劉艷紅，李虎，楊翔，鄭瑋

子宮內(nèi)膜癌(endometrial cancer，EC)是常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤，發(fā)病率占女性惡性腫瘤的第8位[1]。近年來，隨著早期診斷及影像技術(shù)的發(fā)展，EC發(fā)病率呈逐漸上升的趨勢[2]。EC的治療方式以手術(shù)為主，以化療、內(nèi)分泌治療及免疫治療為輔。目前EC患者的總體生存率無顯著升高，患者由于腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移導致生存預(yù)后不良[3]。EC發(fā)生機制與癌基因的異常激活或抑癌基因的失活有關(guān)。長鏈非編碼RNA(LncRNA)結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(colon cancer associated transcript 1，CARLo-5)基因位于8q24.21，參與正常細胞的分化發(fā)育等生物學過程。近年來發(fā)現(xiàn)，LncRNACARLo-5通過影響下游癌基因的表達，促進結(jié)直腸癌及卵巢癌等腫瘤的進展，導致腫瘤耐藥性的形成[4-5]。細胞周期蛋白依賴性激酶2 (cyclin-dependent kinase 2，CDK2)編碼的蛋白是細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶復合物的催化亞基，它調(diào)節(jié)細胞周期的進程，促進G1到S期的轉(zhuǎn)變。 CDKN1A是一種 G1細胞周期進程的負性調(diào)節(jié)因子，介導p53依賴的細胞周期G1期阻滯。CDK2和CDKN1A的表達失衡在人類多種腫瘤中亦較為常見[6-7]。本研究通過檢測EC患者腫瘤組織中LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A的表達，初步探討其臨床意義，報道如下。

自適應(yīng)天線陣列亦稱為智能天線[1]，它的工作過程為不斷地調(diào)整權(quán)值，使其快速地收斂于當前的最優(yōu)解。把用來調(diào)整權(quán)值的算法，稱為自適應(yīng)波束形成算法，它是此天線系統(tǒng)的核心，是決定系統(tǒng)性能的關(guān)鍵因素，也是進行智能天線陣列一系列研究的重點和關(guān)鍵。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1月—2018年1月廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院婦科診治EC患者80例，術(shù)中取癌組織及癌旁組織(距癌組織邊緣>2 cm)置于液氮中備用。患者年齡28～71(51.4±10.1)歲；組織學類型：子宮內(nèi)膜樣腺癌52例，黏液/漿液性腺癌28例；腫瘤大?。骸? cm 49例，>5 cm 31例；組織分化程度：高中分化55例，低分化25例；FIGO分期：Ⅰ～Ⅱ期56例，Ⅲ～Ⅳ期24例；肌層浸潤深度：淺肌層(<1/2)58例，深肌層(≥1/2)22例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移68例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會標準，患者或家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準：①病理學檢查明確為EC；②臨床及隨訪資料完備，患者能夠配合治療隨訪；③首次診治，術(shù)前無腫瘤治療史。(2)排除標準：①有嚴重的基礎(chǔ)疾??；②合并其他惡性腫瘤；③患者處于妊娠期或哺乳期。

結(jié)合實際所需的冷熱負荷，控制和調(diào)整空調(diào)系統(tǒng)的風水系統(tǒng)，設(shè)定設(shè)備的冷熱溫度，確保整個系統(tǒng)達到最佳運行目標。

LncRNA是一種無蛋白編碼功能的長鏈核苷酸分子，參與正常細胞周期和程序性細胞死亡的調(diào)控過程。LncRNACARLo-5又稱為CCAT1，是長度為2.6 kb的LncRNA。LncRNACARLo-5不僅參與調(diào)節(jié)細胞內(nèi)染色體相互作用，還可以作為微小RNA的分子海綿，調(diào)控下游基因的表達[11-12]。LncRNACARLo-5作為一種致癌基因可促進腫瘤發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，LncRNACARLo-5在結(jié)直腸癌中表達顯著升高，并促進結(jié)腸癌細胞的增殖和侵襲，且發(fā)現(xiàn)該LncRNA的過表達是患者預(yù)后不良的標志[13]。本研究中，EC患者癌組織中LncRNACARLo-5表達顯著上調(diào)，與Zhao等[14]學者報道結(jié)果一致。提示LncRNACARLo-5作為一種促癌基因，可促進EC的惡性進展。腫瘤中LncRNACARLo-5的表達受到多種癌基因的表達調(diào)控，如腫瘤發(fā)生時癌基因c-myc表達顯著上調(diào)，而c-myc能夠結(jié)合到LncRNACARLo-5啟動子區(qū)域的E-盒區(qū)域，促進LncRNACARLo-5的表達[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，LncRNACARLo-5高表達患者的腫瘤臨床分期較高、深肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，表明EC中LncRNACARLo-5參與促進EC的疾病進展。既往在細胞實驗研究中發(fā)現(xiàn)，LncRNACARLo-5能夠通過誘導CDK的表達，促進腫瘤細胞G0期向G1期的轉(zhuǎn)換，導致腫瘤細胞過度增殖；此外，LncRNACARLo-5能夠誘導腫瘤細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程的轉(zhuǎn)錄因子如snail、Twist等的表達，導致下游基質(zhì)金屬蛋白酶2/9表達增加，促進細胞外基質(zhì)的降解，引起腫瘤細胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力增強，導致腫瘤進展[14]。本研究中EC癌組織LncRNACARLo-5高表達患者生存預(yù)后較差，表明LncRNACARLo-5高表達提示EC患者的不良生存預(yù)后。因此，LncRNACARLo-5是判斷EC患者預(yù)后的腫瘤標志物，針對LncRNACARLo-5的治療可能有助于改善EC患者的生存預(yù)后，值得深入研究[16]。

