南南繁育種基地進(jìn)行人工催產(chǎn)孵化獲得，親魚產(chǎn)卵池規(guī)格4.5 m×1.8 m×0.8 m，于200 m2的水池中孵化，孵化水溫為29 ℃，經(jīng)36～48 h后魚苗孵出，自孵化后第2～10天向池內(nèi)潑灑熟豆?jié){，豆?jié){投喂量為4 kg/666.7 m2，日投喂2次(9:00、16:00)，自第11天起每隔2 d使用水蛛樂和益菌寶(廣東佛山市順德區(qū)活寶源生物科技有限公司)追肥1次，養(yǎng)殖周期為30 d。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 口徑與生長(zhǎng)測(cè)量

1.2.2 育苗池浮游生物采集定量

在育苗池的不同采樣點(diǎn)采集浮游植物：使用采水器采水1 L，倒入水樣瓶用15 mL魯哥氏液固定，沉淀后去掉上清液，濃縮至20～40 mL沉淀物保存于棕色廣口瓶?jī)?nèi)。浮游動(dòng)物的采集：用采水器采水20 L，經(jīng)浮游生物網(wǎng)過濾濃縮于100 mL廣口瓶中，加入5 mL福爾馬林固定。將沉淀物滴滿計(jì)數(shù)框置于顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，方法參考《水生生物學(xué)》[10]。

1.2.3 消化道內(nèi)含物采集與測(cè)定

由于仔魚較小，無法分離出腸道內(nèi)含物，因此分別在孵化后第14、18、22、26、30天取20尾魚腸道，將腸道置于10%福爾馬林中固定，在體視解剖鏡(XTL-165-VT/MT，鳳凰)下解剖取出魚腸內(nèi)含物，吸去水分后，分離食物團(tuán)，置于顯微鏡(MODEL E100，尼康)下觀察。通過計(jì)算每份食物體積占腸內(nèi)含物總體積的百分比，或每類食物出現(xiàn)的頻率來評(píng)估魚對(duì)食物的選擇[11]。計(jì)算仔稚魚對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境中餌料生物的選擇性(E)：

E=(r-p)/(r+p)

式中，r為某種餌料在腸道食物中所占的比例，p為某種餌料在育苗池中所占的比例。E值為-1.0 (完全不選食)～1.0(總是選食)[12]。

1.2.4 消化器官的組織切片觀察

組織切片的制作參考文獻(xiàn)[13]的方法，對(duì)出膜1～30 d的魚消化器官(包括口咽腔、食道、腸道、肝胰臟)進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)觀察。隔日每次取樣20尾。采用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，使用德國(guó)徠卡切片機(jī)(RM 2126)進(jìn)行縱、橫方向連續(xù)切片，厚度5 μm，蘇木精—伊紅染色，中性樹膠封片，在尼康顯微鏡下觀察拍照。

1.2.5 消化酶活性測(cè)定

取樣前將魚置于清水中空腹過夜，前10 d隔天取樣1次，后10 d每隔4 d取樣1次，1～15 d的仔魚取全魚，16～20 d的仔稚魚剪取腹部進(jìn)行消化酶活性測(cè)定。每次取樣2.5 g，每組3個(gè)平行樣。其中的2.0 g樣品在10倍體積冰凍雙蒸水里進(jìn)行組織勻漿，于-80 ℃冰箱冷凍保存，使用南京建成生物工程研究所的酶試劑盒測(cè)定酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、淀粉酶和堿性磷酸酶的活性。使用生工生物工程(上海)股份有限公司的改良型BCA蛋白濃度試劑盒測(cè)定酶蛋白濃度。0.5 g樣品保存于-80 ℃冰箱，使用索萊寶的酶試劑盒測(cè)定脂肪酶活性。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)使用Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用軟件SPSS 21.0進(jìn)行單因素方差分析，所得數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié) 果

2.1 禾花鯉仔稚魚口徑的變化與仔魚生長(zhǎng)形態(tài)

