潘曉燕 范宜娟 楊瀅瑜 陳榮 湯芃芃

(上海寶山區(qū)仁和醫(yī)院 上海復(fù)旦大學(xué)附屬華山北院寶山分院病理科，上海 200431)

腦膠質(zhì)瘤在顱內(nèi)腫瘤中占比較高，高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤較多見(jiàn)，且惡性程度高，侵襲能力強(qiáng)，病情進(jìn)展快〔1〕。目前，腦膠質(zhì)瘤主要治療方式為手術(shù)聯(lián)合放化療，能有效緩解病情，但緩解時(shí)間較短，患者5年生存率不足5%〔2〕。因此，尋找腦膠質(zhì)瘤新的標(biāo)記物和新的治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)能通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散至遠(yuǎn)處，增加腫瘤的惡性行為，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移〔3〕。研究表明，EMT與腦膠質(zhì)瘤惡性程度相關(guān)，EMT標(biāo)記物上皮鈣黏蛋白(E-cad)、纖連蛋白(Fn)、波形蛋白(Vim)、神經(jīng)鈣黏蛋白(N-cad)能在一定程度上反映腫瘤惡性程度〔4〕。骨膜蛋白(POSTN)可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞活化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移〔5〕。有研究發(fā)現(xiàn)，POSTN能通過(guò)調(diào)控EMT過(guò)程，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程〔6〕。但是，目前關(guān)于POSTN、EMT與腦膠質(zhì)瘤惡性程度關(guān)聯(lián)的相關(guān)研究較少?；诖?，本研究分析老年腦膠質(zhì)瘤組織中骨膜蛋白及EMT標(biāo)記物的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集上海寶山區(qū)仁和醫(yī)院2017年1月至2020年4月完成神經(jīng)外科手術(shù)的105例老年腦膠質(zhì)瘤患者臨床資料，患者腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本、正常組織標(biāo)本均保存完整。患者中男58例，女47例；年齡63～81歲，平均年齡(72.54±5.53)歲；腫瘤直徑2.11～5.94 cm，平均直徑(3.88±0.54)cm；分級(jí)：Ⅰ級(jí)10例，Ⅱ級(jí)36例，Ⅲ級(jí)22例，Ⅳ級(jí)37例。

1.2入選標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國(guó)腦膠質(zhì)瘤分子診療指南》〔7〕中腦膠質(zhì)瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡>60歲；③在上海寶山區(qū)仁和醫(yī)院首次手術(shù)切除；④經(jīng)手術(shù)病理確診為腦膠質(zhì)瘤；⑤實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)庫(kù)中有可用的組織蠟塊。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②其他疾病史及治療史；③臨床資料不完整。

1.3免疫組織化學(xué)染色法 10%中性甲醛固定、石蠟包埋的組織標(biāo)本4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、脫水，抗原修復(fù)，阻斷內(nèi)源性 過(guò)氧化物酶，Envision二步法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水透明，封片。免疫組織化學(xué)染色評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野觀察，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。根據(jù)染色程度進(jìn)行惡性程度評(píng)分：無(wú)染色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)≤5%為0分，>5%且≤25%為1分，>25%且≤50%為2分，>50%且≤75%為3分，惡性程度>75%為4分。染色程度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比相乘的結(jié)果作為最終評(píng)定惡性程度標(biāo)準(zhǔn)：0分為陰性(-)，1～4分為弱陽(yáng)性(+)，5～8分為中等陽(yáng)性()，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0軟件進(jìn)行秩和檢驗(yàn)、Kendall′s tau-b相關(guān)性分析檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1腦膠質(zhì)瘤組織和正常組織中POSTN及EMT標(biāo)記物表達(dá) 腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN、Fn、Vim、N-cad表達(dá)高于正常組織，E-cad表達(dá)低于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 腦膠質(zhì)瘤組織和正常組織中POSTN及EMT標(biāo)記物表達(dá)〔n(%),n=105〕

