商麗紅，楊玉娥，王 芳，哈春芳

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué)，銀川 750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，銀川 750004;3.寧夏醫(yī)科大學(xué)生育力保持重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 750004)

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)是指子宮內(nèi)膜組織(腺體或間質(zhì))出現(xiàn)在子宮腔以外的部位所引起的激素依賴性疾病，在育齡期婦女中的患病率約為10%[1]。研究發(fā)現(xiàn),患有EMs的婦女患不孕癥、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、黑色素瘤、哮喘及自身免疫性和心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)更高[2]。目前EMs的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。已有研究發(fā)現(xiàn)，EMs中MEK/ERK信號(hào)通路在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡和遷移中起重要作用，MEK/ERK的過(guò)度激活促進(jìn)了EMs內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖和遷移，抑制細(xì)胞凋亡[3]。蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)是一類典型的絲氨酸/蘇氨酸激酶。既往研究證實(shí)，PKC參與糖尿病腎病等多種疾病的發(fā)生，并能激活MEK/ERK信號(hào)通路[4-5]。PKCβ1是蛋白激酶家族的成員之一，研究發(fā)現(xiàn)PKCβ1有助于RAS/MEK/ERK信號(hào)通路的完全激活[6]。PKCβ1有助于ERK1/2的激活[7]。ERK1/2被認(rèn)為MEK/ERK信號(hào)通路的焦點(diǎn)，而ERK1/2是MEK1/2已知的唯一底物[8]。然而在EMs中PKCβ1是否作用于MEK1/2，進(jìn)而影響間質(zhì)細(xì)胞的增殖侵襲性尚不清楚。本研究通過(guò)沉默PKCβ1，探討其對(duì)MEK1/2的表達(dá)及對(duì)EMs間質(zhì)細(xì)胞增殖侵襲性的影響，從機(jī)制上探討EMs發(fā)生的原因。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 標(biāo)本來(lái)源于2019年6月至2020年12月在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院行“腹腔鏡下卵巢囊腫剝除術(shù)”，于術(shù)中獲取在位及異位子宮內(nèi)膜組織，術(shù)后經(jīng)病理科診斷為“卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫”的EMs患者30例?；颊吣挲g25～35歲，月經(jīng)規(guī)律，近3個(gè)月未接受激素類藥物治療，無(wú)生殖道炎癥及其他婦科疾病等。同期因良性卵巢腫瘤行手術(shù)治療的患者30例作為對(duì)照組。另取10例EMs患者獲取在位子宮內(nèi)膜組織。該研究通過(guò)寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并簽署知情同意書。

1.2 主要試劑 PKCβ1抗體，MEK1/2抗體，lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試，DAB顯色試劑盒，蛋白提取試劑盒，蛋白定量試劑盒。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 免疫組化 組織標(biāo)本由病理科證實(shí)為EMs后，于10%甲醛溶液中浸泡過(guò)夜，4%甲醛固定，脫水、石蠟包埋，3～4μm厚度連續(xù)切片，65℃烘片1～2h，經(jīng)脫蠟、抗原修復(fù)、一抗孵育(PKCβ1，MEK1/2，4℃過(guò)夜)、37℃復(fù)溫1h、二抗37℃孵育1h、DAB顯色、梯度酒精脫水、二甲苯透明等后用中性樹膠封片，PBS作為陰性對(duì)照，應(yīng)用Image pro plus進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

1.3.2 原代細(xì)胞培養(yǎng) 術(shù)中獲取新鮮在位子宮內(nèi)膜組織放于培養(yǎng)液，30min內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞間，用PBS(磷酸鹽緩沖液)清洗，眼科剪剪成約1mm3大小組織，加膠原酶Ⅳ消化吹打10min，靜置后取上清移入新離心管，1∶1比例加培養(yǎng)基終止消化，800r/min離心，吸取上清，種于60mm培養(yǎng)皿，37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。次日觀察間質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)情況并進(jìn)行細(xì)胞換液，待細(xì)胞長(zhǎng)到90%以上時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