2.1.1 禾花鯉仔稚魚生長(zhǎng)與口徑變化

魚孵出后第3天測(cè)量到口徑大小，3 d后口徑隨著日齡的增加而變化，口徑長(zhǎng)(y，mm)與日齡(x，d)的關(guān)系式為：y=0.0033x2+0.0421x+0.3774，r2=0.9754(圖1a)。在前10 d生長(zhǎng)速度較為緩慢，從12 d開始生長(zhǎng)速度明顯加快，體長(zhǎng)和全長(zhǎng)均隨著日齡的增加而增長(zhǎng)(圖1b)。體長(zhǎng)(y，mm)與日齡(x，d)的關(guān)系式為：y=0.1076x2-0.75x+6.6221，r2=0.9874；全長(zhǎng)(y，mm)與日齡(x，d)的關(guān)系式為：y=0.1399x2-0.904x+7.3907，r2=0.9884。

圖1 禾花鯉仔稚魚口徑長(zhǎng)(a)與體長(zhǎng)、全長(zhǎng)(b)變化Fig.1 Changes in mouth length (a), body length, and total length (b) of rice flower carp P. merus larvae and juveniles

2.1.2 禾花鯉仔魚的形態(tài)變化

1 d仔魚在孵化初期尚未開口，營(yíng)養(yǎng)主要來源于卵黃囊(圖2a)；2 d仔魚卵黃囊尚未完全消失，但已出現(xiàn)口裂、鰓弓(圖2b)；發(fā)育至第3 d，仔魚開口攝食(圖2c)。10 d首次觀察到鱗片，鱗片的出現(xiàn)標(biāo)志著仔魚期向稚魚期的轉(zhuǎn)變；生長(zhǎng)至17 d，所有鱗片基本長(zhǎng)齊，為稚魚過渡到幼魚的階段。

圖2 禾花鯉仔魚的形態(tài)特征Fig.2 Morphological characteristics of rice flower carp P. merus larvaea.1 d仔魚; b.2 d仔魚; c.3 d仔魚; YS.卵黃; E.眼.a.1 day old larva; b.2 day old larva; c.3 day old larva; YS.yolk sac; E.eye.

2.2 禾花鯉育苗池的浮游生物組成

14～30 d育苗池中浮游動(dòng)物的組成以輪蟲數(shù)量最多，隨著養(yǎng)殖天數(shù)的增加，輪蟲數(shù)量逐漸上升，但在26 d明顯減少，30 d又增加(圖3a)。枝角類和橈足類的數(shù)量呈現(xiàn)規(guī)律性上下浮動(dòng)。浮游植物組成以藍(lán)藻門和硅藻門為主，在22 d后藍(lán)藻門數(shù)量逐漸降低(圖3b)。硅藻門數(shù)量呈現(xiàn)先降低22 d后逐漸增加的趨勢(shì)。綠藻門自18 d開始出現(xiàn)，26 d開始可觀察到甲藻門和黃藻門的少量個(gè)體。

圖3 禾花鯉育苗池浮游生物餌料組成Fig.3 Composition of plankton food in the seedling pond of rice flower carp P. merus

2.3 禾花鯉稚魚腸道內(nèi)含物的餌料組成

14～30 d稚魚腸道內(nèi)含物的浮游植物組成主要以藍(lán)藻門和硅藻門為主，綠藻門、甲藻門和黃藻門較少或幾乎觀察不到；22 d前，藍(lán)藻門和硅藻門共約占當(dāng)天總體組成比例的40%～60%，22 d后藍(lán)藻門和硅藻門的比例有所下降(圖4)。枝角類和橈足類組成比例隨著日齡增加逐漸提高，22 d后，腸道內(nèi)含物中生物總體組成轉(zhuǎn)變?yōu)橐灾穷惡蜆镒泐悶橹?，共約占當(dāng)天總體組成的40%～50%；輪蟲數(shù)量逐漸減少，26 d未觀察到輪蟲，30 d又觀察到少量輪蟲，約占1%。在22 d首次觀察到搖蚊幼蟲，且比例隨日齡逐漸增大。腸道中部分已消化成糊狀的食物占比相對(duì)較大，歸類為其他。

圖4 不同日齡的禾花鯉腸道內(nèi)含物組成Fig.4 Food item composition of intestinal contents of rice flower carp P. merus with different daily age

