吳迪，沈兆坤，金昊

（盤錦遼油寶石花醫(yī)院心胸外科，遼寧 盤錦 124010）

食管癌是臨床常見的一種消化道惡性腫瘤，5年生存力較低[1]。研究[2]發(fā)現(xiàn)，miRNA能進(jìn)入線粒體控制其基因表達(dá)，與某些惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。miR-1269a是位于染色體4q13.2的一種miRNA，能夠?qū)mad7、HOXD10等基因或蛋白的表達(dá)及轉(zhuǎn)化生長因子-β12的正反饋環(huán)路進(jìn)行抑制，在惡性腫瘤的增殖及遷移中具有重要作用。SOX6是位于11號(hào)染色體短臂5.2～15.3區(qū)域的一種蛋白質(zhì)分子，參與細(xì)胞的分化及凋亡等過程。研究[3]發(fā)現(xiàn)，miR-1269a能夠?qū)OX6的表達(dá)進(jìn)行抑制，參與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程。目前關(guān)于miR-1269a與SOX6在食管癌方面的的研究報(bào)道較少，基于此，本研究分析miR-1269a、SOX6在食管癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系，以期為食管癌的臨床治療及預(yù)后的改善提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月至2020年6月本院收治的100例食管癌患者為研究對(duì)象，其中男80例，女20例；年齡32～73歲，平均年齡（54.18±4.66）歲；鱗狀細(xì)胞癌85例，腺癌15例；分化程度：高分化56例，中低分化44例；臨床分期：Ⅰ期42例，Ⅱ期27例，Ⅲ期16例，Ⅳ期15例；浸潤深度：T135例，T224例，T323例，T418例；伴有淋巴轉(zhuǎn)移43例。收集所有患者術(shù)后的食管癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本，患者均對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)過術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診為食管癌，年齡≥18歲；②術(shù)前均未進(jìn)行相關(guān)放化療或生物治療；③均自愿接受食管癌手術(shù)治療；④臨床資料完整，依從性較好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤、消化系統(tǒng)疾病；②臨床資料及隨訪資料不完整；③癌旁組織無炎癥表現(xiàn)。

1.2 miR-1269a、SOX6的qRT-PCR檢測 采用RNA提取trizol試劑盒提取食管癌組織及癌旁組織標(biāo)本中的總RNA，使用RNase-free水溶解提取的總RNA，控制樣本的吸光度（260/280）在1.8～2.0。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)cDNA進(jìn)行合成，再使用RNase-free水進(jìn)行稀釋，嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行操作。miR-1269a的正向、反向引物序列分別為：5′-GCTCGTGGCTTAGGAGATTG-3′，5′-CTG-GCAAAGCATGAGGAACT-3′；SOX6的正向、反向引物序列分別為：5′-GCTG-AGGAGCTTAGGAGGGAC-3′，5′-GTTCG-GTCCACCATGAGATGGGG-3′；以GAPDH作為內(nèi)參，其正向、反向引物序列分別為：5′-GTCAACGGATTTGGTCGTGATT-3′，5′-AGTCTTCTGGGTGGGCAGTGAT-3′。按照TOYOBO SYBR Green Realtime PCR Master Mix使用說明書進(jìn)行qRT-PCR檢測，采用2-△△Ct法計(jì)算miR-1269a、SOX6的表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，采用t檢驗(yàn)法分析miR-1269a、SOX6的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析miR-1269a與SOX6的相關(guān)性；以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-1269a、SOX6在食管癌組織中的表達(dá) miR-1269a在食管癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SOX6在食管癌組織中的表達(dá)水平明顯低于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 miR-1269a、SOX6在食管癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)（x±s）Table 1 The expression of miR-1269a and SOX6 in esophageal cancer tissues and adjacent normal tissues(x±s)

