◎ 何春艷，關(guān)天竹，譚國(guó)慧，吳洪亮

（綠瘦健康產(chǎn)業(yè)集團(tuán)股份有限公司，廣東 廣州 510385）

黃酮類化合物是廣泛存在于自然植物中的植物次生代謝產(chǎn)物，其種類繁多，結(jié)構(gòu)類型多樣，國(guó)內(nèi)外大量的研究證實(shí)此類化合物具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)心血管和減肥等多種生物活性及藥理作用[1-3]。在降脂減肥方面，黃酮類化合物主要通過促進(jìn)脂肪β-氧化、抑制脂肪酶和脂肪酸合酶活性、促進(jìn)機(jī)體能量代謝、反饋抑制食欲等方面發(fā)揮作用[3]。天然植物原料荷葉、決明子、澤瀉、山楂和綠茶等均含有黃酮類化合物，也常用于減肥的保健食品中。本文研究所用的減肥袋泡茶由山楂提取物、決明子提取物、荷葉提取物、澤瀉提取物和綠茶提取物等組方，總黃酮為該產(chǎn)品的標(biāo)志性成分之一。筆者采用紫外分光光度法，以蘆丁為對(duì)照品，對(duì)其中總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行考察，旨在為同類型產(chǎn)品的研發(fā)及質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器

P9紫外分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）、5810r高速離心機(jī)（艾本德）、DFY500搖擺式高速粉碎機(jī)（溫嶺市大德藥機(jī)公司）、AUW220D分析天平（島津）、XT-1030T超聲波清洗機(jī)（廣東順德先泰超聲工程設(shè)備有限公司）和層析柱（外徑：20 mm，濾芯：G1）。

1.1.2 供試品及試劑

綠瘦碧迪牌秀爾茶（河南恒春堂藥業(yè)有限公司）；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；聚酰胺粉（國(guó)藥集團(tuán)滬試：100～200目）；乙醇、石油醚I、甲醇、三水合乙酸鈉、硝酸鋁和乙酸均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg置于50 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解并定容至50 mL，即得0.2 g·L-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，儲(chǔ)存于冰箱備用。分別精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.00 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL和2.50 mL置于25 mL比色管，先加入0.5 mL10%的硝酸鋁溶液，再加0.5 mL 0.2 mol·L-1乙酸-乙酸鈉溶液（pH=5.6），搖勻，用70%乙醇定容至刻度，搖勻靜置30 min顯色后，在波長(zhǎng)406 nm處測(cè)其吸光度值，用空白試劑作參比。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 樣品液的制備

取適量綠瘦碧迪牌秀爾茶內(nèi)容物在粉碎機(jī)中粉碎，混勻備用。稱取1.0 g均勻樣品，加25 mL 75%乙醇，搖勻后超聲提取30 min，定容25 mL，4 000 r·min-1離心5 min備用。稱取聚酰胺粉2 g于蒸發(fā)容器中，吸取4 mL上清液吸附于粉上，于70 ℃揮發(fā)去除乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱洗脫。先用約20 mL石油醚I洗去雜質(zhì)，吹盡醚液，棄去，然后用無水甲醇洗脫黃酮，定容至50 mL作為待測(cè)樣品液。

1.2.3 樣品的測(cè)定

取1.2.2的樣品液10 mL于25 mL比色管中，加入70%乙醇定容至刻度，搖勻作為樣品空白。另取樣品液10 mL到25 mL比色管，先加入0.5 mL10%的硝酸鋁溶液，再加0.5 mL0.2 mol·L-1乙酸-乙酸鈉溶液（pH=5.6），搖勻，用70%乙醇定容至刻度，搖勻靜置。30 min后，參比樣品空白，在波長(zhǎng)406 nm處測(cè)其吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得出樣品液蘆丁含量，計(jì)算出樣品的總黃酮含量。

1.2.4 重復(fù)性

精密稱取袋泡茶內(nèi)容物1.0 g，共6份，按照1.2.2的方法制備樣品液，按照1.2.3的方法進(jìn)行6個(gè)樣品的測(cè)定，由同一操作人員、同一時(shí)間、同一儀器重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.2.5 中間精密度

在不同日期、不同人員、不同儀器的情況下重復(fù)測(cè)定6個(gè)樣品。與上述重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，計(jì)算結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.2.6 加標(biāo)回收率

以重復(fù)性試驗(yàn)總黃酮含量平均值作為樣品本底值，用低（80%）、中（100%）、高（120%）3種水平加標(biāo)量進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，共稱取9個(gè)樣品，于樣品中分別加入不同量蘆丁對(duì)照品，按照1.2.2的方法制備樣品液，按照1.2.3的方法進(jìn)行9個(gè)樣品的測(cè)定，計(jì)算樣品的加標(biāo)回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以蘆丁質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=1.024 9x-0.000 8，R2=0.999 9。表明蘆丁在0～0.5 mg檢測(cè)濃度范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)的吸光度呈良好的線性關(guān)系，見圖1。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2 重復(fù)性結(jié)果

由表1可知，測(cè)得6個(gè)樣品的平均含量為1.13 g/100 g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.27%，符合方法要求[4]。

表1 重復(fù)性結(jié)果表

2.3 中間精密度結(jié)果

由表2可知，不同日期、不同人員、不同儀器條件下分別平行測(cè)定6個(gè)樣品，測(cè)得的平均含量為1.15 g/100 g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.57%，符合方法要求[4]。

表2 中間精密度結(jié)果表

2.4 方法回收率

以重復(fù)性試驗(yàn)總黃酮含量平均值1.13 g/100 g作為計(jì)算本底值，用低（80%）、中（100%）、高（120%）3種水平加標(biāo)量（相當(dāng)于加入9.0 mg、11.3 mg、13.6 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品）進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，共稱取9個(gè)樣品，按試驗(yàn)方法操作，于樣品中分別加入不同量蘆丁對(duì)照品，按試驗(yàn)方法處理進(jìn)行比色測(cè)定。結(jié)果如表3所示，方法平均加標(biāo)回收率在97.43%，符合回收率在95%～105%的要求[5]。

表3 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

3 結(jié)論

植物中黃酮含量的測(cè)定主要有紫外分光光度法、HPLC法、毛細(xì)血管法等，本試驗(yàn)采取的紫外分光光度法具有儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便易掌握、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度和精密度較高等特點(diǎn)，應(yīng)用最為廣泛[6]。本文采用紫外分光光度法進(jìn)行減肥袋泡茶的總黃酮含量測(cè)定，方法的重復(fù)性、中間精密度、回收率均良好，可作為同類型產(chǎn)品中總黃酮類化合物的測(cè)定方法，為相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)和質(zhì)量控制提供了依據(jù)。