2.4 禾花鯉稚魚的攝食選擇性指數(shù)

14～30 d稚魚對(duì)枝角類和橈足類的偏好性強(qiáng)，攝食選擇性指數(shù)值均接近1，成為其重要的食物來源(圖5)。對(duì)于藍(lán)藻門、綠藻門的偏好性極差，攝食選擇性指數(shù)為0或負(fù)數(shù)，不會(huì)對(duì)其主動(dòng)選食，為被動(dòng)攝食。甲藻門攝食選擇性指數(shù)時(shí)正時(shí)負(fù)，攝食選擇不穩(wěn)定。在22 d，禾花鯉對(duì)黃藻門、甲藻門和硅藻門有明顯的選擇性，攝食選擇性指數(shù)為正。在26 d前，對(duì)輪蟲的偏好性強(qiáng)，攝食選擇性指數(shù)在0.9以上；在26 d，對(duì)輪蟲的攝食選擇性指數(shù)為-1，完全回避攝食，26 d后逐漸恢復(fù)攝食。

圖5 禾花鯉對(duì)不同餌料的選擇性指數(shù)Fig.5 The selectivity index E of food items in rice flower carp P. merus

2.5 禾花鯉仔稚魚消化器官的組織結(jié)構(gòu)觀察

2.5.1 口咽腔

第3天仔魚開口，口腔表面的黏膜層發(fā)育出復(fù)層扁平上皮及少量杯狀細(xì)胞，但未發(fā)現(xiàn)味蕾，黏膜層較薄，咽部出現(xiàn)角質(zhì)墊(圖6a)。發(fā)育至第5天，黏膜層加厚，可見黏膜下層、肌肉層、漿膜層，杯狀細(xì)胞逐漸增多，味蕾開始出現(xiàn)，黏膜上皮由直線型變?yōu)椤鞍肌毙?，隨后逐漸發(fā)育出齒囊(圖6b、c)。隨著日齡增加，黏膜層逐漸加厚，黏液細(xì)胞增多(圖6d)；第21天，口咽腔已基本發(fā)育完全(圖6e)。

圖6 禾花鯉仔稚魚消化器官的組織學(xué)變化Fig.6 Histologic changes in digestive organs of rice flower carp P. merus larvae and juvenilea.3 d口咽腔縱切; b.6 d口咽腔縱切; c.13 d口咽腔橫切; d.13 d口咽腔縱切; e.21 d口咽腔橫切; f.8 d食道橫切; g.19 d食道橫切; h.30 d食道橫切; i.3 d腸道縱切; j.6 d腸道縱切; k.12 d腸道縱切; l.12 d腸道縱切; m.15 d 腸道橫切; n.15 d腸道及肝胰臟縱切; o.17 d腸道及肝胰臟橫切; p.17 d腸道縱切; q.19 d 腸道縱切; r.23 d腸道及肝胰臟縱切; s.29 d腸道橫切; t.30 d腸道及肝胰臟橫切; u.8 d肝胰臟縱切; v.29 d肝胰臟橫切. HP.角質(zhì)墊; GC.杯狀細(xì)胞; DS.齒囊; SSE.復(fù)層扁平上皮; TB.味蕾; EP.食道; EC.食物團(tuán); L.肝臟; SB.紋狀緣; I.腸; AI.前腸; HI.后腸; NC.核上內(nèi)容物; MS.肌肉層; CV.中央靜脈; P.胰臟; IV.腸絨毛; HS.肝血竇; LC.肝臟細(xì)胞; LV.肝臟空泡.a.longitudinal section of oropharyngeal cavity in 3 d; b.longitudinal section of oropharyngeal cavity in 6 d; c.cross section of oropharyngeal cavity in 13 d; d.longitudinal section of oropharyngeal cavity in 13 d; e.cross section of oropharyngeal cavity in 21 d; f.cross section of esophagus in 8 d; g.cross section of esophagus in 19 d; h.cross section of esophagus in 30 d; i.longitudinal section of intestine in 3 d; j.longitudinal section of intestine in 6 d; k.longitudinal section of intestine in 12 d; l.longitudinal section of intestine in 12 d; m.cross section of intestine in 15 d; n.longitudinal section of intestine and hepatopancreas in 15 d; o.cross section of intestine and liver in 17 d; p.longitudinal section of intestine in 17 d; q.longitudinal section of intestine in 19 d; r.longitudinal section of intestine and hepatopancreas in 23 d; s.cross section of hepatopancreas in 29 d; t.cross section of intestine and hepatopancreas in 30 d; u.longitudinal section of hepatopancreas in 8 d; v.cross section of liver in 29 d. HP.horny pad; GC.goblet cell; DS.dental sac; SSE.stratified squamous epithelium; TB.taste buds; EP.esophagus; EC.esophageal contents; L.liver; SB.striated border; I.intestine; AI.forgut; HI.hindgut; NC.supran uclear content; MS.muscle layer; CV.central vein; P.pancreas; IV.intestinal villus; HS.hepatic sinusoid; LC.liver cell; LV.liver vacuole.

