吳建波，陳穎虎，雷勇剛#

中國人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)海軍第二醫(yī)院1普通外科，2衛(wèi)勤處，海南 三亞 572000

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是最常見的惡性腫瘤之一，2010 年全球因CRC 死亡的患者715 000 例。CRC 是美國第二大常見的惡性腫瘤死亡原因。在中國，CRC 是第四大常見的惡性腫瘤死亡原因，也是第五大常見的惡性腫瘤。盡管近年來開發(fā)了新的治療和早期篩查方法，但CRC患者的預(yù)后并未得到明顯改善。此外，近年來中國CRC 的發(fā)病率迅速上升。因此，迫切需要具有臨床價(jià)值的新型生物標(biāo)志物以提高診斷準(zhǔn)確性。微小RNA（microRNA，miRNA）-200 家族在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用一直備受關(guān)注，其中尤以miRNA-200c 的作用較為廣泛。本文就miRNA-200c 在CRC 中作用機(jī)制的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 CRC

CRC 是世界上常見的胃腸道惡性腫瘤之一，包括結(jié)腸癌和直腸癌，早期無癥狀或癥狀不明顯，隨著腫瘤發(fā)展，癥狀逐漸出現(xiàn)，表現(xiàn)為大便習(xí)慣改變、腹痛、便血、腹部包塊、腸梗阻等，嚴(yán)重威脅患者生命健康。CRC 的發(fā)病原因包括遺傳和環(huán)境諸多因素。學(xué)者們正在從信號(hào)通路異常、癌基因和抑癌基因功能、表觀遺傳改變、腸癌干細(xì)胞、腸道菌叢、炎性腫瘤轉(zhuǎn)變機(jī)制、免疫等多個(gè)途徑探討CRC 的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，為CRC 的治療奠定了基礎(chǔ)。手術(shù)、化療和放療是目前CRC 的主要治療方法。盡管在診斷和治療方面取得了長足進(jìn)步，但CRC的病死率仍然很高。因此，找到合適的生物標(biāo)志物用于及時(shí)發(fā)現(xiàn)和治療CRC是非常有必要的。

一項(xiàng)Meta 分析納入了9 項(xiàng)研究共1882 例CRC患者的臨床數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)miRNA-200 高表達(dá)的患者具有較差的無復(fù)發(fā)生存（relapse free survival，RFS）情況（HR=1.13，95%CI：1.04～1.23）。此外，樣本類型的亞組分析顯示，血漿中miRNA-200 高表達(dá)與較差的總生存（overall survival，OS）情況（HR=1.23，95%CI：1.08～1.41）和RFS（HR=2.39，95%CI：1.20～4.77）情況有關(guān)。表明miRNA-200 家族可作為CRC 的生物標(biāo)志物評(píng)估患者預(yù)后。

2 miRNA-200c 的生物學(xué)作用

miRNA 已經(jīng)成為細(xì)胞在生理或病理壓力下進(jìn)行應(yīng)答的重要介質(zhì)。miRNA 介導(dǎo)的基本生物學(xué)過程，例如細(xì)胞增殖和凋亡與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。腫瘤普遍存在miRNA表達(dá)模式失調(diào)情況，可以為腫瘤分類和預(yù)后提供有用的信息。miRNA 及其靶標(biāo)在腫瘤標(biāo)本中的病理生理相關(guān)性難以解釋，因?yàn)樗鼈兊漠惓１磉_(dá)可能與腫瘤內(nèi)異質(zhì)性混淆，從而阻礙了在miRNA 靶標(biāo)水平與惡性腫瘤表型之間建立因果關(guān)系。

miRNA-200 家族主要由兩個(gè)子家族構(gòu)成，分別為miRNA-200a/200b/429 和miRNA-200c/141。其中miRNA-200a/200b/429 位于人類1 號(hào)染色體1p36.33，而miRNA-200c/141 位于人類12 號(hào)染色體12p13.310。miRNA-200 家族成員參與了生物體的多種病理生理過程。miRNA-200c 是miRNA-200家族的一個(gè)重要基因，對(duì)各種生物學(xué)過程都有影響。miRNA-200c 是一種腫瘤抑制因子，可抑制多種惡性腫瘤（如腎細(xì)胞癌、卵巢癌、膀胱癌和CRC）的增殖、上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）、遷移和侵襲，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和化療敏感性。

