孟競(jìng)堯，李曉剛，葉均安，徐寧寧，楊金勇

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310058）

復(fù)合益生菌制劑作為新型綠色微生態(tài)制劑，可以顯著提高畜禽的生長(zhǎng)性能和飼料利用效率[1]。近幾年復(fù)合益生菌在反芻動(dòng)物生產(chǎn)應(yīng)用中的研究不斷深入，尤其在犢牛上的應(yīng)用逐漸成為研究熱點(diǎn)。飼料中添加復(fù)合益生菌可以顯著改善犢牛腸道內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)機(jī)體消化吸收，提高犢牛的生長(zhǎng)性能[2]。趙會(huì)利等[3]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂復(fù)合益生菌可以顯著提高犢牛血清中免疫球蛋白（IgM）含量，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[4]。也有一些研究表明，復(fù)合益生菌制劑對(duì)犢牛的生長(zhǎng)性能和血液理化性質(zhì)[1]、體尺指數(shù)[5]、血清指標(biāo)[8]無(wú)顯著影響。Alugongo 等[1]研究發(fā)現(xiàn)，添加復(fù)合益生菌對(duì)犢牛血液指標(biāo)無(wú)顯著影響。符運(yùn)勤[5]研究表明，添加益生菌對(duì)犢牛的體高和胸圍無(wú)顯著影響，各組之間血液生化指標(biāo)差異不明顯。因此，復(fù)合益生菌制劑在犢牛上的研究有待深入。本試驗(yàn)旨在研究地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和米曲霉組成的復(fù)合益生菌對(duì)4～6 月齡斷奶犢牛生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和血液生化指標(biāo)的影響，為復(fù)合益生菌制劑在斷奶犢牛上的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 復(fù)合益生菌為杭州利牧源科技有限公司產(chǎn)品，含有地衣芽孢桿菌（活菌數(shù)≥2.0×109CFU/g）、枯草芽孢桿菌（活菌數(shù)≥2.0×109CFU/g）和米曲霉（活菌數(shù)≥2.0×104CFU/g），水分≤10%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選?。?.0±0.5）月齡、體重（152.1±1.5）kg和胎次（2.0±0.86）的32 頭健康斷奶后犢牛，隨機(jī)分成4 組，每組8 頭牛。斷奶犢牛飼喂顆粒料和燕麥草，日糧組成和營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1、表2。4 個(gè)處理組分別飼喂含有0、1、2、3g/kg（干物質(zhì)計(jì)算）復(fù)合益生菌的顆粒化全混合日糧（PTMR）日糧，其中0 g/kg 組為對(duì)照組。預(yù)試期添加量減半。

表1 顆粒料日糧組成和營(yíng)養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

表2 燕麥營(yíng)養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 飼養(yǎng)試驗(yàn)于2019 年7 月24 日—2019 年9 月25 日在浙江省金華市光明牧業(yè)有限公司開(kāi)展。預(yù)試期7 d，正試期56 d。犢牛集體圍欄飼養(yǎng)，每欄8 頭，圍欄面積為4 m×5 m，自由采食和飲水（每頭犢牛飼料供應(yīng)量為PTMR 5 kg/d、燕麥草1.5 kg/d）。每日分別于06:00、13:00 和18:00 喂料3 次。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 體重體尺 分別于試驗(yàn)第0、20、40、60 天晨飼前稱(chēng)量體重。測(cè)定每日每只犢牛剩料，計(jì)算犢牛采食量，通過(guò)后期實(shí)驗(yàn)室分析處理計(jì)算干物質(zhì)采食量（DMI），總干物質(zhì)采食量=采食顆?；占Z干物質(zhì)+采食燕麥草干物質(zhì)。統(tǒng)計(jì)每日犢牛腹瀉頭數(shù)，計(jì)算腹瀉發(fā)生情況。測(cè)定體斜長(zhǎng)、體高、胸圍和管?chē)?，?jì)算體軀指數(shù)、體長(zhǎng)指數(shù)和胸圍指數(shù)，計(jì)算公式：

