王乙茹，肖明霞，白華毅，趙 平，王春羲，錢錦花，屈 娥*，程志斌*

（1.達(dá)州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 達(dá)州 635001；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，昆明 650201；3.昆明三正生物科技（集團(tuán)）有限公司，昆明 650217；4.玉溪農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 玉溪 653100）

飼用益生菌是一類能夠平衡畜禽腸道菌群、維持腸道健康、增加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的安全飼料添加劑，在我國(guó)及世界飼料工業(yè)“禁抗”過程中發(fā)揮了重要作用[1-3]。凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans）是產(chǎn)乳酸的芽孢桿菌屬益生菌，因良好的耐熱性、適合飼料制粒添加，近年來得到行業(yè)的廣泛關(guān)注[4-6]。體內(nèi)外大量試驗(yàn)表明，凝結(jié)芽孢桿菌顯著抑制腸道主要有害菌，對(duì)維持畜禽腸道健康具有顯著效果，是畜禽生產(chǎn)性能改善的作用機(jī)制之一[7-9]。此外，已有動(dòng)物試驗(yàn)顯示，飼用凝結(jié)芽孢桿菌能夠提高畜禽對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)的消化吸收[10-12]；然而，這一作用的原因鮮有報(bào)道。據(jù)此，本研究通過檢測(cè)飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞腸道消化酶活性的影響，揭示凝結(jié)芽孢桿菌提高肉雞營(yíng)養(yǎng)消化吸收、進(jìn)而改善生長(zhǎng)性能的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 凝結(jié)芽孢桿菌制劑

凝結(jié)芽孢桿菌制劑（含菌量1×1010cfu·g-1）、土霉素含量為20%的土霉素預(yù)混劑，由昆明三正生物科技（集團(tuán)）有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用1日齡健康A(chǔ)A 肉雞240 只，按照體重一致原則分成3 個(gè)處理組（對(duì)照組、抗生素組、凝結(jié)芽孢桿菌組）。對(duì)照組肉雞飼喂基礎(chǔ)日糧，抗生素組肉雞飼喂添加1.5 kg·t-1土霉素預(yù)混劑的試驗(yàn)飼糧（含土霉素300 g·t-1），凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞飼喂添加1 kg·t-1凝結(jié)芽孢桿菌制劑的試驗(yàn)飼糧（凝結(jié)芽孢桿菌含量為1.0×107cfu·g-1全價(jià)配合飼料）。以上每個(gè)處理組8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只試驗(yàn)雞。

1.3 試驗(yàn)日糧

參考NRC（1994）營(yíng)養(yǎng)推薦標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合云南省白羽肉雞養(yǎng)殖情況，試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1，并于82 ℃制成顆粒料飼喂。為了保障試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，所有試驗(yàn)飼糧不添加酶制劑、酸化劑、植物提取物等其他功能性飼料添加劑。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 飼養(yǎng)管理

所有試驗(yàn)雞自由采食、飲水，免疫、消毒、保健程序規(guī)范實(shí)施。試驗(yàn)在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)附屬雞場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)周期21 d。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

至肉雞21日齡，測(cè)定試驗(yàn)雞體重、采食量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量、料重比。隨后每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取1 只雞，宰后取空腸食糜于-20 ℃保存，測(cè)定食糜的總蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶活性。3個(gè)酶活性的測(cè)定采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)處理組間進(jìn)行單因素方差分析與多重比較，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

測(cè)定試驗(yàn)肉雞的生長(zhǎng)性能，結(jié)果見表2。

表2 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 U·mg-1

由表2可知，凝結(jié)芽孢桿菌組與抗生素組21日齡體重及平均日增重差異不顯著（P＞0.05），且兩組均顯著大于對(duì)照組（P＜0.05）。料重比指標(biāo)，凝結(jié)芽孢桿菌組與抗生素組差異不顯著（P＞0.05)，且均顯著小于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.2 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞空腸食糜消化酶活性的影響

測(cè)定試驗(yàn)肉雞空腸食糜消化酶活性，結(jié)果見表3。

表3 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞空腸食糜消化酶活性的影響

由表3可知，凝結(jié)芽孢桿菌組與抗生素組肉雞空腸食糜蛋白酶及淀粉酶活性差異不顯著（P＞0.05），且兩組均顯著大于對(duì)照組（P＜0.05）。脂肪酶活性指標(biāo)，3個(gè)處理組之間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討 論