1.3.3 間質(zhì)細(xì)胞鑒定 細(xì)胞融合達(dá)90%以上時(shí)，0.25% EDTA胰酶消化種于6孔板。次日待細(xì)胞融合50%～60%時(shí)，PBS清洗6孔板，4%多聚甲醛固定30min，PBS清洗3次，每次5min，加過(guò)氧化物酶阻斷劑，室溫30min；PBS清洗3次，每次5min；加山羊血清工作液，室溫30min；一抗孵育(波形蛋白抗體1∶500，角蛋白1∶50，陰性對(duì)照用PBS)，室溫2h；一抗回收，PBS清洗3次，每次5min；二抗孵育室溫1h；PBS清洗3次，每次5min；DAB顯色約5min；自來(lái)水沖洗，蘇木素染色20s；自來(lái)水清洗，95%乙醇脫水1～2s，顯微鏡下觀察。

1.3.4 siRNA 轉(zhuǎn)染細(xì)胞 生長(zhǎng)良好的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前24h使用無(wú)血清無(wú)雙抗培養(yǎng)基重懸細(xì)胞接種于60mm培養(yǎng)皿，置于37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱，次日進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染。將8μL轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000加500μL Opti-MEM無(wú)血清培養(yǎng)基，輕輕吹吸3～5次，混勻，將8μL siRNA加至500μL Opti-MEM無(wú)血清培養(yǎng)基，輕輕吹吸3～5次，混勻，室溫放置5min?；旌限D(zhuǎn)染試劑和siRNA稀釋液，輕輕吹吸3～5次混勻，室溫放置20min，將轉(zhuǎn)染混合物加至含2mL無(wú)血清無(wú)雙抗培養(yǎng)液培養(yǎng)皿，轉(zhuǎn)染4～6h后可更換新鮮培養(yǎng)基(帶血清培養(yǎng)基)。

1.3.5 Western blot siRNA轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞72h左右時(shí)，用預(yù)冷PBS沖洗細(xì)胞3次，按凱基蛋白提取試劑盒說(shuō)明進(jìn)行蛋白提取，用BCA蛋白檢測(cè)試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，置于沸水中10min使蛋白變性。用10%SDS-PAGE分離蛋白，轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂牛奶室溫封閉2h，一抗孵育4℃過(guò)夜，次日回收一抗，TBST沖洗3遍,每次10min，二抗室溫下?lián)u床1h，TBST沖洗3遍，每次10min，最后將PVDF膜置于BIO-RAD成像儀，加ECL工作液反應(yīng)1min(A液∶B液=1∶1)，最后根據(jù)曝光結(jié)果，運(yùn)用Image J計(jì)算光密度比值。

1.3.6 CCK-8實(shí)驗(yàn) siRNA轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，重新消化，加無(wú)雙抗培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按5×104細(xì)胞/mL接種于96孔板，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，周圍均用PBS填充。配置10% WST-8溶液，于24、48、72h，以細(xì)胞換液方式每孔加100μL配置好的10% WST-8溶液，每組多加一組空白對(duì)照，37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱孵育1h，檢測(cè)450nm波長(zhǎng)處各孔OD值，用實(shí)驗(yàn)組OD值減去空白孔OD值計(jì)算各組A值，繪制細(xì)胞增殖曲線。