2.5.2 食道

食管初始為半封閉狀態(tài)，食道短且狹窄，由復(fù)層鱗狀上皮構(gòu)成黏膜層，發(fā)育至第8天，食道仍未完全貫通(圖6f)，后期逐漸出現(xiàn)褶皺及杯狀細(xì)胞，黏膜層出現(xiàn)橫紋肌纖維。發(fā)育至第19天食道可見大量杯狀細(xì)胞，橫紋肌纖維逐漸增厚，但未見黏膜下層及肌層(圖6g)，至第30天肌層相繼出現(xiàn)(圖6h)。

2.5.3 腸道

仔魚在剛孵出時(shí)消化管位于卵黃囊與脊索之間，呈直管狀，出膜后第2天卵黃囊變小(圖2)。第3天逐漸消失，仔魚開口后進(jìn)入混合營(yíng)養(yǎng)期，腸腔內(nèi)可見食物團(tuán)，出現(xiàn)褶皺及單層柱狀細(xì)胞，但褶皺不明顯(圖6i)。第6天出現(xiàn)較薄的環(huán)肌，首次觀察到杯狀細(xì)胞和紋狀緣(圖6j)。隨著日齡增加，腸腔褶皺越來越明顯，高度不斷增加，杯狀細(xì)胞逐漸增多，發(fā)育至第12天，出現(xiàn)前腸和后腸，最先出現(xiàn)核上內(nèi)容物的是前腸(圖6k、l)。后期腸道不斷增加，形成復(fù)雜的彎曲形狀(圖6p、r)，發(fā)育至第30天，紋狀緣已經(jīng)非常明顯，杯狀細(xì)胞豐富，腸道的形態(tài)發(fā)育和細(xì)胞分化基本完善(圖6s)。

2.5.4 肝胰臟

在仔魚生長(zhǎng)至第3天時(shí)，可見腸道兩側(cè)出現(xiàn)疑似肝臟細(xì)胞團(tuán)，肝細(xì)胞形態(tài)不明顯，細(xì)胞核顏色較深(圖6i)。隨后體積不斷增大，發(fā)育至第8天可觀察到明顯的中央靜脈及肝細(xì)胞索，隨著營(yíng)養(yǎng)積累，肝臟開始出現(xiàn)空泡(圖6u)，第29天肝臟空泡增多(圖6v)。胰臟在第8天觀察到，且分布較復(fù)雜散亂，呈彌散型(圖6n，r，t，u)。

2.6 禾花鯉仔稚魚消化酶活性變化

仔魚開口前就具有消化酶活性(圖7)。8～10 d脂肪酶活性升至最大值，接著出現(xiàn)下降，14～26 d基本穩(wěn)定，26 d后急劇增加(圖7a)。淀粉酶活性從開口后第4 d逐漸下降，最低值出現(xiàn)在第8天，隨后逐漸上升再下降，直到第30天達(dá)到最大值(圖7b)。堿性蛋白酶活性在開口后有明顯上升；酸性蛋白酶在第14天和第26天出現(xiàn)峰值；且酸性蛋白酶和堿性蛋白酶的活性變化呈互補(bǔ)關(guān)系，當(dāng)酸性蛋白酶活性升高時(shí)，堿性蛋白酶活性降低，反之亦然(圖7c)。第4天堿性磷酸酶活性出現(xiàn)峰值；第8天出現(xiàn)最高值，活性為0.21(圖7d)。