3 miRNA-200c 對(duì)CRC 的影響

3.1 miRNA-200c 通過作用于E 盒鋅指結(jié)合蛋白1影響EMT 并抑制CRC 發(fā)展

EMT 是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程，通過各種生化改變使上皮細(xì)胞獲得間充質(zhì)細(xì)胞表型，導(dǎo)致細(xì)胞極性損失和遷移能力增加。EMT 在胚胎發(fā)育、傷口愈合、組織再生和纖維化、惡性腫瘤進(jìn)展的所有階段以及抗細(xì)胞毒性治療等過程中均發(fā)揮重要作用。EMT 已在惡性腫瘤中進(jìn)行了深入研究，其中涉及獨(dú)特的分子過程，包括EMT 轉(zhuǎn)錄因子（EMT-transcription factor，EMT-TF）的誘導(dǎo)、細(xì)胞表面蛋白表達(dá)模式的變化、細(xì)胞骨架重組、細(xì)胞外基質(zhì)降解以及特異性miRNA 表達(dá)改變等。E盒鋅指結(jié)合蛋白（zinc finger E-box binding homeobox，ZEB）、鋅指轉(zhuǎn)錄因子SNAIL 和TWIST 家族的EMT-TF 具有最廣泛的研究，其具有多效性功能，包括細(xì)胞入侵和傳播，但也影響細(xì)胞命運(yùn)、腫瘤干細(xì)胞可塑性、致癌轉(zhuǎn)化、治療抗性、免疫力和腫瘤微環(huán)境。

有學(xué)者提出，miRNA-200 家族在惡性腫瘤EMT 的調(diào)節(jié)中具有核心作用，miRNA-200 家族最突出的基因靶標(biāo)是

ZEB1

和

ZEB2

，它們是EMT 標(biāo)志物E-鈣黏蛋白的直接阻遏物，參與EMT 過程和隨后的惡性腫瘤進(jìn)展。研究表明，腫瘤細(xì)胞中miRNA-200c 和ZEB1 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。據(jù)報(bào)道，miRNA-200c 和

ZEB1

基因間的分子作用機(jī)制包括雙重負(fù)反饋環(huán)。在這種機(jī)制中，miRNA-200c 通過直接與

ZEB1

的3'非翻譯區(qū)（3' untranslation region，3'UTR）結(jié)合而抑制ZEB1 的表達(dá)，然而，ZEB1 也通過與miRNA-200c 啟動(dòng)子結(jié)合來抑制miRNA-200c的轉(zhuǎn)錄。Karimi Dermani 等報(bào)道白藜蘆醇可以在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中通過靶向ZEB1 和波形蛋白而上調(diào)miRNA-200c 的表達(dá)并促進(jìn)EMT 向間充質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化（mesenchymal-epithelial transition，MET）轉(zhuǎn)換。該研究表明白藜蘆醇通過上調(diào)HCT-116 CRC 細(xì)胞中的miRNA-200c 抑制細(xì)胞增殖、侵襲及與EMT 相關(guān)的基因表達(dá)。Hur 等研究表明，與正常對(duì)照組相比，miRNA-200c 在CRC 患者的組織標(biāo)本中高表達(dá)，EMT相關(guān)基因的表達(dá)受CRC 細(xì)胞系中miRNA-200c 的負(fù)調(diào)控，miRNA-200c 基因靶標(biāo)的功能表征顯示，miRNA-200c 過表達(dá)可通過對(duì)其基因靶標(biāo)

ZEB1

負(fù)調(diào)控而上調(diào)E-鈣黏蛋白并下調(diào)波形蛋白的表達(dá)，從而促進(jìn)上皮細(xì)胞具有與CRC 細(xì)胞相同的可以進(jìn)行MET 過程的功能。該研究突出了miRNA-200c在CRC 細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵作用，并提出miRNA-200c 將可能作為CRC 患者的潛在診斷生物標(biāo)志物和治療靶標(biāo)。

3.2 miRNA-200c 通過抑制B 細(xì)胞特異性莫洛尼鼠白血病病毒插入位點(diǎn)1 的表達(dá)調(diào)節(jié)CRC 發(fā)展

