◎ 余佳敏，周 瑄，楊煥煥，吳麗麗，張余俊

（1.武漢尚碼生物科技有限公司，湖北 武漢 430000；2.湖北省阿克瑞德檢驗(yàn)檢測(cè)有限公司，湖北 武漢 430000；3.湖北中檢檢測(cè)有限公司，湖北 武漢 430000）

沙門(mén)菌廣泛分布在人與動(dòng)物的腸道中，屬革蘭陰性直桿菌，其菌型較為復(fù)雜，已成為人畜共患的病原菌，對(duì)豬沙門(mén)菌病、雞白痢、流產(chǎn)、副傷寒等疾病的發(fā)生與發(fā)展具有重要意義，受到臨床重點(diǎn)關(guān)注[1-2]。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示[3]，由沙門(mén)菌引起的食源性疾病占全部動(dòng)物源疾病的首位，隨著沙門(mén)菌感染的患病率不斷升高，由此造成的食物中毒事件不斷增多?；诖耍R床選擇快速有效且準(zhǔn)確的檢測(cè)方式，對(duì)沙門(mén)菌感染的預(yù)防和控制具有重要作用[4]。本文利用SE-μPADs法測(cè)定樣品中沙門(mén)菌情況，并對(duì)此展開(kāi)試驗(yàn)，以快速檢測(cè)動(dòng)物性食品中沙門(mén)菌的污染。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

樣品：收集庫(kù)爾勒市羊肉22份、牛肉30份、雞蛋20份作為觀察對(duì)象。

材料：營(yíng)養(yǎng)肉湯、四硫磺酸鈉煌綠增菌液、亞硫酸鉍培養(yǎng)基、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基、蛋白胨緩沖液、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、無(wú)水乙醇、SE-μPADs試紙和沙門(mén)菌菌株等。

儀器：恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、電子天平、電泳儀、多功能振蕩器和水平電泳槽。

1.2 方法

樣本處理：分別稱取5 g羊肉、牛肉、雞蛋，切碎（或打散）后放入營(yíng)養(yǎng)肉湯內(nèi)，均勻搖晃3 min，添加蛋白胨緩沖液，密封后置于37 ℃培養(yǎng)箱，時(shí)間15 h。

沙門(mén)菌檢測(cè)：在處理后的樣本內(nèi)添加亞硒酸鹽胱氨酸及四硫磺酸鈉煌綠增菌液，放入培養(yǎng)箱中，18 h后接種于瓊脂培養(yǎng)基上。利用水煮法提取沙門(mén)菌培養(yǎng)基上的疑似菌株的菌落DNA，并實(shí)施PCR檢測(cè)，其中invA-F引物序列為GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA，invA-R引物序列為T(mén)CATCGCACCGTCAAAGGAACC，16S-F為AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，16S-R為GGTTACCTTGTTACGACTT。invA基因PCR參數(shù)94 ℃、5 min，95 ℃、30 s，55 ℃、30 s，70 ℃、30 s，70 ℃、10 min，重復(fù)30次。陽(yáng)性對(duì)照模板設(shè)置成沙門(mén)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的DNA。

選擇樣本（1 mL）放入離心管內(nèi)，37 ℃條件下以180～200 r·min-1速度培養(yǎng)，5 h后將其置于SE-μPADs點(diǎn)樣區(qū)，再將其置于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)90 min。各組選擇不添加菌液的蛋白胨緩沖液。在沙門(mén)菌底物區(qū)域加入固藍(lán)B鹽，顯色后檢查SE-μPADs顯色結(jié)果，試紙雙側(cè)顯色結(jié)果與陽(yáng)性均為紫色即為陽(yáng)性；而顯色區(qū)域與對(duì)照組均為粉色即為陰性。隨后對(duì)SE-μPADs區(qū)域進(jìn)行掃描，利用專(zhuān)用軟件測(cè)定試紙的灰度。顯色區(qū)域的灰度超出對(duì)照組即為檢出沙門(mén)菌；若灰度值低于對(duì)照組則未檢出。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)羊肉、牛肉以及雞蛋的SE-μPADs檢測(cè)結(jié)果，并對(duì)比SE-μPADs與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方式的靈敏度與特異度，設(shè)定真陽(yáng)性為a，假陰性為b，真陰性為c，假陽(yáng)性為d，靈敏度=a/（a+b）×100%，特異度=c/（c+d）×100%[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