圖7 禾花鯉仔稚魚消化酶活性變化Fig.7 Changes in digestive enzyme activities of rice flower carp P. merus larvae and juvenile

3 討 論

3.1 禾花鯉的生長(zhǎng)與稚魚后期攝食選擇

第3天仔魚即開口攝食，混合營(yíng)養(yǎng)期持續(xù)不到1 d?；旌蠣I(yíng)養(yǎng)階段是仔魚培育過程的關(guān)鍵時(shí)期，其組織形態(tài)和生理機(jī)能都將發(fā)生改變[14]，此時(shí)需要給予仔魚營(yíng)養(yǎng)豐富的適口餌料以提高其成活率。第10天部分禾花鯉已經(jīng)長(zhǎng)出鱗片，且10 d前出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢的情況。有研究表明，在鱗片出現(xiàn)前后魚全長(zhǎng)的日增長(zhǎng)會(huì)下降，是因?yàn)橛糜谏L(zhǎng)的部分能量被用于了鱗片形成[15]。

仔魚口徑長(zhǎng)短與攝食的餌料規(guī)格密切相關(guān)。有研究報(bào)道，鯉魚開口攝食的體長(zhǎng)為6.6 mm，口徑為0.57 mm，能攝食285～425 μm的餌料，不能攝食水蚤和裸腹溞(Moina)成體，但可將其幼體作為攝食對(duì)象[9]。禾花鯉開口攝食的體長(zhǎng)和口徑長(zhǎng)相對(duì)較小，分別為5.74、0.29 mm，仔魚從開口第3天至第30天，口徑增大逾6倍，為1.82 mm。參考李云蘭等[16]的方法(飼料粒徑=口徑長(zhǎng)×75%×25%)，計(jì)算得到禾花鯉的適宜飼料粒徑，孵化后3～14 d為50～170 μm，14～30 d為170～350 μm。推測(cè)14 d前可能主要以小型輪蟲幼體(40～150 μm)和小型藻類(<100 μm)為食，隨著口徑長(zhǎng)增大而主動(dòng)選擇攝食體型更大的枝角類和橈足類，14 d后對(duì)浮游動(dòng)物的攝食量也逐漸加大。至第22天時(shí)，首次從禾花鯉稚魚體內(nèi)觀察到搖蚊幼蟲，搖蚊幼蟲屬于底棲生物，體現(xiàn)禾花鯉雜食的特性。

禾花鯉攝食選擇與育苗池中浮游生物組成有一定關(guān)聯(lián)。在14～30 d，育苗池中浮游植物主要以藍(lán)藻門和硅藻門為主，優(yōu)勢(shì)種分別為微囊藻和直鏈藻，但攝食選擇性結(jié)果顯示，禾花鯉對(duì)其無明顯的主動(dòng)選擇性，這可能與養(yǎng)殖環(huán)境中它們占主要比例有關(guān)，導(dǎo)致禾花鯉被動(dòng)選擇食物。藍(lán)藻門中藻類大多含有微囊藻毒素，魚類攝食大量藍(lán)藻會(huì)對(duì)其組織發(fā)育造成損傷。但有研究表明，鳙魚(Aristichthysnobilis)可長(zhǎng)期耐受高含量的微囊藻毒素[17]。而禾花鯉屬于被動(dòng)攝食藍(lán)藻，是否對(duì)藍(lán)藻有很強(qiáng)的消化能力和耐受力，還需深入研究。育苗池中藍(lán)藻數(shù)量較多，表明應(yīng)及時(shí)調(diào)整水質(zhì)環(huán)境，以達(dá)到提高苗種成活率的目的。