1.3.1 組織LncRNACARLo-5表達檢測：采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測。取癌組織及癌旁組織各約50 mg，液氮中研缽研磨，按Trizol法提取組織RNA，DEPC水溶解，微量分光光度計(Narodrop2000,美國賽默飛公司)鑒定RNA濃度及純度。以RNA為模板進行反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后進行qRT-PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系為模板cDNA 1 μl，2×SYBR Green Mix 5 μl，ROXⅡ 0.2 μl，上游和下游引物各0.5 μl，無RNA酶水2.6 μl。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性4 min，94℃變性30 s，60℃退火34 s，72℃延伸34 s，共40個循環(huán)。CARLo-5上游引物：5'-TTTATGCTTGAGCCTTGA-3'，下游引物：5'-CTTGCCTGAAATACTTGC-3'；內(nèi)參GAPDH上游引物5'-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3'，下游引物:5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3'。結(jié)果采用2-ΔΔCt法表示，每個樣本重復3次，結(jié)果取平均值。以LncRNACARLo-5相對表達量的平均值1.12為界，分為LncRNACARLo-5高表達40例和低表達40例。

1.3.2 組織CDK2和CDKN1A表達檢測：采用免疫組化檢測。取癌組織及癌旁組織福爾馬林固定24 h，石蠟包埋，切片后70℃烤片2 h；二甲苯脫蠟后梯度乙醇水化；pH 6.8檸檬酸緩沖液進行抗原熱修復；自然冷卻至室溫后，雙氧水去除內(nèi)源性過氧化物酶；一抗孵育過夜 (CDK2稀釋比1∶200，CDKN1A稀釋比1∶500，CDK2、CDKN1A抗體購自Abcam公司)；二抗室溫孵育2 h，DAB顯色20 s，蘇木素復染10 s，鹽酸酒精分化3 s，梯度乙醇脫水封片。染色結(jié)果以染色強度評分和染色面積評分乘積表示[8]，染色強度評分：無著色為0分，淺棕色 1分，深棕色2分；染色面積評分：面積≤25%為1分，25%<面積≤50%為2分，面積>50%為3分。結(jié)果≥4分判定為高表達，評分<4分為低表達，其中CDK2高表達35例，低表達45例；CDKN1A高表達33例，低表達47例。

為了弄清楚蒸汽本身的安全風險，英國伯明翰大學研究人員設(shè)計了一種可以模擬電子煙蒸汽的裝置，并可以產(chǎn)生蒸汽冷凝液。隨后，研究人員從八名健康的非吸煙人士肺部提取了肺泡巨噬細胞，并將這些細胞分別暴露在普通電子煙液體、有尼古丁和沒有尼古丁的人工蒸汽冷凝液中。

1.3.3 隨訪：以門診或電話隨訪3年，內(nèi)容包括患者生存情況、疾病進展情況，隨訪自確診之日開始，截止日期為2021年2月1日，隨訪截止至患者死亡或隨訪時間結(jié)束。

2.4 LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表達與患者生存預(yù)后關(guān)系 EC患者80例隨訪過程中失訪2例，死亡14例，3年總體生存率(OS)為82.1%(64/78)。EC患者3年OS經(jīng)Kaplan-Meier分析(log-rank 檢驗)表明， LncRNACARLo-5高表達患者低于低表達患者，CDK2高表達患者低于低表達患者，CDKN1A高表達患者高于低表達患者(P均<0.05)，見表3。

2 結(jié) 果

2.1 癌組織及癌旁組織LncRNACARLo-5、CDK2、CDKN1A表達比較 EC患者癌組織LncRNACARLo-5相對表達量高于癌旁組織(P<0.01)；癌組織中CDK2棕黃色陽性染色主要位于腫瘤細胞的細胞核，癌組織中CDK2高表達率顯著高于癌旁組織(P<0.01)；CDKN1A棕黃色陽性染色主要位于腺上皮細胞的細胞核，癌組織中CDKN1A高表達率顯著低于癌旁組織(P<0.01)，見表1、圖1。

