陳婷婷 孫麗娟 馬婭萍 杜應(yīng)雄 葉峻杰

同胞關(guān)系分為同父同母的全同胞關(guān)系(full sibling，F(xiàn)S)和同父異母或同母異父的半同胞關(guān)系(half sibling,HS)。在同胞關(guān)系鑒定實(shí)際案件中，為了獲得可靠的鑒定結(jié)論，除了常染色體短串聯(lián)重復(fù)(short tandem repeat,STR)遺傳標(biāo)記的檢測(cè)外，還要增加其他遺傳標(biāo)記的檢測(cè)以獲得更多可靠的判定依據(jù)。本文在實(shí)際工作中受理一起同胞鑒定案例，由于當(dāng)事人敘述無(wú)法判別兩個(gè)被鑒定人是否為全或半同胞關(guān)系，根據(jù)案件的具體情況在進(jìn)行常染色體STR遺傳標(biāo)記檢測(cè)后，運(yùn)用狀態(tài)一致性評(píng)分法(identity by state,IBS)、ITO法和判別函數(shù)法多種判定方法，并聯(lián)合Y染色體STR遺傳標(biāo)記和線粒體DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)序列分析對(duì)案件中被鑒定人的關(guān)系進(jìn)行綜合分析判斷，獲得了可靠的結(jié)論。

材料與方法

1.材料：男子甲早年移居緬甸，現(xiàn)回國(guó)認(rèn)親，自述父母已故，國(guó)內(nèi)有一弟弟乙，甲委托本鑒定中心鑒定二者之間是否存在同胞關(guān)系。根據(jù)鑒定的需求，用特制的濾紙(flinders technology associates，F(xiàn)TA)卡采集甲和乙的血液樣本進(jìn)行檢驗(yàn)。

2.方法：常染色體STR基因座分型使用PromegaPowerPlex?21試劑盒(Promega公司，美國(guó))進(jìn)行STR復(fù)合擴(kuò)增，Y染色體STR基因座使用ABI Yfiler plus(ABI，美國(guó))進(jìn)行STR復(fù)合擴(kuò)增；線粒體DNA測(cè)序檢測(cè)用針對(duì)mtDNA高變I 區(qū)(hypervariable segment-I,HVS-I)特異引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后用BigDye?Terminator v3.1測(cè)序試劑盒(AB，美國(guó))進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)。用ABI3500型遺傳分析儀(ABI，美國(guó))對(duì)PCR復(fù)合擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳，在GeneMapper ID-X 1.5軟件上分析數(shù)據(jù)，得到基因分型結(jié)果。通過(guò)IBS法、ITO法和判別函數(shù)法進(jìn)行計(jì)算、分析。

結(jié)果

1.常染色體STR分型結(jié)果分析：

(1)IBS法。甲和乙血樣的D3S1358等19個(gè)常染色體STR基因分型結(jié)果見(jiàn)表1。按照《生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定實(shí)施規(guī)范》[1]，依據(jù)19個(gè)常染色體STR基因座的分型結(jié)果進(jìn)行全同胞關(guān)系鑒定時(shí)，通過(guò)計(jì)算兩名被鑒定人間的累計(jì)狀態(tài)一致性評(píng)分(IBS)，對(duì)被鑒定人之間是否存在生物學(xué)全同胞關(guān)系做出判斷。當(dāng)IBS≥22時(shí)，傾向于認(rèn)為被鑒定人之間具有全同胞關(guān)系； 13

表1 常染色體STR基因座分型結(jié)果及IBS值計(jì)算

(2)ITO法。為進(jìn)一步明確甲與乙之間的同胞關(guān)系，依據(jù)常染色體STR基因分型結(jié)果，參照文獻(xiàn)[2]中的ITO法計(jì)算甲與乙全同胞指數(shù)(full sibling index,FSI)、半同胞指數(shù)(half sibling index,HSI)和FSI：HIS的值(表2)。FSI值為0.1720,HSI值為21.7010,FSI：HSI的值為0.0079。FSI≥19與FSI<1分別作為全同胞和無(wú)關(guān)個(gè)體的判斷標(biāo)準(zhǔn)；以HSI≥19與HSI<1分別作為半同胞和無(wú)關(guān)個(gè)體的判斷標(biāo)準(zhǔn)；當(dāng)FSI與HSI介于l～19時(shí)暫作為“無(wú)法判斷”；以FSI：HSI≥l與FSI：HSI<1分別作為全同胞和半同胞的判斷標(biāo)準(zhǔn)。本案中，甲與乙HSI>19，F(xiàn)SI：HSI<1，甲與乙傾向于半同胞親緣關(guān)系。