2.2不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN及EMT標(biāo)記物表達(dá) 高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN、Fn、Vim、N-cad表達(dá)高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織，E-cad表達(dá)低于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN及EMT標(biāo)記物表達(dá)〔n(%)〕

2.3POSTN及EMT標(biāo)記物表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤惡性程度的相關(guān)性 腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN、Fn、Vim、N-cad表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤惡性程度呈正相關(guān)(r=0.545、0.671、0.624、0.630，P<0.05)；E-cad表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤惡性程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.649，P<0.05)。

2.4POSTN與EMT標(biāo)記物表達(dá)相關(guān)性 POSTN與Fn、Vim、N-cad表達(dá)正相關(guān)(r=0.173、0.481、0.168，P<0.05)；POSTN與E-cad表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.410，P<0.05)。

3 討 論

腦膠質(zhì)瘤侵襲性強(qiáng)、增殖快，目前仍無(wú)法通過(guò)手術(shù)清除，術(shù)后通常需聯(lián)合化療〔8〕。但是，腦膠質(zhì)瘤患者由于膠質(zhì)瘤、血腦屏障水腫，造成腦組織間隙靜水壓升高，對(duì)化療藥物的濃度造成影響，可能會(huì)影響化療效果，容易導(dǎo)致復(fù)發(fā)〔9〕。

在腫瘤侵襲過(guò)程中，EMT現(xiàn)象具有重要的作用〔10〕。POSTN是一種糖蛋白，分子質(zhì)量相對(duì)較高，具有多功能性，參與細(xì)胞外基質(zhì)的組成〔11〕。研究表明，POSTN高表達(dá)和腫瘤轉(zhuǎn)移具有密切的聯(lián)系，會(huì)增加預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)〔12〕。本研究結(jié)果說(shuō)明，惡性程度越高的腦膠質(zhì)瘤組織POSTN表達(dá)越高，EMT越嚴(yán)重。由此推測(cè)，POSTN、EMT標(biāo)記物可能與老年腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。進(jìn)一步經(jīng)相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN、Fn、Vim、N-cad表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤惡性程度呈正相關(guān)；E-cad表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤惡性程度呈負(fù)相關(guān)。分析原因?yàn)椋篜OSTN能使腫瘤細(xì)胞中Wnt信號(hào)加強(qiáng)，從而調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，強(qiáng)化腫瘤細(xì)胞的生存能力，促進(jìn)腫瘤惡化〔13，14〕。作為一種基質(zhì)蛋白，POSTN也能影響細(xì)胞的黏附過(guò)程促進(jìn)腫瘤的侵襲與增殖，參與腫瘤血管、淋巴管的形成，促進(jìn)轉(zhuǎn)移〔15〕。EMT現(xiàn)象與腦膠質(zhì)瘤惡性程度的相關(guān)性已被證實(shí)，如李楠等〔16〕研究。本研究說(shuō)明，POSTN可能通過(guò)影響EMT，參與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展。分析原因?yàn)椋篜OSTN參與癌癥壞死進(jìn)程，對(duì)局灶性黏附激酶等生存信號(hào)及前侵襲信號(hào)具有調(diào)節(jié)作用，從而影響轉(zhuǎn)移癌癥細(xì)胞的活性，促進(jìn)EMT現(xiàn)象〔17〕。Ouanouki等〔18〕研究中使用花青素抑制POSTN后，F(xiàn)n、Vim表達(dá)降低。說(shuō)明，POSTN可能是調(diào)節(jié)EMT標(biāo)記物的關(guān)鍵信號(hào)中間蛋白，可見(jiàn)POSTN調(diào)控EMT過(guò)程影響膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)機(jī)制有一定的研究?jī)r(jià)值，可在未來(lái)進(jìn)一步進(jìn)行研究分析明確。

綜上所述，老年腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展與組織中POSTN表達(dá)、EMT標(biāo)記物有一定聯(lián)系，檢測(cè)POSTN及EMT標(biāo)記物或可指導(dǎo)老年腦膠質(zhì)瘤病情評(píng)估。