礎(chǔ)魯，烏仁套迪

（1.內(nèi)蒙古自治區(qū)阿拉善左旗農(nóng)牧業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊，內(nèi)蒙古 巴彥浩特 750300；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)阿拉善盟畜牧研究所，內(nèi)蒙古 巴彥浩特 750300）

雞傳染性法氏囊病 （Infectious bursal disease，IBD）是由雞傳染性法氏囊病病毒 （Infectious bursal disease virus，IBDV）所引起的中雛雞的一種急性、熱性、高度接觸性、殺傷淋巴細(xì)胞性的傳染病。近年來，本病被認(rèn)為是與雞新城疫、雞馬立克氏病相并列的危害養(yǎng)雞業(yè)的三大傳染病之一。本病于1957年在美國Delaware州Gumboro鎮(zhèn)的肉雞群中被首次發(fā)現(xiàn)[1]。我國于1978年由周蛟等發(fā)現(xiàn)并于1982年分離到病毒[2]。不同品種的雞均易感，但土種散養(yǎng)雞較少發(fā)生[3]。病雞和帶毒雞是本病的主要傳染源，它們可通過糞便持續(xù)排毒1～2周。感染途徑包括消化道、呼吸道和眼結(jié)膜等，但尚無垂直傳播的證據(jù)[4]。在某些感染條件下，免疫抑制被認(rèn)為是本病的重要后果[5]。IBDV的靶細(xì)胞是未成熟的B淋巴細(xì)胞或B前淋巴細(xì)胞，其在感染后很快發(fā)生變性和壞死。法氏囊是關(guān)乎B淋巴細(xì)胞成熟的重要器官,雞在感染IBDV后,淋巴濾泡內(nèi)的B淋巴細(xì)胞大量裂解死亡,網(wǎng)狀細(xì)胞呈凋亡過程,最終導(dǎo)致法氏囊等器官萎縮而引起免疫抑制[5-7]。以上結(jié)果可導(dǎo)致雞群對其它疾病的易感性增強，疫苗(如新城疫、禽流感疫苗)接種的免疫應(yīng)答能力下降[7]。法氏囊是禽類特有的淋巴器官，位于泄殖腔背側(cè)，并以短管與其相連。雞法氏囊的形狀為球形或橢圓形。性成熟前達(dá)到最大，以后逐漸萎縮退化直到完全消失。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗所用動物來自洛陽市近郊送檢的2～7周齡的疑似IBD病雞，臨床初步診斷為雞傳染性法氏囊病，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）確診為陽性。

1.2 器材

微量加樣器，聚苯乙烯塑料板，ELISA檢測儀，SD-2型推拉式三用切片機，202-AD電熱恒溫干燥箱，OLYMPUS光學(xué)生物顯微鏡。

1.3 試劑

碳酸鹽緩沖液，pH7.2的PBS-0.05%TWeen-20，pH7.4的0.1%白明膠，兔抗IBDV IgG，IBDV陽性對照血清，IBDV陰性對照血清，辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的IBDV抗體(酶結(jié)合物)，pH5.0的磷酸鹽－檸檬酸緩沖液Ⅱ，硫酸溶液，甲醛溶液分析純，無水乙醇分析純，二甲苯分析純，石蠟，蘇木精-伊紅試劑，蛋白甘油。

1.4 方法

1.4.1 臨床學(xué)檢查。檢查病雞精神狀態(tài)、外觀變化、飲食狀況、糞便狀況和發(fā)育狀況等。

1.4.2 病理解剖學(xué)檢查。剖檢病雞，對胸肌、腿肌、法氏囊、輸尿管、泄殖腔、腺胃和肌胃交界處、盲腸扁桃體、肝、脾、肺和腎臟等進行常規(guī)解剖學(xué)檢查。

1.4.3 實驗室診斷。取一塊96孔聚苯乙烯板,加入兔抗IBDV IgG(用pH9.5的碳酸鹽緩沖液1∶20稀釋)，用量為每孔0.1 mL(2滴),于4℃條件下靜置24 h。其后倒盡板中各孔液體,加滿洗滌液,放置3 min。再棄去洗滌液，用濾紙拍干,反復(fù)3次。于第一孔加入樣品稀釋液作為空白對照,于第二孔加入陽性對照液,于第三孔加入陰性對照液,于其它孔加入被檢樣品。若樣品為法氏囊乳劑，則稀釋100倍，若為細(xì)胞培養(yǎng)物，則稀釋5倍，每孔加入0.1 mL（2滴），于濕盒中在37℃下靜置1 h。洗板，每孔加0.1 mL（2滴）酶結(jié)合物，于37℃下靜置 45 min。再次洗板，每孔加入新配制的底物溶液(含3% H2O2)0.1 mL（2滴），于室溫條件下靜置20 min，然后每孔加入 2 mol硫酸 0.05 mL（1滴）。