26 d前育苗池中浮游動(dòng)物以輪蟲數(shù)量最多，稚魚開始主動(dòng)選擇攝食輪蟲。26～30 d禾花鯉對(duì)輪蟲攝食出現(xiàn)從無到恢復(fù)攝食的情況。推測(cè)一方面與育苗池中輪蟲數(shù)量出現(xiàn)先減后增有關(guān)，另一方面與消化器官發(fā)育完善而需攝食高營(yíng)養(yǎng)的動(dòng)物餌料有關(guān)。因此，在14～30 d，禾花鯉對(duì)浮游動(dòng)物的攝食量逐漸升高，且主要以大型蛋白動(dòng)物性餌料為食，說明此時(shí)需要攝入大量營(yíng)養(yǎng)(蛋白質(zhì)和脂肪)才能滿足稚魚的生長(zhǎng)發(fā)育，應(yīng)給予營(yíng)養(yǎng)均衡的配合飼料并混合浮游動(dòng)物投喂。其他藻類數(shù)量較少，攝食量也少。

3.2 禾花鯉消化器官發(fā)育與消化酶變化

仔魚開口后消化酶活性會(huì)受到消化器官生長(zhǎng)發(fā)育的影響。3 d后仔魚各部分消化器官已開始分化，第6天首次從腸道內(nèi)觀察到杯狀細(xì)胞，腸道中的杯狀細(xì)胞可分泌黏液和消化酶，促進(jìn)食物的消化吸收。此時(shí)也出現(xiàn)紋狀緣，可增大腸道吸收表面積，它是魚類幼體發(fā)育過程中獲得成體消化模式的重要標(biāo)志和關(guān)鍵步驟[18]。第8天堿性磷酸酶出現(xiàn)最大值，說明腸道功能發(fā)育完善[19]。第4天堿性磷酸酶活性出現(xiàn)峰值，可能受仔魚開口攝食的影響和與腸道功能開始發(fā)育有關(guān)。8 d后淀粉酶生產(chǎn)的中心器官肝胰臟逐漸發(fā)育完善，酶活性隨之增強(qiáng)。脂肪酶活性在8～10 d突然增加達(dá)到最大值，可能與第8天肝臟逐漸發(fā)育出中央靜脈和肝細(xì)胞索，并開始貯存糖原進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)積累有關(guān)；后期脂肪酶活性下降可能與仔魚組織蛋白的增加有關(guān)[20]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，禾花鯉仔魚在開口前已具有消化酶活性，與劉亞秋等[21-22]研究結(jié)果一致，其認(rèn)為仔魚開口前消化酶活性受基因決定。

3.3 禾花鯉消化器官發(fā)育與攝食消化

3 d仔魚開口攝食，口腔內(nèi)出現(xiàn)少量杯狀細(xì)胞，對(duì)堅(jiān)硬食物起到潤(rùn)滑作用。5 d觀察到咽齒齒囊，6～10 d長(zhǎng)出咽齒，禾花鯉的咀嚼能力得到加強(qiáng)。10 d前，仔魚食道未完全打開，無法完全適應(yīng)外源性營(yíng)養(yǎng)攝入，生長(zhǎng)較緩慢。根據(jù)討論3.1節(jié)可知，前期主要以微小的藻類和輪蟲幼體為食。因此，在育苗池培育小型浮游動(dòng)物的同時(shí)也要培育一定量的浮游植物，為仔魚提供豐富的食物來源。10 d后腸道功能逐漸加強(qiáng)，發(fā)育至第12天出現(xiàn)了核上內(nèi)容物和空泡結(jié)構(gòu)，說明腸道細(xì)胞已可進(jìn)行胞飲作用和細(xì)胞內(nèi)消化吸收蛋白質(zhì)大分子[18]。第14天和第26天酸性蛋白酶出現(xiàn)峰值，預(yù)示著腸道消化蛋白機(jī)能的逐漸完善，14 d后食性轉(zhuǎn)變?yōu)閯?dòng)物性，生長(zhǎng)速度明顯加快。因此，稚魚期的禾花鯉更傾向于攝食體格較大的浮游動(dòng)物(枝角類和橈足類) 來為機(jī)體提供能量，進(jìn)而導(dǎo)致第26天時(shí)對(duì)輪蟲偏好性降低，攝食由主動(dòng)變?yōu)楸粍?dòng)。30 d消化器官基本發(fā)育完全，更需攝食營(yíng)養(yǎng)豐富餌料進(jìn)行能量補(bǔ)充。

