袁鑫鑫，姚新奎,2,3，曾亞琦,2，王建文,2，孟 軍,2*，任萬(wàn)路,2，王川坤,2，那貝·達(dá)尼亞爾

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)馬產(chǎn)業(yè)研究院，新疆烏魯木齊 830052；3.新疆馬繁育與運(yùn)動(dòng)生理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆烏魯木齊 830052）

新疆育馬業(yè)正處于加速轉(zhuǎn)型時(shí)期，擴(kuò)大馬匹繁育生產(chǎn)規(guī)模，提高幼駒的培育水平和母馬繁殖成活率十分關(guān)鍵[1]。盡管馬獸醫(yī)學(xué)有所進(jìn)步，但晚期胎兒死亡率高、流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局仍然是育馬業(yè)的主要問(wèn)題[2]。在飼養(yǎng)環(huán)節(jié)，母馬與胎兒或胚胎的正常聯(lián)系受到損壞，從而使母馬妊娠停止而流產(chǎn)[3]。盧亞賓等[4]研究發(fā)現(xiàn)伊犁馬在妊娠前期發(fā)生流產(chǎn)時(shí)，血液中雌二醇（E2）、孕酮（P）波動(dòng)較大，可作為診斷母馬早期是否受孕的依據(jù)。張秀坤等[5]研究發(fā)現(xiàn)三河馬在妊娠前期常由于內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用紊亂而發(fā)生流產(chǎn)。陳敦金等[6]研究發(fā)現(xiàn)，母體甲狀腺（T4）水平與流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局相關(guān)，是一項(xiàng)重要的檢測(cè)指標(biāo)。Marinescu 等[7]研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)前壓力會(huì)導(dǎo)致孕婦皮質(zhì)醇（COR）升高，并且與胎兒神經(jīng)發(fā)育中斷、胎盤(pán)異常、自然流產(chǎn)或早產(chǎn)有關(guān)。王蘊(yùn)慧等[8]研究發(fā)現(xiàn)，孕婦妊娠期胰島素（INS）水平增加會(huì)導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局增加。因此，依據(jù)血清激素的變化可判斷妊娠母馬是否處于健康狀態(tài)，胎兒是否正常發(fā)育[9]。

目前，在妊娠馬中研究較多的為妊娠早期血清激素變化與妊娠結(jié)局的關(guān)系，而對(duì)于不同妊娠階段及產(chǎn)后多種激素的變化情況研究較少。本研究通過(guò)對(duì)流產(chǎn)伊犁馬與正常分娩伊犁馬在妊娠第205、318 天及產(chǎn)后第2 天血清相關(guān)激素水平進(jìn)行檢測(cè)，探究伊犁馬在妊娠期間血清激素水平的變化，為伊犁馬在妊娠期發(fā)生不良妊娠結(jié)局相關(guān)研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)于2019 年12 月—2020 年6 月進(jìn)行，選取伊犁哈薩克自治州昭蘇馬場(chǎng)內(nèi)21 匹懷孕及7 匹空懷伊犁馬，經(jīng)馬場(chǎng)獸醫(yī)檢查馬匹狀態(tài)為健康，懷孕馬妊娠時(shí)間均為妊娠第203 天，年齡范圍在4～12 歲。試驗(yàn)所選母馬均集中統(tǒng)一飼養(yǎng)管理，膘情相近，妊娠狀況良好。

1.2 試驗(yàn)方法 根據(jù)母馬妊娠結(jié)局及妊娠狀態(tài)，將5 匹流產(chǎn)及16 匹正常分娩母馬分為流產(chǎn)組及正常分娩組；7匹空懷母馬為對(duì)照組。流產(chǎn)組或正常分娩組中流產(chǎn)母馬發(fā)生于妊娠第315～357 天。試驗(yàn)采用靜脈不抗凝采血法，分別在妊娠第205、318 天及產(chǎn)后第2 天對(duì)母馬進(jìn)行頸靜脈采血，每次采血5 mL，采集的血液立即以3 000 r/min離心20 min 后，取上層血清置于-20℃冰箱中待測(cè)。樣品送北京北方生物技術(shù)研究所檢測(cè)，通過(guò)XH6080 放免儀采用放射性免疫法分別檢測(cè)血清中INS、COR、P、T4、E2含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)結(jié)果用Excel 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，使用SPSS 26.0 分析軟件對(duì)各組間血清激素指標(biāo)運(yùn)用One-Way ANOVA 方差分析以及Duncan's 多重比較。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤來(lái)表示。