3.1 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，與飼喂基礎(chǔ)飼糧的對(duì)照組肉雞相比，飼喂1×107cfu·g-1凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞平均日增重顯著增加約8.3%，料重比顯著降低。A.T.Hung等[13]試驗(yàn)表明，1～21 d期間飼喂高劑量2.5×107cfu·g-1凝結(jié)芽孢桿菌的肉雞平均日增重比基礎(chǔ)飼糧組肉雞顯著增加了7.8%。本試驗(yàn)結(jié)果與A.T.Hung 等[13]等報(bào)道的結(jié)果基本一致。Zhang B.等[10]研究表明，與基礎(chǔ)飼糧組肉雞比，1～21 d 期間飼喂5×106cfu·g-1凝結(jié)芽孢桿菌的肉雞平均日增重顯著增加了4.6%，但料重比指標(biāo)兩組之間差異不顯著。趙娜等[14]試驗(yàn)顯示，1～21 d期間飼喂低劑量3×105cfu·g-1凝結(jié)芽孢桿菌的肉雞平均日增重及料重比指標(biāo)，與基礎(chǔ)飼糧組肉雞差異均不顯著。以上結(jié)果表明，凝結(jié)芽孢桿菌改善肉雞生長(zhǎng)性能的作用具有劑量效應(yīng)，這一觀點(diǎn)在Wang Y.B.等[15]報(bào)道的試驗(yàn)中得以驗(yàn)證。

表2中數(shù)據(jù)進(jìn)一步顯示，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞生長(zhǎng)性能與飼用抗生素組差異不顯著。這一結(jié)果表明，肉雞飼喂1×107cfu·g-1較高劑量的凝結(jié)芽孢桿菌能夠替代抗生素保障肉雞較好的生長(zhǎng)性能。A.T.Hung 等[13]報(bào)道，1～21 d 期間飼喂2.5×107cfu·g-1凝結(jié)芽孢桿菌的肉雞平均日增重及料重比指標(biāo)，與飼喂桿菌肽鋅組肉雞差異不顯著。吳正可等[16]最新報(bào)道也顯示，飼喂凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞的生長(zhǎng)性能總體與復(fù)合抗生素組（金霉素、黃霉素、吉他霉素）肉雞差異不顯著。

3.2 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞空腸食糜消化酶活性的影響

Li C.L.等[11]研究表明，與基礎(chǔ)飼糧組比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞對(duì)飼糧粗蛋白和能量的表觀代謝率顯著增加。Zhang B.等[10]研究顯示，飼用凝結(jié)芽孢桿菌顯著提高了肉雞對(duì)飼糧氮的利用率。顯然，飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率提高是凝結(jié)芽孢桿菌改善肉雞生長(zhǎng)性能的重要原因，然而這一作用的機(jī)制卻鮮有試驗(yàn)研究與報(bào)道。由于蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等多種腸道消化酶是表征畜禽對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)消化利用的關(guān)鍵指標(biāo)[17]，因此本研究進(jìn)一步檢測(cè)了試驗(yàn)肉雞空腸食糜消化酶活性。

表3結(jié)果顯示，與基礎(chǔ)飼糧組肉雞比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞空腸食糜的蛋白酶、淀粉酶活性分別顯著增加了13.2%和11.6%；盡管凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞空腸食糜的脂肪酶活性也增加了8.7%，但與基礎(chǔ)飼糧組肉雞無顯著差異。僅有的一篇試驗(yàn)報(bào)道顯示[15]，凝結(jié)芽孢桿菌能夠顯著增加42日齡AA 肉雞十二指腸食糜的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，這與本研究結(jié)果基本一致。一般而言，肉雞腸道食糜中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的來源包括二類[17]：其一，內(nèi)源分泌。主要由胰腺、腸黏膜、胃黏膜等消化器官的細(xì)胞分泌[18-19]；其二，外源補(bǔ)充。主要包括飼用酶制劑、微生態(tài)制劑等飼料添加劑[20-21]。由于本研究所有飼料沒有添加飼用酶制劑，據(jù)此推測(cè)凝結(jié)芽孢桿菌可能具有胞外分泌各類消化酶增強(qiáng)肉雞對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化利用的作用。趙麗娜[22]體外培養(yǎng)凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)顯示，凝結(jié)芽孢桿菌（菌株編號(hào)BC147）培養(yǎng)液中含有蛋白酶、淀粉酶。張韻等[23]通過體外試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，凝結(jié)芽孢桿菌（菌株編號(hào)BC303）具有胞外分泌蛋白酶和淀粉酶的能力。張維娜[24]體外試驗(yàn)表明，凝結(jié)芽孢桿菌（菌株編號(hào)JSSW-07）能夠同時(shí)分泌蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。以上體外消化酶檢測(cè)的報(bào)道，驗(yàn)證了本研究飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞腸道食糜消化酶活性的提高效果，這也與表2飼用凝結(jié)芽孢桿菌改善肉雞料重比的結(jié)果相符。

4 結(jié) 論

本研究通過檢測(cè)腸道消化酶活性表明，飼用凝結(jié)芽孢桿菌增加了肉雞腸道食糜消化酶活性，這是飼用凝結(jié)芽孢桿菌改善肉雞生長(zhǎng)性能的重要機(jī)制之一。