1.3.7 Transwell實(shí)驗(yàn) 將基質(zhì)膠和200μL槍頭提前一天放入4℃冰箱預(yù)冷，將基質(zhì)膠用無(wú)血清培養(yǎng)基按1∶8比例稀釋，在Transwell小室上室中加80μL稀釋好的基質(zhì)膠，在37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱放置6h。將轉(zhuǎn)染siRNA的細(xì)胞重新消化，加無(wú)血清無(wú)雙抗培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)2.5×104細(xì)胞/mL，上室中加200μL(5000細(xì)胞/孔)，下室中加含20%血清的培養(yǎng)基500μL，置37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱。48h后取出小室，棄小室培養(yǎng)基，用PBS沖洗5遍，室溫下4%多聚甲醛固定30min，用PBS沖洗5遍，0.2%結(jié)晶紫染色1h，PBS沖洗5遍，棄多余水分，在顯微鏡下觀察拍照，每個(gè)小室選5個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算平均值，比較各組的侵襲細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 PKCβ1、MEK1/2蛋白在各組內(nèi)膜組織中的表達(dá) EMs在位內(nèi)膜組、異位內(nèi)膜組中PKCβ1、MEK1/2表達(dá)均高于正常子宮內(nèi)膜組，且在異位內(nèi)膜組中的表達(dá)高于在位內(nèi)膜組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FPKCβ1=224.90，F(xiàn)MEK1/2=450.15，P<0.05)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PKCβ1、MEK1/2在EMs在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜中的表達(dá)呈正相關(guān)(rEMs在位內(nèi)膜=0.88，P=0.00，rEMs異位內(nèi)膜=0.91，P<0.05)。見(jiàn)圖1～2及表1。

圖1 PKCβ1、MEK1/2在3組內(nèi)膜組織中的表達(dá)

圖2 PKCβ1、MEK1/2的相關(guān)性分析

表1 PKCβ1，MEK1/2在各組內(nèi)膜組織中的表達(dá)

2.2 EMs在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞分離與鑒定 通過(guò)差速離心法分離培養(yǎng)原代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞免疫化學(xué)法進(jìn)行細(xì)胞鑒定，其中波形蛋白染色陽(yáng)性，角細(xì)胞染色陰性為子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。顯微鏡下可觀察到在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，核圓居中，波形蛋白組間質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染成棕黃色，而角蛋白組細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均未見(jiàn)染色與PBS組染色一致，即我們所取細(xì)胞為子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，見(jiàn)圖3。

圖3 EMs在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞鑒定(×100)

2.3 PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后PKCβ1、MEK1/2蛋白表達(dá)情況 Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后PKCβ1、MEK1/2蛋白表達(dá)均降低(FPKCβ1=85.54，P=0.00;FMEK1/2=86.83，P=0.00)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2及圖4。

表2 PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后PKCβ1、MEK1/2蛋白表達(dá)

圖4 PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后PKCβ1、MEK1/2蛋白表達(dá)

2.4 PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖性變化 CCK8檢測(cè)結(jié)果顯示，PKCβ1 siRNA組較si-NC組、空白組間質(zhì)細(xì)胞增殖性明顯下降(F24h=6.44，F(xiàn)48h=21.51，F(xiàn)72h=13.26，P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖5。2.5 PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞侵襲性變化 Transwell檢測(cè)在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后間質(zhì)細(xì)胞侵襲性變化，PKCβ1 siRNA組較si-NC組、空白組侵襲細(xì)胞數(shù)明顯下降(37.0±5.35，83.6±2.28，83.4±2.25，F(xiàn)=165.09，P=0.00)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖6。

圖5 PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖性變化

圖6 PKCβ1 siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞侵襲性變化(×200)