耗料增重比=標(biāo)準(zhǔn)飼料重/增重體軀指數(shù)=[胸圍（cm）/體斜長(zhǎng)（cm）]×100%體長(zhǎng)指數(shù)=[體斜長(zhǎng)（cm）/體高（cm）]×100%胸圍指數(shù)=[胸圍（cm）/體高（cm）]×100%

1.4.2 營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定 顆粒化日糧、燕麥草和糞樣的干物質(zhì)（DM）、粗蛋白質(zhì)（CP）、粗脂肪（EE）參考張麗英[6]的方法測(cè)定，中性洗滌纖維（NDF）、酸性洗滌纖維（ADF）以及鈣（Ca）、磷（P）按照Van Soest等[7]的方法測(cè)定。

1.4.3 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率 試驗(yàn)開(kāi)始后，每天記錄犢牛糞便形態(tài)，對(duì)糞便進(jìn)行評(píng)分（表 3）。在試驗(yàn)初期和末期分別連續(xù)3 d 通過(guò)直腸采糞法收集糞樣，利用內(nèi)源指示劑法測(cè)定營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率，以酸不溶灰分（AIA）為指示劑。

表3 糞便評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.4.4 血清生化指標(biāo) 每組選取8 頭牛，試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天尾靜脈采血5 mL，3 000 r/min 離心15 min，取血清-20℃凍存待測(cè)。通過(guò)全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLOB）、白球比（A/G）、堿性磷酸酶（ALB）、葡萄糖（GLU）、總膽固醇（CHOL）、血液尿素氮（BUN）、甘油三酯（TG）等生化指標(biāo)，試劑盒為中山標(biāo)佳生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2013 初步整理，應(yīng)用SPSS 26 軟件Proc mixed 模型進(jìn)行方差分析和Tukey多重比較，分析主體間效應(yīng)，成對(duì)比較。P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合益生菌對(duì)犢牛生長(zhǎng)性能的影響 從表4 可以看出，3 g/kg 復(fù)合菌組4～6 月齡犢牛的日增重高于對(duì)照組和1 g/kg 復(fù)合菌組（P＜0.05），3 g/kg 復(fù)合菌組顆粒料采食量高于其余各組（P＜0.05），燕麥草和總干物質(zhì)采食量在各組間無(wú)顯著差異。3 g/kg 復(fù)合菌組的耗料增重比低于其余3 組（P＜0.01）。因此，添加3 g/kg 復(fù)合益生菌可以顯著提高犢牛的平均日增重、顆粒料采食量，降低耗料增重比，提高飼料利用率。由圖1、2 可見(jiàn)，顆粒料與燕麥草采食量在30～40 d 有所降低，可能是試驗(yàn)過(guò)程中進(jìn)行了調(diào)群和大采樣，導(dǎo)致牛群整體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，降低了采食量。

圖1 復(fù)合益生菌對(duì)4～6 月齡犢牛顆粒料采食量的影響

表4 復(fù)合益生菌對(duì)4～6 月齡犢牛平均日增重、采食量和耗料增重比的影響

圖2 復(fù)合益生菌對(duì)4～6 月齡犢牛燕麥草采食量的影響

由表5 可知，犢牛體斜長(zhǎng)、胸圍和管?chē)戎笖?shù)均隨著犢牛月齡增加而增大，增長(zhǎng)規(guī)律基本一致（P＞0.05）。隨著月齡逐漸增加，體軀、體長(zhǎng)指數(shù)也逐漸增加，但組間差異不顯著。

表5 復(fù)合益生菌對(duì)4～6 月齡犢牛體尺相關(guān)指標(biāo)的影響

2.2 復(fù)合益生菌對(duì)犢牛的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響 由表6 可知，對(duì)照組CP、ADF 的表觀消化率低于3 g/kg復(fù)合菌組（P＜0.05）。由圖3 可知，試驗(yàn)第2 周以后對(duì)照組糞便評(píng)分均高于試驗(yàn)組（P＞0.05）。