2 結(jié)果

2.1 不同妊娠狀態(tài)母馬血清激素水平變化 由表1 可知，妊娠第205 天空懷組COR 含量高于流產(chǎn)組和正常分娩組（P＜0.01），但流產(chǎn)組和正常分娩組無(wú)顯著差異。妊娠第205 天流產(chǎn)組和正常分娩組的E2含量高于空懷組（P＜0.01），而INS、P、T4含量無(wú)顯著變化。妊娠第318 天隨著胎兒發(fā)育，空懷組INS 含量高于流產(chǎn)組和正常分娩組（P＜0.01），COR 含量在各組間無(wú)顯著差異，流產(chǎn)組P 含量高于空懷組（P＜0.05），空懷組T4含量高于正常分娩組（P＜0.05）和流產(chǎn)組（P＜0.01），流產(chǎn)組和正常分娩組的E2含量高于空懷組（P＜0.01）。空懷組由于不存在分娩情況故不進(jìn)行對(duì)比。產(chǎn)后第2 天正常分娩組T4高于流產(chǎn)組（P＜0.01），INS、COR、P、E2含量在流產(chǎn)組和正常分娩組之間無(wú)顯著性差異。

表1 空懷、流產(chǎn)及正常分娩母馬血清激素水平含量

2.2 5 種血清激素在妊娠時(shí)期的變化 如圖1-A 所示，空懷組INS 含量在妊娠第205、318 天無(wú)顯著差異，流產(chǎn)組INS 含量在產(chǎn)后第2 天高于妊娠第318 天（P＜0.05），正常分娩組妊娠第205 天INS 含量高于妊娠第318 天和產(chǎn)后第2 天。空懷組COR 含量在妊娠第205 天高于妊娠第318 天和產(chǎn)后第2 天（P＜0.01），流產(chǎn)組COR含量在產(chǎn)后第2 天出現(xiàn)升高（P＞0.05），正常妊娠組COR 含量在妊娠第205、318 天及產(chǎn)后第2 天均無(wú)顯著差異（圖1-B）?？諔呀MP 含量在妊娠第205、318 天無(wú)顯著差異，流產(chǎn)組、正常分娩組P 含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)（圖1-C）?？諔呀M和正常分娩組的T4含量呈上升趨勢(shì)，流產(chǎn)組呈下降趨勢(shì)，各組T4含量在各個(gè)時(shí)期無(wú)顯著差異（圖1-D）?？諔呀M、流產(chǎn)組和正常分娩組的E2含量在整個(gè)時(shí)期內(nèi)均呈下降趨勢(shì)，流產(chǎn)組E2含量為妊娠第205 天＞妊娠第318 天＞產(chǎn)后第2 天（P＜0.01），正常分娩組E2含量在妊娠第205 天高于妊娠第318 天及產(chǎn)后第2 天（P＜0.01）、妊娠第318 天高于產(chǎn)后第2 天（P＜0.05），空懷組下降不顯著（圖1-E）。

圖1 5 種血清激素在妊娠時(shí)期的變化

3 討論

3.1 不同妊娠狀態(tài)母馬血清激素對(duì)比分析 E2、P 水平增加是妊娠前期母馬完成胚胎附植并建立妊娠的標(biāo)志[10]，本試驗(yàn)中妊娠第205 天流產(chǎn)組和正常分娩組母馬的E2含量均極顯著高于空懷組，說(shuō)明在妊娠前期母馬已成功完成胚胎附植并建立妊娠，導(dǎo)致E2水平升高[11]。Canisso[12]等監(jiān)測(cè)了18 匹母馬在妊娠第100 天至馬駒足月體內(nèi)E2的水平變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)在妊娠中期E2含量維持較高水平，與本試驗(yàn)妊娠第205 天正常懷孕組和流產(chǎn)組的E2水平相似，這可能是此時(shí)胚胎在母馬體內(nèi)正常生長(zhǎng)，與空懷馬相比雌激素水平明顯升高。COR在應(yīng)激狀態(tài)下可迅速升高，持續(xù)應(yīng)激因素存在時(shí)血液中COR 會(huì)長(zhǎng)時(shí)間地維持在較高水平[13]。本試驗(yàn)中空懷組母馬可能在妊娠第205 天產(chǎn)生了應(yīng)激，從而引發(fā)血清COR 含量升高。妊娠后期母馬已適應(yīng)胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育[14]，胎兒營(yíng)養(yǎng)需求量也隨胎齡的增加而增長(zhǎng)，母體進(jìn)入妊娠后期激素也處于不斷變化的一個(gè)狀態(tài)[15]。INS 是機(jī)體內(nèi)唯一能使血糖降低的激素[16]，處于妊娠后期的妊娠母馬INS 含量極顯著低于空懷母馬，可能是妊娠后期母馬會(huì)優(yōu)先將葡萄糖輸送給胎兒，保障胎兒對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求，因此導(dǎo)致了母馬血液中的葡萄糖維持在較低水平，INS 含量也因此降低[17]。正常懷孕母馬在妊娠后期E2與P 水平均高于未懷孕母馬激素水平。此外，T4具有促進(jìn)胎兒的腦、生殖器官和骨骼正常發(fā)育的作用，而在妊娠中后期胎兒還未能自身合成，需要母體供給[18]。因此本試驗(yàn)中妊娠第318 天試驗(yàn)組母馬血清T4水平降低，可能正是由于母馬將部分激素供給胎兒所致。研究發(fā)現(xiàn)，分娩啟動(dòng)時(shí)，子宮內(nèi)環(huán)境發(fā)生很大變化，就生殖激素而言，分娩時(shí)孕激素含量降低，雌激素含量急劇增加，分娩后孕激素、雌激素則迅速下降，產(chǎn)后INS、COR 含量均無(wú)顯著性變化[19-22]。T4含量在整個(gè)生命周期中變化很大，而T4分泌失衡可對(duì)生命健康造成嚴(yán)重不良影響[23]。而在本試驗(yàn)中，流產(chǎn)組分娩后第2 天T4水平極顯著低于正常分娩組，可能是由于在妊娠后期流產(chǎn)組母馬出現(xiàn)病理現(xiàn)象導(dǎo)致甲狀腺激素分泌紊亂，內(nèi)分泌失調(diào)，最終造成流產(chǎn)[24]。因此在妊娠后期可通過(guò)測(cè)定妊娠母馬體內(nèi)甲狀腺激素含量，監(jiān)測(cè)母馬妊娠狀況。