3.4 禾花鯉消化酶活性變化與餌料消化利用

由本試驗(yàn)結(jié)果看，2～4 d是仔魚內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)換為外源性營(yíng)養(yǎng)的轉(zhuǎn)換期；10～17 d是仔魚轉(zhuǎn)變?yōu)橹婶~的轉(zhuǎn)變期。仔魚在轉(zhuǎn)變期間攝食不足時(shí)，機(jī)體會(huì)通過水解體內(nèi)貯存的脂肪來補(bǔ)充能量，此時(shí)可適量增加餌料脂肪的占比。轉(zhuǎn)換期前仔魚具有較高的淀粉酶活性，這可能與本身卵黃囊中含有較豐富的糖原有關(guān)[19]。轉(zhuǎn)換期后淀粉酶活性逐漸降低，可能是卵黃囊消失使糖原下降所致。這反映了8 d前仔魚發(fā)育階段的碳水化合物被用作能量消耗，不是作為營(yíng)養(yǎng)被吸收[21]。8 d后淀粉酶活性隨之增強(qiáng)，說明此時(shí)仔魚可能開始適應(yīng)對(duì)碳水化合物的利用[23]；22 d后淀粉酶活性先降后升，可能是消化器官發(fā)育與糖代謝調(diào)節(jié)不同步所致。高活性淀粉酶可促進(jìn)藻類的消化，第22天禾花鯉對(duì)黃藻、甲藻和硅藻有明顯的攝食，刺激淀粉酶的合成和分泌。有研究表示，鯉魚可有效地利用碳水化合物作為能量來源[24]。因此，仔魚后期時(shí)可在餌料中添加糖的占比為機(jī)體提供能量。

禾花鯉仔魚開口前堿性蛋白酶活性較低，開口攝食后活性增加，可能在一定程度上受到外源食物刺激酶分泌增加的影響。禾花鯉仔稚魚前期(4～10 d)時(shí)堿性蛋白酶活性較酸性蛋白酶高，14 d后稚魚主要以動(dòng)物蛋白餌料為食，且轉(zhuǎn)變?yōu)橐运嵝缘鞍酌赶鞍诪橹鳌＜t等[8]認(rèn)為，由于消化器官和組織發(fā)育的完善，對(duì)蛋白消化起主導(dǎo)作用的酶種類會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)變；常青等[25]表示，在仔稚魚后期酸性蛋白酶在蛋白消化過程中更為重要，且在仔魚發(fā)育早期較高活性的堿性蛋白酶可以補(bǔ)償酸性蛋白酶的缺乏。說明兩者在早期發(fā)育階段可以起到互補(bǔ)作用。

4 結(jié) 論

綜上，禾花鯉屬雜食性魚類，仔稚魚的攝食與消化器官發(fā)育、消化酶活性、養(yǎng)殖環(huán)境中餌料組成有關(guān)；仔魚開口后消化酶活性會(huì)受消化器官生長(zhǎng)發(fā)育的影響；隨著消化器官發(fā)育的完善，禾花鯉需要攝食營(yíng)養(yǎng)豐富餌料進(jìn)行能量補(bǔ)充。因此，為促進(jìn)禾花鯉仔稚魚的生長(zhǎng)和提高育苗成活率，在苗種培育過程可根據(jù)不同發(fā)育時(shí)期消化系統(tǒng)發(fā)育、攝食選擇以及消化酶變化的綜合體現(xiàn)來相應(yīng)調(diào)整飼料配方。本試驗(yàn)結(jié)果表明，3～14 d禾花鯉飼料適宜粒徑為50～170 μm，此時(shí)可在餌料中增加糖的占比，或在育苗池中同時(shí)培養(yǎng)浮游動(dòng)物和植物；在轉(zhuǎn)變期10～14 d可適量增加餌料中脂肪的占比；14～30 d禾花鯉食性為雜食偏動(dòng)物型，此時(shí)需營(yíng)養(yǎng)均衡的配合飼料(蛋白和脂肪)并混合浮游動(dòng)物投喂，飼料適宜粒徑為170～350 μm。