圖3 復(fù)合益生菌對(duì)4～6 月齡犢牛糞便評(píng)分的影響

表6 復(fù)合益生菌對(duì)4～6 月齡犢牛營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響 %

2..3 復(fù)合益生菌對(duì)犢牛血液生化指標(biāo)的影響 由表7 可知，3 g/kg 復(fù)合菌組的ALB 高于其他3 組（P＜0.05），其他血液指標(biāo)在3 組間均無(wú)顯著差異。

表7 復(fù)合益生菌對(duì)4～6 月齡犢牛血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 復(fù)合益生菌對(duì)犢牛生長(zhǎng)性能的影響 幼齡時(shí)期是畜禽生長(zhǎng)過(guò)程重要的階段，直接關(guān)系到成年牛的生長(zhǎng)、生產(chǎn)性能。體重是犢牛生長(zhǎng)性能的重要指標(biāo)之一，日增重越大，耗料增重比越低，犢牛的生長(zhǎng)性能越好。研究表明，在飼料中添加酵母和米曲霉（有效活菌數(shù)分別為2×109、1.9×109CFU/g）可以顯著提高犢牛的平均日增重[2,4]。趙會(huì)利等[3]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%的納豆芽孢桿菌（有效活菌數(shù)為140 CFU/ng）可以提高30 日齡犢牛的平均日增重。楊春濤[9]研究發(fā)現(xiàn)，在開(kāi)食料中添加熱帶假絲酵母與桑葉黃酮（活菌含量為5×109CFU/g）可以顯著提高42～80 日齡犢牛平均日增重（3.13%和8.38%）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加3 g/kg 復(fù)合益生菌可顯著提高犢牛的日增重，但1 g/kg 和2 g/kg 復(fù)合菌組日增重與對(duì)照組無(wú)顯著差異，說(shuō)明復(fù)合益生菌添加量在3 g/kg 時(shí)對(duì)犢牛日增重有顯著提高作用。

牛對(duì)草料有天然的喜食性[10]。Kawas 等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在初生公羔羊日糧中添加酵母和乳酸桿菌培養(yǎng)物（2×109CFU/g）可以提高日增重，降低耗料增重比，但對(duì)DMI 無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)中，在定量飼喂?fàn)倥TMR 和燕麥草的情況下，PTMR 中添加3 g/kg 復(fù)合菌時(shí)，犢牛采食量顯著提高，耗料增重比顯著降低，說(shuō)明復(fù)合益生菌可以促進(jìn)犢牛采食顆粒料，提高DMI，并提高飼料轉(zhuǎn)化效率。

犢牛糞便評(píng)分以及腹瀉率等是衡量其生長(zhǎng)性能、發(fā)育狀況的重要指標(biāo)[12]。在犢牛早期（1～21 d）基礎(chǔ)日糧中添加布拉氏酵母（活菌數(shù)為1.38×1010CFU/g）0、1、3、5 g/（d·頭），發(fā)現(xiàn)添加3 g/（d·頭）布拉氏酵母能顯著降低犢牛腹瀉率[13]。從糞便評(píng)分圖來(lái)看，試驗(yàn)組犢牛的腹瀉情況好于對(duì)照組，且3 g/kg 復(fù)合菌組犢牛腹瀉率最低，這可能因?yàn)樘砑訌?fù)合益生菌促進(jìn)了腸胃益生菌群的建立，降低了營(yíng)養(yǎng)性腹瀉疾病的發(fā)生概率[8,14-15]。因此，4～6 月齡犢牛飼料中添加復(fù)合益生菌可以降低腹瀉率，在一定程度上改善犢牛的健康狀況。