實驗室結(jié)果判定：

目測法:陽性的孔呈黃褐色，陰性的孔呈無色或極黃色。

比色法:用酶光分光光度計測定各孔OD（光密度）值,將空白對照調(diào)為O點,計算P/N比值。計算方法為：

圖7 腺小管間結(jié)締組織出血（400倍）

P/N≤0.15 為陰性，0.15＜P/N＜0.2 為疑似，P/N≥0.2為陽性。

1.4.4 病理組織學(xué)檢查。取病雞法氏囊和腺胃，采用常規(guī)石蠟切片制作法制作切片，HE染色，普通光鏡下觀察，選取適當(dāng)?shù)湫筒∽円曇斑M行拍照。

2 結(jié)果

2.1 大體變化

法氏囊是IBD病毒的靶器官，其大體變化有三類：一是大部分法氏囊由于水腫，體積和重量有所增加。其外觀顏色蒼白、有光澤，黏膜皺褶消失。二是由于充血、出血嚴(yán)重，使法氏囊外觀呈現(xiàn)紅色山楂樣。三是萎縮，質(zhì)地較硬，有時黏膜出現(xiàn)黃白色干酪樣的壞死灶，周圍有一紅色炎癥反應(yīng)帶。偶見腺胃與肌胃交界處出血。

2.2 組織病理學(xué)變化

與正常（見圖1）的法氏囊相比，顏色蒼白、水腫的法氏囊的特征是：上皮細(xì)胞變性、壞死。淋巴濾泡結(jié)構(gòu)尚存，但大部分淋巴細(xì)胞已經(jīng)消失，形成特征性結(jié)構(gòu)，即濾泡中心為紅染嗜伊紅的玻璃樣物質(zhì)，周圍由增生的網(wǎng)狀細(xì)胞排列成柵欄狀的反應(yīng)帶。有時壞死部位為細(xì)胞碎片、網(wǎng)狀細(xì)胞、異嗜性白細(xì)胞及吞噬細(xì)胞所取代，濾泡間的間質(zhì)增寬（見圖2），有紅染的水腫液。出血的法氏囊，主要在被膜下、濾泡間見有大量紅細(xì)胞，濾泡中心發(fā)生壞死（見圖3和圖4）。萎縮的法氏囊，可見上皮增生，由單層變成多層，濾泡體積縮小，濾泡間結(jié)締組織增生。有時濾泡中心也發(fā)生壞死，出現(xiàn)大量異嗜性白細(xì)胞浸潤。

圖1 正常的法氏囊（40倍）

圖2 病變的法氏囊（40倍）

圖3 法氏囊淋巴濾泡出血

圖4 法氏囊淋巴濾泡出血（400倍）

腺胃黏膜出血，上皮壞死脫落，腺胃結(jié)締組織出血（見圖6）。腺小管間結(jié)締組織出血（見圖7)。

圖5 正常的腺胃組織（40倍）

圖6 腺胃結(jié)締組織出血（40倍）

3 討論

法氏囊是法氏囊病毒的靶器官，所以IBD對法氏囊的侵害最為嚴(yán)重，于感染后1 d即可觀察到法氏囊濾泡的皮質(zhì)和髓質(zhì)區(qū)出現(xiàn)淋巴細(xì)胞變性和壞死，淋巴細(xì)胞很快被異嗜細(xì)胞、細(xì)胞碎片及增生的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞所代替。感染3～4 d后所有的淋巴濾泡均受影響[8]。由于水腫、充血及異嗜細(xì)胞和漿細(xì)胞的聚集，法氏囊重量增加，淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少，淋巴濾泡的皮質(zhì)部變薄，幾乎被網(wǎng)狀細(xì)胞和結(jié)締組織所代替。濾泡髓質(zhì)出現(xiàn)囊狀空洞，同時濾泡間的結(jié)締組織中有纖維組織形成。出現(xiàn)大小不等的囊泡，囊泡腔內(nèi)有團塊狀玻璃樣物，法氏囊上皮細(xì)胞開始增殖并表現(xiàn)為腺樣構(gòu)造。法氏囊組織結(jié)構(gòu)的重大變化，使法氏囊的免疫功能大大降低，從而使禽類所特有的免疫器官的作用優(yōu)勢減弱。對于正處于生長階段的雛雞來說，其體內(nèi)各器官尚沒有發(fā)育成熟，對外界病菌的抵抗能力均較弱，若此時法氏囊器官被破壞，則免疫器官的功能就難以發(fā)揮。

本文著重闡述了法氏囊和腺胃的組織結(jié)構(gòu)變化。此病對其他器官，如胸腺、脾、肌肉、腎臟、肝、肺和胃腸道等的組織結(jié)構(gòu)也可產(chǎn)生明顯影響，但對免疫器官的影響最為嚴(yán)重。