3 討 論

3.1 PKCβ1與EMs EMs是一種慢性婦科疾病，是受多種基因、表觀遺傳和環(huán)境因素影響的可遺傳疾病,確切原因尚不清楚。EMs中激素、免疫和炎癥狀態(tài)的異常，細(xì)胞凋亡、黏附、血管生成、增殖、免疫和炎癥過(guò)程，缺氧反應(yīng)，類固醇生成途徑和激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等參與了EMs的發(fā)病機(jī)制。EMs的病因非常復(fù)雜，目前還未完全闡明[9]。癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力在腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)中起著重要作用，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移可有效減少癌癥的發(fā)展和復(fù)發(fā)。EMs在形態(tài)上呈良性表現(xiàn)，但在臨床行為學(xué)上類似惡性腫瘤，具有種植、侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力，因此抑制異位細(xì)胞的增殖和侵襲可能有助于內(nèi)異癥的治療。蛋白激酶C(PKC)是一種重要的絲氨酸/蘇氨酸激酶，由多種亞型組成，PKC作為重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)酶，將細(xì)胞表面配體-受體相互作用產(chǎn)生的信號(hào)傳遞到細(xì)胞核。在對(duì)卵巢癌的研究中發(fā)現(xiàn)，透明細(xì)胞卵巢癌子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中PKC表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，卵巢癌細(xì)胞依賴于PKC的過(guò)表達(dá)來(lái)維持細(xì)胞活力[10]。PKC亞型參與許多生物學(xué)過(guò)程的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，如增殖、存活、血管生成、轉(zhuǎn)移和腫瘤發(fā)生。PKCβ1是PKC的一種，參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展。Shu等研究發(fā)現(xiàn),PKCβ1的缺失可防止非酒精性脂肪變性的發(fā)生;蛋白激酶Cβ1的下調(diào)可使小鼠從頭脂肪生成和甘油三酯合成減少;肝臟蛋白激酶Cβ1的表達(dá)增加導(dǎo)致脂肪合成增加，從而導(dǎo)致肝臟甘油三酯的過(guò)度積聚[11]。Hu等[12]研究結(jié)果表明,PKCβ1通過(guò)促進(jìn)翻譯增加而促進(jìn)腫瘤向骨的轉(zhuǎn)移，在異種移植模型中，PKCβ1的激活導(dǎo)致骨肉瘤細(xì)胞翻譯的整體上調(diào)，從而增強(qiáng)體內(nèi)的轉(zhuǎn)移。用PKC抑制劑可減弱整體翻譯上調(diào)，并降低這些細(xì)胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)移的可能性。Marquina-Sánchez等[13]在對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的研究中也發(fā)現(xiàn),激活PKCβ1可增加人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，表明PKCβ1的異常表達(dá)與細(xì)胞的增殖和侵襲性相關(guān)。在對(duì)EMs在位和異位子宮內(nèi)膜差異基因表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn),PKCβ1在EMs中的表達(dá)明顯增高，且在異位內(nèi)膜中的表達(dá)高于在位內(nèi)膜[14-15]。

3.2 MEK1/2與EMs MEK1/2是一種雙特異性蛋白激酶，屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族，能催化ERK1/2的選擇性蘇氨酸和酪氨酸殘基的磷酸化。MEK1/2具有高度狹窄的底物特異性，ERK1/2是其唯一已知的下游靶點(diǎn)[16]，是細(xì)胞增殖和存活所必需的轉(zhuǎn)錄因子。ERK1/2激酶在正常和致癌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中都在介導(dǎo)MEK1/2激活的下游效應(yīng)中起著關(guān)鍵作用[17]。已有研究發(fā)現(xiàn),MEK-ERK通路是胃癌細(xì)胞生物活性的關(guān)鍵信號(hào)，抑制MEK/ERK通路，抑制了胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，相反，MEK/ERK過(guò)表達(dá)促進(jìn)了胃癌的進(jìn)展。體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)也表明,MEK/ERK軸參與了胃癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[18]。在對(duì)胰腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，MEK/ERK信號(hào)通路被激活，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和G0/G1期阻滯。抑制MEK/ERK信號(hào)通路則抑制了細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[19]。在對(duì)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的研究中發(fā)現(xiàn),MEK/ERK信號(hào)通路發(fā)揮重要作用，MEK/ERK的級(jí)聯(lián)激活促進(jìn)黑色素瘤的增殖、存活、侵襲和血管生成。抑制MEK1/2可減少突變的人黑色素瘤細(xì)胞在體外的增殖和侵襲，同時(shí)減少體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)[20]。在非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)中發(fā)現(xiàn)了MEK/ERK信號(hào)通路的異常激活，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。MEK抑制劑已用于非小細(xì)胞肺癌患者的治療。MEK抑制劑與化療、免疫檢查點(diǎn)抑制劑、表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)提高臨床療效、延緩耐藥發(fā)生具有重要意義[21]。Zhou等采用多重免疫分析法對(duì)EMs腹腔液的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，MEK1/2、ERK1/2等信號(hào)因子在EMs中表達(dá)增高，通路分析顯示MEK1/2、ERK1/2與血管生成、細(xì)胞增殖、遷移和炎癥相關(guān)[22]。Liu等[23]也發(fā)現(xiàn)，在EMs中MEK/ERK信號(hào)通路異常表達(dá)，MEK/ERK信號(hào)通路的激活促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的增強(qiáng)。用MEK抑制劑U0126處理后，子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲作用減弱。