3.2 復(fù)合益生菌對(duì)犢牛體尺的影響 體尺指標(biāo)不僅反映犢牛的生長(zhǎng)狀況，還可以判斷其遺傳基因水平以及未來(lái)發(fā)育狀況，且體尺指標(biāo)與體重的變化趨勢(shì)有一定的相似性[17-19]。有研究表明，飼喂地衣芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌（活菌數(shù)均為2×1010CFU/g）組0～6 周齡犢牛的體尺指數(shù)與對(duì)照組無(wú)顯著差異[5]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加復(fù)合益生菌未對(duì)犢牛體尺產(chǎn)生顯著影響，說(shuō)明添加復(fù)合益生菌可能不會(huì)對(duì)體尺相關(guān)指標(biāo)產(chǎn)生顯著影響，因?yàn)楸驹囼?yàn)中飼喂?fàn)倥５膹?fù)合益生菌可能對(duì)促進(jìn)骨骼發(fā)育并無(wú)顯著作用，也可能受到環(huán)境狀況和犢牛自身狀況的影響。

3.3 復(fù)合益生菌對(duì)犢牛營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響 研究發(fā)現(xiàn)，微生物制劑、復(fù)合益生菌類(lèi)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物能夠降解難以被犢牛腸胃吸收利用的大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率[21]。楊朋飛等[2]、梁金逢等[23]研究發(fā)現(xiàn)，育成牛TMR 日糧中添加5 g/ 頭甘露寡糖和50 g/頭復(fù)合益生菌劑可以顯著提高CP、EE、DM等消化率。蘇勇華等[16]研究發(fā)現(xiàn)，多浪羊飼糧中添加3.2×109CFU/g 枯草芽孢桿菌可以顯著提高DM、CP、NDF、ADF 表觀消化率。本試驗(yàn)中，3 g/kg 復(fù)合菌4～6月齡犢牛對(duì)CP、ADF 的消化能力顯著提高，1、2 g/kg復(fù)合菌組與對(duì)照組差異不顯著，這可能是由于復(fù)合益生菌劑量較低，未對(duì)犢牛消化率產(chǎn)生顯著影響的結(jié)果。與前人研究結(jié)果相比，本試驗(yàn)中各組DM 的表觀消化率無(wú)顯著差異，這可能是由于犢牛飼養(yǎng)環(huán)境、飼喂益生菌種類(lèi)、飼料種類(lèi)、飼喂方式等的差異造成的[24]。

3.4 復(fù)合益生菌對(duì)犢牛血液生化指標(biāo)的影響 血液生化指標(biāo)反映動(dòng)物機(jī)體內(nèi)部代謝水平和健康狀況。犢牛在出生之前，母體胎盤(pán)的特殊結(jié)構(gòu)導(dǎo)致母體中重要的免疫球蛋白無(wú)法進(jìn)入犢牛血液循環(huán)系統(tǒng)，出生后犢牛消化代謝機(jī)能不完善，免疫能力極低，此時(shí)若有病原菌入侵，犢牛極易患病[25]。益生菌是一種很好的免疫激活劑，可以提高動(dòng)物機(jī)體的免疫能力[26-27]。梁金逢等[23]研究表明，日糧中添加甘露寡糖和復(fù)合益生菌劑可以提高育成牛機(jī)體的體液免疫應(yīng)答能力和抗氧化能力。血清TP 由ALB 和GLB 組成，GLB 可以增強(qiáng)機(jī)體免疫力，ALB可以維持血液膠體滲透壓。正常范圍內(nèi)，TP 可以提高牦牛幼崽代謝水平，增強(qiáng)免疫力，保證良好發(fā)育狀態(tài)[28]。本研究中，3 g/kg 復(fù)合菌劑組中ALB 含量顯著高于對(duì)照組，但添加復(fù)合益生菌對(duì)其他血液指標(biāo)無(wú)顯著影響，說(shuō)明添加復(fù)合益生菌可以在一定程度上提高動(dòng)物機(jī)體免疫力，可以維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（蛋白質(zhì)、脂肪和糖類(lèi)）代謝無(wú)不良影響。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，添加復(fù)合益生菌可以提高4～6月齡犢牛的平均日增重、顆粒料采食量、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和飼料轉(zhuǎn)化率，降低犢牛腹瀉發(fā)生率，在一定程度上可提高犢牛免疫力。