選取SPSS19.0系統(tǒng)計(jì)算數(shù)據(jù)，其中x—±s表達(dá)計(jì)量數(shù)據(jù)，選擇t檢查，而百分比表達(dá)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)，選擇χ2檢查，兩組數(shù)據(jù)存在差異后選用P＜0.05表達(dá)。

2 結(jié)果與分析

2.1 SE-μPADs的檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)SE-μPADs檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)羊肉陽(yáng)性率為13.64%，牛肉陽(yáng)性率為13.33%，雞蛋陽(yáng)性率為10.00%，見(jiàn)表1。

表1 SE-μPADs的檢測(cè)結(jié)果表

2.2 SE-μPADs的靈敏度與特異度

SE-μPADs的靈敏度為80.00%（4/5），特異度為100.00%（67/67）；國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方式的靈敏度為100.00%（4/4），特異度為98.53%（67/68），兩者相比無(wú)顯著差異（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 SE-μPADs的靈敏度與特異度表

3 結(jié)論與討論

臨床針對(duì)沙門(mén)菌感染多選擇常規(guī)培養(yǎng)方式，其雖然取得過(guò)一定的應(yīng)用價(jià)值，但檢驗(yàn)時(shí)間通常為5 d左右，檢驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，從而限制其在臨床的應(yīng)用，此外，復(fù)雜的生化反應(yīng)可提升常規(guī)培養(yǎng)的復(fù)雜程度，同時(shí)加重檢驗(yàn)部門(mén)的工作負(fù)擔(dān)與壓力，甚至延長(zhǎng)產(chǎn)品轉(zhuǎn)運(yùn)及儲(chǔ)存時(shí)間，顯著增加檢驗(yàn)費(fèi)用[6]。

近年來(lái)，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的完善發(fā)展，SE-μPADs檢測(cè)方式被提出，其在動(dòng)物性食品的檢測(cè)中效果顯著[7]。本次研究結(jié)果表明，SE-μPADs檢測(cè)的羊肉陽(yáng)性率為13.64%，牛肉陽(yáng)性率為13.33%，雞蛋陽(yáng)性率為10.00%；SE-μPADs靈敏度為80.00%，特異度為100.00%；與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方式相比無(wú)顯著差異（P＞0.05），證實(shí)SE-μPADs的靈敏度與特異度較高，可成為動(dòng)物源食物中檢出沙門(mén)菌的重要方式。

經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，沙門(mén)菌廣泛存在于環(huán)境中，尤其是庫(kù)爾勒市養(yǎng)殖場(chǎng)以及菜市場(chǎng)周邊土壤、水質(zhì)中較多見(jiàn)，極易使畜禽受到感染，而畜禽作為菜市場(chǎng)肉制品的主要來(lái)源，若未能夠積極控制其污染源，易導(dǎo)致污染傳播擴(kuò)散，因此，相關(guān)部門(mén)應(yīng)進(jìn)一步提高重視程度，加大對(duì)肉制品的監(jiān)管力度，以此避免或降低食物中毒的發(fā)生概率[8]。此外，SE-μPADs法通過(guò)試紙進(jìn)行檢查，可有效縮短檢驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)，試紙成本較低，存在費(fèi)用低廉的優(yōu)勢(shì)。且檢測(cè)期間無(wú)需利用熒光儀器，通過(guò)肉眼觀察試紙顏色，按照比色方式即可檢出食品中沙門(mén)菌[9]。由此看出，SE-μPADs法通過(guò)富集培養(yǎng)基，并抑制微生物生長(zhǎng)的方式，顯著提升了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，并縮短檢測(cè)時(shí)間，避免假陽(yáng)性出現(xiàn)，值得推廣。

綜上，SE-μPADs法測(cè)定動(dòng)物源食品中沙門(mén)菌的效果顯著，其靈敏度與特異度較高。