表1 癌組織及癌旁組織LncRNACARLo-5和CDK2、CDKN1A高表達比較

注：CDK2.細胞周期蛋白依賴性激酶2；CDKN1A.細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A。箭頭代表陽性染色細胞

供水水質(zhì)對水表計量準確度的影響，體現(xiàn)在兩個方面：①水體化學指標含量高，例如pH值在8.0以上，硫酸鹽和氯化物的含量在180mg/L以上，會導致管道內(nèi)部結(jié)垢，改變正常的過水流態(tài)，繼而造成計量偏差[2]。②水體中含有雜質(zhì)，例如泥沙、絲麻等，隨著時間延長，雜質(zhì)積累數(shù)量增多，如果堆積在水孔附近，會減小水孔截面積，因水流速度加快影響計量準確度。

表2 EC患者癌組織LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表達在不同臨床/病理特征中比較

EC是女性較為常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，大約占婦科腫瘤的30%。近年來隨著我國人民生活水平的不斷提高，EC的發(fā)病率和病死率有不斷升高的趨勢[9]。EC基本治療包括子宮切除術(shù)和雙側(cè)附件切除術(shù)，對于有高危因素的Ⅰ～Ⅱ期患者可術(shù)后予以輔助放療。對于晚期EC患者，手術(shù)加化療的治療方案可使EC患者獲得最佳療效。但EC，特別是高級別的EC患者腫瘤具有復發(fā)傾向，深入研究EC的診治方法，對于降低EC復發(fā)率，改善我國女性生命質(zhì)量意義較大。EC發(fā)病機制尚不清楚，目前認為，患者一般身體狀況、病理分期、組織學分級及治療方案等因素均是影響患者預(yù)后的因素[10]。尋找能夠反映EC疾病特征的分子指標，對于EC患者的治療選擇及預(yù)后判斷具有重要的價值。

在PP的注塑加工過程中，由于機械力、熱、氧對材料的作用，PP的分子鏈斷裂產(chǎn)生烷基自由基，由于環(huán)境中氧的存在，這些烷基自由基通過鏈增長、鏈支化及鏈終止等反應(yīng)形成醛、酮、羧酸、酯、γ-內(nèi)酮、水等小分子物質(zhì)[1]，這些小分子物質(zhì)會對注塑件的氣味、VOC造成很大的影響。但小分子物質(zhì)在存儲過程中會隨著時間而衰減[2]。因此，通過對注塑溫度和衰減的研究，尋找小分子物質(zhì)產(chǎn)生和衰減的規(guī)律，對車內(nèi)空氣質(zhì)量的管控有著重要的意義。

表3 LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A高低表達患者3年OS比較 [例(%)]

2.5 LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表達預(yù)測子宮內(nèi)膜癌價值分析 ROC曲線分析結(jié)果顯示，LncRNACARLo-5、CDK2、CDKN1A及3項聯(lián)合預(yù)測子宮內(nèi)膜癌的曲線下面積(AUC)分別為0.807、0.775、0.747、0.841，3項聯(lián)合檢測對子宮內(nèi)膜癌具有較高的診斷價值，見表4、圖2。

表4 LncRNACARLo-5、CDK2、CDKN1A及3項聯(lián)合預(yù)測子宮內(nèi)膜癌價值比較

圖2 ROC曲線分析LncRNACARLo-5、CDK2、CDKN1A及3項聯(lián)合檢測預(yù)測子宮內(nèi)膜癌價值

3 討 論

2.3 癌組織LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表達的相關(guān)性 Spearman秩相關(guān)分析顯示，癌組織LncRNACARLo-5與CDK2表達呈正相關(guān)(r=0.472，P=0.000)，與CDKN1A表達呈負相關(guān)(r=-0.455，P=0.000)。

1.3 觀測指標與方法

2.2 LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表達在不同臨床/病理特征中比較 EC患者血清LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表達在患者不同年齡、病理類型、腫瘤大小及分化程度中比較差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)；而在腫瘤臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、浸潤深肌層及伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中LncRNACARLo-5、CDK2呈高表達，CDKN1A呈低表達(P均<0.05)，見表2。

在高中物理知識的學習中，我們應(yīng)重視基礎(chǔ)概念、定理的理解和掌握，結(jié)合物理知識之間的關(guān)聯(lián)性，逐漸形成完善的物理知識框架，為自己物理綜合能力的提升打下堅實的基礎(chǔ).同時，我們要養(yǎng)成自主思考和探究的習慣，進一步加深自己對各種物理現(xiàn)象的認知，善于對物理習題進行總結(jié)，從題型、考查內(nèi)容等多個角度進行分析，促進自己解題能力的提升，在解題的過程中，要思路清晰、步驟嚴謹、正確率高，提高自己解題質(zhì)量，以達到提高自己物理成績的目的.