3.3 PKCβ1、MEK1/2與EMs 課題組前期通過(guò)表達(dá)譜芯片檢測(cè)EMs在位、異位內(nèi)膜基因表達(dá)差異發(fā)現(xiàn),PKCβ1、MEK1/2、NF-KB等因子顯著上調(diào)，但其相互之間的具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。本研究結(jié)果表明,PKCβ1、MEK1/2在EMs在位和異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜組織，且在異位和在位內(nèi)膜組織中兩者呈正相關(guān)，表明兩者之間可能存在相互作用。研究發(fā)現(xiàn),PKCβ1可通過(guò)負(fù)調(diào)控下游MEK1/2和ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在膽結(jié)石的形成中發(fā)揮重要作用，PKCβ1通過(guò)調(diào)節(jié)肝臟MEK1/2的活性來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞膽固醇的生物合成、吸收和降解，是正確處理高膳食脂肪和膽固醇的適應(yīng)性反應(yīng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[24]。同樣，Noh等在對(duì)乳腺癌的研究中也發(fā)現(xiàn),PKC可抑制MEK1/2信號(hào)的激活?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloprotein -9,MMP-9)是促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞侵襲的主要成分，PKC可抑制MMP-9的表達(dá)，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲[25]。Tokuda等[26]研究發(fā)現(xiàn)，PKCβ1是MEK1/2的上游調(diào)節(jié)因子，刺激成骨細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的合成。當(dāng)PKCβ1被激活時(shí)，PKCβ1從胞漿轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜，激活MEK1/2進(jìn)而刺激血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的合成。在對(duì)帕金森病的研究中也發(fā)現(xiàn)，PKC和MEK異常表達(dá)增加了帕金森病運(yùn)動(dòng)障礙的易感性，而減弱PKC和MEK的表達(dá)則可改善帕金森病的行為功能障礙[27]。在對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn),抑制蛋白激酶C可抑制MEK1/2的表達(dá)，抑制PKC/MEK/ERK通路，進(jìn)而抑制小鼠黑色素瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。此外MEK1/2抑制劑U0126可抑制腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移，以及基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)[28]。因此推測(cè)在EMs中PKCβ1也可能通過(guò)調(diào)節(jié)MEK1/2的表達(dá)，影響間質(zhì)細(xì)胞的增殖和侵襲性。本研究結(jié)果顯示，通過(guò)轉(zhuǎn)染siRNA沉默間質(zhì)細(xì)胞PKCβ1表達(dá)后，MEK1/2表達(dá)明顯降低，間質(zhì)細(xì)胞的增殖和侵襲性明顯降低。表明PKCβ1可能是調(diào)節(jié)MEK1/2表達(dá)的上游信號(hào)因子，通過(guò)影響異位細(xì)胞的增殖和侵襲活性影響EMs的發(fā)生與發(fā)展。

綜上所述，PKCβ1在EMs的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，該作用可能是通過(guò)調(diào)節(jié)MEK1/2表達(dá)引起的，但具體調(diào)節(jié)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。EMs是一種多病因引起的具有惡性腫瘤行為的良性疾病，對(duì)其發(fā)病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。