王敏，李明俊

（1.廣東茂名農(nóng)林科技職業(yè)學(xué)院廣東茂名 525000；2.廣東茂名農(nóng)林科技職業(yè)學(xué)院廣東茂名 525000）

1 我國部分地區(qū)豬弓形蟲流行病學(xué)

從1977 年豬弓形蟲病被報(bào)道至今，我國關(guān)于豬弓形蟲病研究已經(jīng)過去40 多年。整理我國部分地區(qū)豬弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查資料，分析如下：①我國豬弓形蟲感染情況較為普遍，全國豬弓形蟲平均感染率為40%左右，大部分省份弓形蟲感染率為20%～45%，弓形蟲感染情況最嚴(yán)重的為重慶地區(qū)，為75.94%，感染率最低是西藏地區(qū)，為5.1%[1-7]；②在我國，豬弓形蟲感染情況較為嚴(yán)重地區(qū)主要分布在沿海亞熱帶地區(qū)，而在相對(duì)寒冷且干燥的地區(qū)豬弓形蟲感染率則低。如西藏地區(qū)藏豬弓形蟲感染僅為5.1%；③豬弓形蟲感染還與豬場(chǎng)的飼養(yǎng)方式和豬自身免疫情況有關(guān)，散戶豬場(chǎng)感染率高于規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)，經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)胎次數(shù)越多弓形蟲感染率越高，并且可能多次反復(fù)感染弓形蟲。

2 臨床癥狀

豬弓形蟲急性感染主要表現(xiàn)為：稽留熱，體溫為40～42℃，精神沉郁甚至食欲廢絕，便秘與腹瀉交替出現(xiàn)，其耳后和腹下部出現(xiàn)血斑，并伴有腹股溝淋巴結(jié)腫大，持續(xù)時(shí)間大概7～10d。若感染豬能挺過這段時(shí)間，其食欲和體溫逐漸恢復(fù)正常，弓形蟲在其肌肉、腦部等形成包囊，轉(zhuǎn)化為慢性感染，若機(jī)體免疫系統(tǒng)受損，則再次出現(xiàn)急性感染癥狀。一般免疫力正常的豬感染弓形蟲無明顯癥狀，呈慢性感染，當(dāng)豬弓形蟲感染呈急性癥狀時(shí)常引起死亡[8]。

3 豬弓形蟲病臨床診斷技術(shù)

3.1 弓形蟲病診斷技術(shù)概述

豬弓形蟲感染診斷技術(shù)主要分為3 類：①弓形蟲病原檢測(cè)，如取檢測(cè)豬的血液、組織液進(jìn)行涂片，以是否觀察到弓形蟲蟲體作為診斷依據(jù)，或者從疑似弓形蟲感染的豬取淋巴結(jié)等組織進(jìn)行處理，然后感染小鼠，對(duì)感染小鼠進(jìn)行追蹤觀察，并取有明顯癥狀的腹水或腦組織進(jìn)行涂片，以是否觀察到弓形蟲蟲體或腦包囊作為診斷依據(jù)；②弓形蟲分子生物學(xué)診斷，主要以是否擴(kuò)增到弓形蟲特異性片段為診斷依據(jù)。如傳統(tǒng)PCR 擴(kuò)增弓形蟲529bp，巢式PCR 檢測(cè)弓形蟲P30 基因，若兩者擴(kuò)增結(jié)果均為陽性，則基本可判斷為該豬已感染弓形蟲；③弓形蟲免疫學(xué)診斷，主要以是否檢測(cè)到抗弓形蟲抗體或抗原作為診斷依據(jù)，常用方法有IFA、IHA、MAT、ELISA 和GICA。

3.2 常用弓形蟲感染診斷方法優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析

①弓形蟲蟲體診斷，優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確；缺點(diǎn)：診斷時(shí)間長(zhǎng)、需要飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、對(duì)診斷環(huán)境和診斷人員技術(shù)有嚴(yán)格要求；適用對(duì)象：實(shí)驗(yàn)室研究；②弓形蟲分子生物學(xué)診斷，優(yōu)點(diǎn)：特異性高、靈敏度高、診斷方法種類多樣；缺點(diǎn)：需要費(fèi)用高昂的儀器和標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境、對(duì)診斷人員技術(shù)有嚴(yán)格要求；適用對(duì)象：一般用于實(shí)驗(yàn)室研究；③弓形蟲免疫學(xué)診斷，優(yōu)點(diǎn)：可批量檢測(cè)、對(duì)診斷環(huán)境和診斷人員要求相對(duì)較低、操作相對(duì)簡(jiǎn)單；缺點(diǎn)：特異性不及弓形蟲蟲體診斷，靈敏度不及分子生物學(xué)診斷；適用對(duì)象：一般用于臨床診斷[9]。