B 細(xì)胞特異性莫洛尼鼠白血病病毒插入位點(diǎn)1（B lymphoma Mo-MLV insertion region 1，BMI1）是多梳抑制復(fù)合物1 的成員，在染色質(zhì)修飾、DNA 損傷修復(fù)、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和衰老中具有多種作用。此外，BMI1 參與了惡性腫瘤的發(fā)展。BMI1 異常表達(dá)已在幾種惡性腫瘤中報(bào)道，包括CRC、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和淋巴瘤。多項(xiàng)研究表明，BMI1 是miRNA-200c 在多種惡性腫瘤中的直接靶標(biāo)。Karimi Mazraehshah 等采用了生物信息學(xué)工具（如miRanda、PiTtar 和TargetScan）證明

BMI1

的3'UTR 與miRNA-200c 具有高度保守的結(jié)合位點(diǎn)。該研究分析了miRNA-200c在CRC 組織中的表達(dá)及其是否通過靶向BMI1 蛋白影響CRC 細(xì)胞系。結(jié)果表明，與正常結(jié)腸組織相比，miRNA-200c 在CRC 組織中顯著下調(diào)，而BMI1 蛋白在CRC 組織中表達(dá)上調(diào)。在結(jié)腸癌細(xì)胞系中，鎖核酸（locked nucleic acid，LNA）-antimiRNA-200c 的轉(zhuǎn)染促進(jìn)了

BMI1

基因和蛋白表達(dá)以及細(xì)胞侵襲。LNA 對(duì)miRNA-200c 的下調(diào)抑制了細(xì)胞凋亡。該研究結(jié)果表明，miRNA-200c 通過抑制BMI1 的表達(dá)而在CRC 中發(fā)揮抑癌作用。Xu等通過研究證明短鏈脂肪酸丁酸鈉通過增強(qiáng)miRNA-200c 的表達(dá)下調(diào)BMI1，從而抑制CRC 細(xì)胞遷移以及降低體內(nèi)腫瘤負(fù)荷。

3.3 miRNA-200c通過抑制驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員14的表達(dá)影響CRC 發(fā)展

已有研究報(bào)道許多類型的惡性腫瘤都存在驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員14（kinesin family member 14，KIF14）異常表達(dá)，KIF14 的致癌作用也多種多樣。KIF14 過表達(dá)可促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)展，包括成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、肺癌和卵巢癌。Wang 等研究顯示KIF14在CRC 中明顯過表達(dá)，體外和體內(nèi)研究結(jié)果表明，KIF14 通過激活蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）促進(jìn)CRC 細(xì)胞增殖并加速細(xì)胞周期。此外，該研究分析了KIF14 在CRC 中過表達(dá)的潛在機(jī)制。生物信息學(xué)分析和驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)包括逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)、蛋白質(zhì)印跡法和雙熒光素酶報(bào)告基因檢測，其結(jié)果證明除基因組擴(kuò)增和轉(zhuǎn)錄激活外，KIF14 還受miRNA-200c 調(diào)控。研究進(jìn)一步證明，miRNA-200c 表達(dá)降低可以促進(jìn)KIF14 發(fā)揮其細(xì)胞增殖作用。CRC 標(biāo)本中miRNA-200c 的表達(dá)與KIF14 呈負(fù)相關(guān)。此外，KIF14 過表達(dá)可誘導(dǎo)AKT 的Ser473 磷酸化，表明KIF14 可通過激活A(yù)KT 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)細(xì)胞存活，這對(duì)于細(xì)胞周期的進(jìn)展至關(guān)重要。由此說明，miRNA-200c 可以通過靶向抑制KIF14 的表達(dá)，抑制AKT 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而抑制CRC 的發(fā)展，此研究為治療CRC 提供了新的思路。

3.4 miRNA-200c 通過作用于性別決定區(qū)Y 框蛋白2 調(diào)節(jié)CRC 發(fā)展

性別決定區(qū)Y 框蛋白2（sex determining region Y-box 2，SOX2）是

SOX

基因家族的成員，存在于人類染色體3q26.33。Lu 等研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-200c-SOX2 負(fù)反饋機(jī)制參與了CRC 細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，