腫瘤細胞的惡性增殖與調(diào)控細胞周期的因子表達異常密切相關(guān)。CDK2屬于細胞周期蛋白依賴性激酶家族成員，是一種重要的細胞周期調(diào)控因子。CDK2是正常細胞分裂過程完成DNA復制的關(guān)鍵因子，促進G1期向S期的轉(zhuǎn)變并通過結(jié)合細胞周期素A調(diào)控S期的進程[17]。CDKN1A又稱為P21，能夠結(jié)合細胞周期素—周期素激酶復合物，發(fā)揮較強的細胞周期依賴性激酶抑制活性，參與正常細胞增殖、分化等生物學過程。研究表明，腫瘤中CDK2能夠發(fā)揮阻滯CDKN1A功能的作用，CDK2能夠結(jié)合細胞周期蛋白E1，形成磷酸化CAK復合物，抑制CDKN1A對Rb的去磷酸化作用，Rb磷酸化后釋放E2F，啟動細胞周期相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄[18]。本研究中，EC癌組織中CDK2表達上調(diào)，而CDKN1A表達下調(diào)，與以往研究報道一致[19]。CDK2與CDKN1A均是調(diào)控細胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換的重要因子，受Obg樣ATP酶1(OLA1)因子的表達調(diào)控。研究表明，OLA1能夠結(jié)合CDKN1A并抑制CDKN1A的表達，激活CDK2的活性，促進腫瘤細胞的增殖，并抑制腫瘤細胞的凋亡[7]。但亦有學者發(fā)現(xiàn)[20]，除CDKN1A外，CDK2的表達還受到P57的抑制，過表達P57能夠抑制CDK2—細胞周期素E1復合體的周期促進功能。因此，EC中CDK2是否受CDKN1A直接調(diào)控有待深入機制研究。此外，EC癌組織中CDK2、CDKN1A的表達與腫瘤臨床分期、肌層浸潤深度及是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示EC中CDK2、CDKN1A參與EC的腫瘤進展。有學者報道，肺癌中AKT信號通路的激活，能夠上調(diào)CDK2的表達，下調(diào)CDKN1A的表達，促進細胞周期G1/S期的轉(zhuǎn)換，導致腫瘤的惡性進展[21]。本研究還發(fā)現(xiàn)，EC癌組織中CDK2高表達、CDKN1A低表達患者生存預(yù)后較差。LncRNACARLo-5、CDK2、CDKN1A單獨檢測診斷EC的AUC為0.807、0.775及0.747，而3項聯(lián)合檢測的AUC達0.841，提高了診斷EC的預(yù)測價值。并且與單一指標相比，3項聯(lián)合檢測可提高預(yù)測的敏感度，但其特異度低于單一指標檢測，表明三者聯(lián)合檢測能夠?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌進行初步的鑒別和診斷，為確定診斷提供依據(jù)。本研究中EC患者癌組織中LncRNACARLo-5表達與CDK2的表達呈正相關(guān)，與CDKN1A的表達呈負相關(guān)，提示EC中CDK2及CDKN1A的表達可能受到LncRNACARLo-5的表達調(diào)控。LncRNACARLo-5對CDK2、CDKN1A的表達調(diào)控可能是通過復雜的非編碼RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)發(fā)揮作用的。有研究報道，LncRNACARLo-5作為一種長鏈非編碼RNA，能夠作為分子支架結(jié)合微小RNA[22]，如miR-200b等，進而促進腫瘤惡性進展。而受LncRNACARLo-5調(diào)控的微小RNA能夠轉(zhuǎn)錄后調(diào)控CDK2及CDKN1A的表達，進而促進腫瘤進展[23-24]。但LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A之間具體作用機制有待深入研究。

綜上所述，EC患者癌組織中LncRNACARLo-5、CDK2表達上調(diào)，而CDKN1A表達下調(diào)，LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表達與腫瘤臨床分期、肌層浸潤深度及是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，是 EC患者不良生存預(yù)后的腫瘤標志物，癌組織中LncRNACARLo-5表達與CDK2表達呈正相關(guān)，與CDKN1A表達呈負相關(guān)，LncRNACARLo-5可能通過影響CDK2及CDKN1A的表達促進EC的惡性進展，有可能成為新的腫瘤標志物。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

劉艷紅：設(shè)計研究方案，實施研究過程，數(shù)據(jù)整理，分析實驗數(shù)據(jù)，論文撰寫；李虎：提出研究思路，分析試驗數(shù)據(jù)，論文審核;楊翔、鄭瑋：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改，進行統(tǒng)計學分析