表2 ITO法計(jì)算同胞關(guān)系指數(shù)結(jié)果

(3)判別函數(shù)法。參照文獻(xiàn)[3]中建立的全同胞-半同胞-無(wú)關(guān)個(gè)體判別函數(shù)法計(jì)算得甲與乙DFSi=27.9700，DHSi=29.6490，DRi=26.7830。全同胞-半同胞-無(wú)關(guān)個(gè)體判別法則為Di(S)=max[DFSi、DHSi、DRi]，即比較樣本的DFSi、DHSi、DRi，以最大D值所在的組為該樣本所屬組別。本案中，甲與乙最大D值為DHSI，支持甲與乙存在半同胞親緣關(guān)系。判別函數(shù)法判定結(jié)果和ITO法判定結(jié)果一致。

2. Y-STR分型結(jié)果分析：為支持甲與乙之間半同胞關(guān)系，對(duì)甲與乙進(jìn)行Y-STR基因分型。Y染色體STR基因座是人類(lèi)的遺傳標(biāo)記，Y染色體為男性所特有，呈父系遺傳，即同一父系家族成員，Y-STR基因座基因分型相同。本案檢測(cè)25個(gè)Y-STR基因座，基因分型結(jié)果見(jiàn)表3。甲與乙的18個(gè)Y-STR基因座的基因分型不相同，根據(jù)遺傳規(guī)律，排除甲和乙來(lái)源于同一生父。

表3 Y染色體STR基因座分型結(jié)果

3.mtDNA 測(cè)序結(jié)果分析：進(jìn)一步分析甲與乙之間的關(guān)系，對(duì)甲與乙mtDNA序列進(jìn)行分析。mtDNA呈母系遺傳，同一母系個(gè)體的mtDNA序列相同，因此mtDNA序列分析技術(shù)作為STR分型技術(shù)的補(bǔ)充手段[4]。mtDNA序列不相同，排除存在母系遺傳關(guān)系；mtDNA序列相同，則不排除存在母系遺傳關(guān)系。甲與乙mtDNA高變I 區(qū)測(cè)序結(jié)果見(jiàn)表4。甲與乙在mtDNA HVS-I序列5個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)上的基因型一致，根據(jù)遺傳學(xué)原理和遺傳規(guī)律，不排除甲與乙來(lái)自同一生母。綜合常染色體STR分型結(jié)果以及Y-STR分型結(jié)果，支持甲與乙為同母異父的半同胞關(guān)系。

表4 mtDNA HVS-I測(cè)序結(jié)果

討論

同胞關(guān)系鑒定具有復(fù)雜性和特殊性[5]，由于同胞之間不一定有必須的等位基因，因而同胞關(guān)系鑒定比較困難[6]。在實(shí)際案例中，會(huì)遇到被鑒定人不能明確是全同胞或者是半同胞親緣關(guān)系，采用多種遺傳標(biāo)記進(jìn)行檢驗(yàn)，進(jìn)而運(yùn)用多種判定方法綜合分析得出結(jié)論就顯得非常重要[7]。

本案中，父母已故無(wú)法參與檢驗(yàn)，參與鑒定的人數(shù)較少，委托人無(wú)法明確哪種同胞鑒定，在確定二者的親緣關(guān)系時(shí)應(yīng)全面考慮全同胞、半同胞和無(wú)關(guān)個(gè)體3種可能的關(guān)系，所以常染色體STR分型結(jié)果運(yùn)用了3種不同計(jì)算分析方法進(jìn)行相互驗(yàn)證。《生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定實(shí)施規(guī)范》[1]適用于在雙親皆無(wú)情形下甄別生物學(xué)全同胞與無(wú)關(guān)個(gè)體關(guān)系，檢測(cè)19個(gè)STR基因座時(shí)，該檢測(cè)系統(tǒng)的效能約為0.7500，得出的傾向性鑒定意見(jiàn)的準(zhǔn)確性不低于99%。本案甲與乙采用IBS法計(jì)算累計(jì)IBS值介于全同胞和無(wú)關(guān)個(gè)體的閾值之間，無(wú)法給出傾向性意見(jiàn)。在實(shí)施鑒定時(shí)，若兩名被鑒定人間存在其他親緣關(guān)系(如半同胞、堂表親等)，本規(guī)范不適用。因此鑒定人應(yīng)詳細(xì)了解被鑒定人間是否存在其它可能的親緣關(guān)系，注意適用范圍及系統(tǒng)效能，需要使用其他方法和增加遺傳標(biāo)記加以甄別和相互驗(yàn)證[8]。