SOX2

的3'UTR 是miRNA-200c 的靶點(diǎn)，而且

SOX2

占據(jù)了miRNA-200c 的啟動(dòng)子區(qū)域，進(jìn)而降低了miRNA-200c 的表達(dá)，這很可能導(dǎo)致SOX2 的重新激活。以前的研究表明，miRNA-200c-SOX2反饋回路有助于細(xì)胞周期退出和神經(jīng)干/祖細(xì)胞的神經(jīng)元分化?？偠灾琺iRNA-200c 可能受

SOX2

轉(zhuǎn)錄激活/抑制的獨(dú)特作用調(diào)節(jié)。miRNA-200c 的敲低顯著增強(qiáng)了CRC 細(xì)胞系的增殖、遷移和侵襲，而miRNA-200c 的上調(diào)則表現(xiàn)出相反的作用。而且，增加SOX2 的表達(dá)可以下調(diào)miRNA-200c 的表達(dá)。另外，miRNA-200c 的減少增加了CRC 干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)和CRC 細(xì)胞系的球形形成能力。miRNA-200c 可通過抑制SOX2 的表達(dá)阻斷磷脂酰肌醇-3-羥 激 酶（phosphatidylinositol 3- hydroxy kinase，PI3K）-AKT 信號(hào)通路。此研究表明，miRNA-200c可以通過抑制SOX2 的表達(dá)抑制CRC 的發(fā)展。盡管基于miRNA 的治療方法仍處于起步階段，但miRNA-200c 可能是抑制CRC 生長和轉(zhuǎn)移的治療靶標(biāo)。

3.5 miRNA-200c通過抑制周期蛋白依賴性激酶2的表達(dá)調(diào)節(jié)CRC 細(xì)胞增殖與凋亡

周期蛋白依賴性激酶2（cyclin dependent kinase 2，CDK2）屬于周期蛋白依賴性激酶（cyclindependent kinase，CDK）絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員，是細(xì)胞G/S 期轉(zhuǎn)換過程中的重要調(diào)控因子。Gao 等進(jìn)行了熒光素酶報(bào)告基因檢測，并確認(rèn)miRNA-200c 和CDK2 之間存在一定的關(guān)系。當(dāng)miRNA-200c 過表達(dá)時(shí)，CDK2 蛋白表達(dá)水平顯著降低，表明miRNA-200c 能夠通過直接靶向CDK2調(diào)控

CDK2

的轉(zhuǎn)錄后水平。與癌旁正常組織比較，CDK2 在CRC 組織中的表達(dá)明顯升高，且其在CRC 細(xì)胞系SW620、Lovo、HCT116 和SW480 中的表達(dá)水平均高于正常結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM460。miRNA-200c 抑制劑能夠使CDK2 的表達(dá)增加，而轉(zhuǎn)染miRNA-200c 模擬劑的細(xì)胞中CDK2 的表達(dá)強(qiáng)度顯著減弱。此外，研究表明CDK2 逆轉(zhuǎn)了miRNA-200c 對(duì)Lovo 和SW420 細(xì)胞系活力和增殖的增強(qiáng)作用?？傊?，miRNA-200c/CDK2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可促進(jìn)CRC 細(xì)胞增殖并抑制其凋亡，這可能為診斷和治療CRC 提供了有效的方法。

4 小結(jié)與展望

目前關(guān)于miRNA-200c 在CRC 中作用的研究已經(jīng)較為深入和廣泛，miRNA-200c 可以通過抑制ZEB1 的表達(dá)調(diào)節(jié)EMT 過程并抑制CRC 的發(fā)展，也可以通過抑制BMI1 的表達(dá)調(diào)節(jié)CRC 發(fā)展；miRNA-200c 還可以通過靶向抑制KIF14 的表達(dá)，抑制AKT 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而抑制CRC 的發(fā)展；miRNA-200c 能夠抑制SOX2 的表達(dá)，從而阻斷PI3K-AKT信號(hào)通路，抑制CRC 的發(fā)展；miRNA-200c/CDK2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可促進(jìn)CRC 細(xì)胞增殖并抑制其凋亡。由此可見，miRNA-200c 作為抑癌基因在CRC 中具有不可替代的作用。但是，目前對(duì)于miRNA-200c 調(diào)節(jié)CRC 主要機(jī)制的研究并不深入，進(jìn)一步的臨床和機(jī)制研究有待開展，從而為miRNA-200c 作為CRC 的腫瘤標(biāo)志物提供更多的理論支持。