3.2 血清激素在妊娠期及產(chǎn)后的變化 母馬妊娠期血清激素水平的正常調(diào)控是保障胎兒能夠正常發(fā)育及分娩的必要條件，同時(shí)，母體本身的健康狀況亦是能否正常分娩的關(guān)鍵[25]。懷孕伊犁馬在整個(gè)妊娠期內(nèi)，血液中INS、COR、P、T4和E2濃度存在動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。有研究發(fā)現(xiàn)，妊娠母馬血清INS 水平隨著妊娠時(shí)間的增加而下降[26]。本試驗(yàn)中，隨著妊娠時(shí)間增加，正常分娩組和流產(chǎn)組INS 水平下降，可能是由于妊娠后期胎兒快速發(fā)育，需要從母體吸收大量葡萄糖作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此導(dǎo)致母體血清中葡萄糖含量降低，胰島素含量也因此而下降。但流產(chǎn)組的INS 含量在產(chǎn)后顯著升高，說(shuō)明母體內(nèi)存在大量葡萄糖，胎兒在子宮內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)能獲得充足營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致胎兒發(fā)育不良，母馬最終流產(chǎn)。本試驗(yàn)中，正常妊娠組在整個(gè)妊娠期COR 含量處于穩(wěn)定狀態(tài)，而流產(chǎn)母馬COR 含量在產(chǎn)后第2 天出現(xiàn)升高，可能是在流產(chǎn)前母馬受到了應(yīng)激，從而引起COR 含量升高，最終流產(chǎn)[27]。P 在母馬維持正常妊娠的過(guò)程中具有非常重要的作用，其水平變化對(duì)妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)具有重要的應(yīng)用價(jià)值[28]。有研究監(jiān)測(cè)了雌性藍(lán)狐在妊娠期血清中P 的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)在妊娠后期達(dá)到最高，而在產(chǎn)后達(dá)到最低[29]。趙鵬鵬等[30]也檢測(cè)到圍產(chǎn)期雌性大熊貓分娩前P達(dá)到最高值后出現(xiàn)迅速下降，分娩完成后E2、P 下降至最低，此趨勢(shì)與本試驗(yàn)結(jié)果一致。母體T4缺乏將會(huì)造成流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局的發(fā)生[22]。本試驗(yàn)中，監(jiān)測(cè)到流產(chǎn)母馬血清甲狀腺激素在整個(gè)妊娠期內(nèi)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，這可能由于懷孕母馬出現(xiàn)甲狀腺功能減退導(dǎo)致母馬流產(chǎn)。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，伊犁馬血清激素含量在妊娠第205、318 天及產(chǎn)后第2 天均有不同變化，空懷母馬血清中除COR 含量外其余激素均無(wú)顯著性變化；正常分娩母馬INS 和E2含量在妊娠第205、318 天及產(chǎn)后第2天處于下降趨勢(shì)，T4含量處于上升趨勢(shì)，COR 含量無(wú)明顯變化，而P 含量出現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)；流產(chǎn)母馬在產(chǎn)后第2 天的INS 和COR 含量相對(duì)于正常分娩組異常升高，而T4含量下降，此外P 和E2含量與正常妊娠組沒(méi)有顯著性變化。因此，在妊娠期間應(yīng)定期對(duì)母馬進(jìn)行血清激素等妊娠檢查，通過(guò)血清激素變化判斷胎兒是否在母馬體內(nèi)正常生長(zhǎng)發(fā)育，根據(jù)母馬血清激素變化及時(shí)采取相應(yīng)措施，以防止母馬與胎兒或胚胎的正常聯(lián)系受到損壞導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局。