ITO法是計(jì)算兩個(gè)體有某種血緣關(guān)系的經(jīng)典方法，和判別函數(shù)法一樣可用于全同胞、半同胞、無(wú)關(guān)個(gè)體關(guān)系鑒定。研究表明，半同胞鑒定時(shí)，單獨(dú)使用ITO法或判別函數(shù)法錯(cuò)判風(fēng)險(xiǎn)較大[3]，且當(dāng)無(wú)法明確屬于哪種同胞鑒定，盲目錯(cuò)誤的選取計(jì)算公式可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論，因此需要運(yùn)用多種判定方法來(lái)相互驗(yàn)證結(jié)論。本案中，用ITO法與判別函數(shù)法計(jì)算得出的結(jié)果均傾向于甲與乙為半同胞親緣關(guān)系。相關(guān)文獻(xiàn)提示在全同胞-半同胞鑒定中，F(xiàn)SI：HIS值是一個(gè)有效的指標(biāo)，有助于提高鑒定結(jié)論的準(zhǔn)確性[5]。本案中，經(jīng)過(guò)計(jì)算 FSI：HSI<1，支持甲和乙為半同胞關(guān)系。目前半同胞關(guān)系鑒定沒(méi)有明確的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，為了獲得嚴(yán)謹(jǐn)可靠的鑒定意見(jiàn)，除進(jìn)行常染色體STR檢測(cè)外，還需其他遺傳標(biāo)記的支持[9-10]。

性染色體STR由于其特殊的遺傳規(guī)律在半同胞關(guān)系鑒定中可提供有效的認(rèn)定或排除信息。本案被鑒定人均為男性，因此選擇增加Y染色體STR遺傳標(biāo)記檢驗(yàn)，用來(lái)進(jìn)行父系親緣關(guān)系鑒定[11]。mtDNA呈母系遺傳[12]，是常染色體或性染色體遺傳標(biāo)記的重要補(bǔ)充，可用來(lái)進(jìn)行母系親緣關(guān)系鑒定，無(wú)論被鑒定人的性別如何，在同母異父半同胞鑒定中具有排除能力。本案中，Y染色體STR基因分型結(jié)果不相同，排除了甲和乙來(lái)源于同一生父的可能，同時(shí)線粒體DNA高變I區(qū)多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果相同提示甲與乙來(lái)自同一生母，支持甲與乙為同母異父半同胞關(guān)系，這與常染色體STR分型檢測(cè)結(jié)果相互驗(yàn)證和補(bǔ)充。因此，應(yīng)用三種遺傳標(biāo)記進(jìn)而通過(guò)多種判定方法綜合分析得出甲和乙傾向于同母異父半同胞關(guān)系。

同胞關(guān)系的鑒定結(jié)論有一定的風(fēng)險(xiǎn)和不確定性，盡可能多的檢驗(yàn)已知血緣關(guān)系的同胞，讓被鑒定人生母參與鑒定是提高鑒定有效性和可靠性的途徑[13]。當(dāng)鑒定實(shí)踐中遇到僅有兩個(gè)被鑒定人，且生母無(wú)法參與鑒定時(shí)，除檢測(cè)常染色體STR位點(diǎn)外，還需增加Y-STR、X-STR和mtDNA等遺傳標(biāo)記，提高鑒定的嚴(yán)謹(jǐn)性和鑒定意見(jiàn)的可靠性。正確利用多種遺傳標(biāo)記和判定方法對(duì)半同胞關(guān)系的鑒定有著重要的意義。