2.2 miR-1269a、SOX6的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 中低分化、Ⅲ與Ⅳ期、T3與T4浸潤深度食管癌組織中miR-1269a的表達(dá)水平明顯高于高分化、Ⅰ期與Ⅱ期、T1與T2浸潤深度（P＜0.05），中低分化、Ⅲ與Ⅳ期、T1與T1浸潤深度食管癌組織中SOX6的表達(dá)水平明顯高于高分化、Ⅰ期與Ⅱ期、T3與T4浸潤深度（P＜0.05）。見表2。miR-1269a與SOX6在食管癌組織中的表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0.775，P=0.000）。

表2 miR-1269a、SOX6的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系Table 2 The relationship between the expression of miR-1269a and SOX6 and clinicopathological parameters

3 討論

食管癌是發(fā)生在食管黏膜上皮的一種惡性腫瘤，其典型癥狀是進(jìn)行性的吞咽困難，表現(xiàn)為難咽干食，嚴(yán)重者流食也難以下咽。食管癌可以分為早期和中晚期，手術(shù)是首選治療方式。

近年來，研究[4]發(fā)現(xiàn)，miR-1269a在多種惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)，對(duì)治療效果產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，如miR-1269a參與結(jié)腸癌及膽管癌細(xì)胞的分化及侵襲等過程[5]。miR-1269a能夠?qū)RP6、MYCBP2等靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)，而發(fā)揮其生物學(xué)作用[6]。因此，可以推測miR-1269a在食管癌細(xì)胞癌細(xì)胞的分化、增殖及遷移過程中也存在一定作用。本研究結(jié)果顯示，miR-1269a在食管癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織，說明miR-1269a在食管癌的發(fā)展過程中發(fā)揮作用，分析其機(jī)制可能是miR-1269對(duì)靶基因的表達(dá)進(jìn)行上調(diào)，促進(jìn)癌細(xì)胞的分化及增殖，惡性腫瘤細(xì)胞增多。本研究結(jié)果顯示，miR-1269a在食管癌組織中的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度、臨床分期及浸潤深度存在一定關(guān)系。有研究[7-8]證實(shí)，對(duì)miR-1269a的表達(dá)進(jìn)行抑制，能夠抑制癌細(xì)胞的生長及分化，降低腫瘤組織的分化程度；miR-1269a還能上調(diào)轉(zhuǎn)化生長因子-β12的表達(dá)，通過PI3K信號(hào)通路對(duì)Akt進(jìn)行激活，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的浸潤及侵襲。

SOX6是一種具有多種生物學(xué)功能的轉(zhuǎn)化因子，能夠抑制癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、增殖分化等[9]，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有一定的作用。研究[10]顯示，腎癌、骨肉瘤等惡性腫瘤組織中呈低表達(dá)，能夠上調(diào)p53及p21等的表達(dá)，下調(diào)CyclinA級(jí)β-catenin等的表達(dá)，抑制惡性腫瘤的進(jìn)展。本研究中，SOX6在食管癌組織中的表達(dá)水平明顯低于癌旁正常組織，說明miR-1269a在食管癌的發(fā)展過程中發(fā)揮作用，分析原因?yàn)镾OX6是miR-1269a表達(dá)的靶基因，miR-1269a在食管癌組織中的表達(dá)水平增高導(dǎo)致SOX6的表達(dá)水平降低。本研究結(jié)果顯示，SOX6在食管癌組織中的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度、臨床分期及浸潤深度存在一定關(guān)系，分析其機(jī)制可能是SOX6能夠抑制Cyclin D1、SOCS3，從而抑制惡性腫瘤組織的分化程度，增加腫瘤的惡性程度；SOX6具有抑癌基因的生物學(xué)作用，對(duì)癌細(xì)胞的增殖分化進(jìn)行抑制，增加癌細(xì)胞的浸潤程度[11-12]。

綜上所述，miR-1269a在食管癌組織中的表達(dá)增強(qiáng)，SOX6的表達(dá)減弱，均與腫瘤的組織分化程度、臨床分期及浸潤深度存在一定關(guān)系。