3.3 臨床常用診斷方法概述

IHA，間接血凝試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱，英文全名為：indirect hemagglutination test，1957 年Jacob 和Lunde 率先用于檢測(cè)弓形蟲感染，1994 年曾為國際認(rèn)定的弓形蟲診斷方法兩種之一，其優(yōu)點(diǎn)：價(jià)格合理、特異性強(qiáng)且操作方便。實(shí)驗(yàn)主要通過紅細(xì)胞吸附弓形蟲特異性抗原，檢測(cè)血清中有抗弓形蟲抗體，若紅細(xì)胞不穩(wěn)定，易出現(xiàn)假陽性，且重復(fù)性差，臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)敏感性不及ELISA[10]。

MAT，改良凝集試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱，英文全名為：modified agglutination test，是其他國家用于豬弓形蟲感染診斷使用較多的診斷方法[11]。與ELISA、IHA 和LAT 一并，四種方法檢測(cè)同樣豬血清，結(jié)果顯示MAT 的敏感性最高[12]。利用MAT 檢測(cè)仔豬弓形蟲、蠕蟲和病毒感染陽性血清，結(jié)果顯示：無交叉感染，該方法的特異性較高[13]。但由于成本較高，最終沒有被廣泛推廣。

ELISA，間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱，英文全名：enzyme-linked immunosorbent assay，1976 年Voller 首次用于弓形蟲診斷，是我國近20 年豬弓形蟲病診斷使用最多的診斷方法，檢測(cè)內(nèi)容為豬抗弓形蟲IgG。優(yōu)點(diǎn)：診斷時(shí)間較短、特異性高、靈敏性高、重復(fù)性好、檢測(cè)內(nèi)容靈活、可批量檢測(cè)、操作可程序化，有望實(shí)現(xiàn)工業(yè)化檢測(cè)，是理想的臨床檢測(cè)方法。

GICA，為膠體金免疫層析技術(shù)的簡(jiǎn)稱，英文全名為：colloidal gold immunochromatography assay。報(bào)道顯示：已制備的以弓形蟲分泌抗原為檢測(cè)對(duì)象的膠體金試紙條，敏感性高，與IHA 符合率為82.4%[14]。Huang 等用膠體金與重組融合蛋白吸附，制備金標(biāo)試紙條，用于檢測(cè)貓弓形蟲抗體，結(jié)果顯示該實(shí)驗(yàn)的敏感性達(dá)100%，特異性達(dá)94.5%[15]。2010 年李聰穎制備的可用于山羊弓形蟲病檢測(cè)的試紙條，結(jié)果顯示：樣品檢測(cè)與ELISA 檢測(cè)結(jié)果符合率為85%[16]。膠體金免疫層析技術(shù)操作簡(jiǎn)單、攜帶方便、檢測(cè)過程短，是臨床檢測(cè)中理想檢測(cè)方法。

4 弓形蟲病診斷方法的發(fā)展現(xiàn)狀

4.1 弓形蟲病診斷方法常用診斷抗原

臨床上弓形蟲病診斷方法主要是以弓形蟲全蟲蛋白或弓形蟲分泌蛋白為診斷抗原，檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)抗弓形蟲抗體，或者制備弓形蟲分泌抗原重組蛋白的抗體檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)的弓形蟲抗原，目前文獻(xiàn)報(bào)道主要有基于弓形蟲MIC3、SAG1、SAG2、SAG3、GRA6、GRA7、BAG1 等基因型檢測(cè)方法的研究，但普遍都存在特異性和敏感性不夠理想的問題[17]。

4.2 目前弓形蟲病診斷方法的不足與可能的改進(jìn)措施

以豬弓形蟲病診斷試劑盒為例：①抗體檢測(cè)對(duì)象均為IgG 抗體，而IgG 抗體檢測(cè)臨床價(jià)值不突出，檢測(cè)豬抗IgM 抗體作為診斷依據(jù)效果更為理想。豬感染弓形蟲，一般在7d 左右出現(xiàn)抗弓形蟲IgM 抗體，并逐漸升高至頂峰，在2 個(gè)月左右消失，而抗弓形蟲IgG 抗體則在1 月后出現(xiàn)，一般可以維持1 年以上。一般可根據(jù)豬血清中是否含抗弓形蟲IgM 抗體結(jié)果，判定該豬是否在近期感染弓形蟲，而抗弓形蟲IgG 抗體存在時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)抗弓形蟲IgG 抗體可作為弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查研究依據(jù)，但作為藥物防治的指導(dǎo)意義不大；②可嘗試豬弓形蟲抗IgM 抗體和弓形蟲抗原聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行判斷，IgM 是感染初期產(chǎn)生的抗體，一般可作為早期診斷依據(jù)，IgG 抗體產(chǎn)生時(shí)間晚于IgM 的主要抗體[18]，而弓形蟲分泌抗原的出現(xiàn)則提示極有可能是急性感染，因此抗原與IgM 抗體檢測(cè)聯(lián)合使用具有較好的臨床診斷價(jià)值。■