鄧蓉蓉，解東祥，劉勝寒，段 濤，李 森，和立文，張 微

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，動物營養(yǎng)學(xué)國家重點實驗室，北京 100193）

山羊絨是高檔精梳毛制品和紡織品的原料，羊絨細度和羊絨長度是2 個重要的羊絨品質(zhì)評價指標，羊絨越細、長度越長則紡織價值和經(jīng)濟價值越高。研究發(fā)現(xiàn)，絨山羊皮膚次級毛囊生長期長度和毛囊毛母質(zhì)細胞分裂增殖的速度和數(shù)量能夠決定羊絨的細度和長度[1-2]。褪黑素（Melatonin，MT）是主導(dǎo)生物節(jié)律的物質(zhì)，能夠調(diào)節(jié)動物被毛生長及其周期性規(guī)律。劉影等[3]、常子麗[4]研究表明，絨山羊非長絨期埋植褪黑素可使山羊絨提早萌發(fā)。Duan 等[5-6]、Wu 等[7]利用褪黑素使絨山羊在非長絨期長絨，并與自然長絨有效銜接，提高了羊絨的長度和產(chǎn)量，增加了羊絨密度并降低了羊絨細度。絨山羊皮膚次級毛囊生長山羊絨，次級毛囊發(fā)生發(fā)育始于胚胎期，在出生后4～6 月齡發(fā)育完成[8-10]。因此，幼齡階段是提高絨山羊皮膚次級毛囊基數(shù)的關(guān)鍵時期。12 月底、2 月底正處于母羊妊娠后期，此階段不僅是胎兒發(fā)育的時期，也是毛囊發(fā)育成熟的重要時期。武子元等[11]在成年內(nèi)蒙古絨山羊生絨后期埋植褪黑素的研究中發(fā)現(xiàn)，12 月底、2 月底2 次埋植褪黑素不會導(dǎo)致山羊絨提前脫落，也不會促進山羊絨生長。但目前為止，在絨山羊妊娠期，即次級毛囊發(fā)育初期施用褪黑素對羔羊毛囊發(fā)育的影響未見報道。因此，本試驗給妊娠期絨山羊埋植褪黑素，研究其對羔羊毛囊發(fā)育的影響，探索提高絨山羊生產(chǎn)性能的新途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗在內(nèi)蒙古億維白絨山羊有限責(zé)任公司進行，選擇20 只體重（39.89±1.24）kg、已妊娠2個月的內(nèi)蒙古絨山羊，隨機分為對照組和試驗組，每組10 只，且每只母羊為1 個重復(fù)。對照組母羊不做任何處理，試驗組母羊在12 月和次年2 月（妊娠期60 d 和120 d）2 次埋植褪黑素，劑量為2 mg/kg BW，埋植部位為絨山羊左耳后頸部皮下。所產(chǎn)羔羊于（32±4）日齡在左側(cè)肩胛骨后緣用直徑為1 cm 的圓形皮膚取樣器采集皮膚樣品，同時母羊進行抓絨。使用的褪黑素埋植劑呈短豎棒形狀，褪黑素由緩釋硅膠囊包裹，有效含量為99%，褪黑素有效緩釋期為2 個月，由北京康泰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗羊群按羊場正常生產(chǎn)方式飼養(yǎng)管理，妊娠母羊以放牧加補飼的方式飼養(yǎng)，平均每只每天補飼玉米顆粒300 g，自由舔食鹽磚；羔羊不出牧，提供顆粒料和苜蓿干草任其自由采食，母羊歸牧后混群飼養(yǎng)，自由吮吸母乳。

1.3 樣品采集與測定

1.3.1 皮膚樣品 皮膚樣品修整后使用酒精逐級進行脫水，然后浸入二甲苯中透明，最后進行石蠟包埋。制作幼齡絨山羊皮膚毛囊橫切片，切面位置為初級毛囊皮脂腺的3 個位置（最上方、中央和最下方），手搖式冷凍切片機制作切片，切片使用Sacpic 法染色后用中性樹脂進行封片，待干燥后觀察統(tǒng)計。

1.3.2 測定指標 測定內(nèi)蒙古絨山羊羔羊初級毛囊密度、次級毛囊密度、成熟次級毛囊密度及比例、次級毛囊與初級毛囊數(shù)目比值（S:P）、成熟次級毛囊與初級毛囊數(shù)目比值（Sf:P）。計算公式：

皮膚收縮率=透明后的皮膚塊面積/活體采樣時皮膚塊面積×100%

本試驗選擇10 個樣品進行皮膚收縮率測定，本試驗中皮膚收縮率為0.65。

密度值=毛囊計數(shù)值×皮膚收縮率/視野面積

視野面積=π×1/4×（視場數(shù)/物鏡倍數(shù)）2

本試驗中顯微鏡放大倍數(shù)為10×10 倍，視場數(shù)為20，則進行毛囊計數(shù)時的視野面積為3.141 6 mm2。

成熟次級毛囊比例=成熟次級毛囊數(shù)目/次級毛囊數(shù)目

S:P=次級毛囊數(shù)目/初級毛囊數(shù)目

Sf:P=成熟次級毛囊數(shù)目/初級毛囊數(shù)目

1.3 統(tǒng)計分析 使用SAS 9.2 統(tǒng)計軟件對母羊生產(chǎn)性能和羔羊毛囊數(shù)量相關(guān)指標進行單因素方差分析，差異顯著性標準以P＜0.05 為差異顯著，以P＜0.01 為差異極顯著。使用Graphpad Prism 軟件制作埋植組和對照組毛囊數(shù)量相關(guān)指標柱狀圖。

2 結(jié)果

2.1 母羊生產(chǎn)性能的比較 如表1 所示，褪黑素埋植組母羊產(chǎn)絨量和羔羊初生重與對照組沒有顯著差異。

表1 內(nèi)蒙古絨山羊妊娠期埋植褪黑素對母羊生產(chǎn)性能的影響

2.2 羔羊1 月齡毛囊性狀分析 如圖1 所示，與對照組相比，褪黑素埋植組母羊所產(chǎn)子代絨山羊成熟次級毛囊比例升高（P＜0.05），而皮膚初級毛囊密度、次級毛囊密度、成熟次級毛囊密度、S:P、Sf:P 沒有顯著差異。

圖1 內(nèi)蒙古絨山羊妊娠期埋植褪黑素對其子代羔羊毛囊發(fā)育的影響

3 討論

3.1 內(nèi)蒙古絨山羊妊娠期埋植褪黑素對母羊產(chǎn)絨量與羔羊初生重的影響 本研究中，母羊妊娠期褪黑素埋植組與對照組的產(chǎn)絨量沒有差異，與武子元等[11]的研究結(jié)果一致。本試驗中絨山羊妊娠期埋植褪黑素對其所產(chǎn)子代羔羊的初生重也沒有影響，與國內(nèi)外許多學(xué)者的研究結(jié)果相一致。如Wuliji 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，絨山羊空懷期埋植褪黑素對羔羊的初生重沒有影響；段春輝等[13]研究也表明非長絨期（空懷期）或長絨期（妊娠期）對內(nèi)蒙古絨山羊進行褪黑素埋植對繁殖性能均沒有影響。有學(xué)者指出，影響羔羊初生重的主要原因是母羊體況[14-16]。殷雨洋等[14]研究表明，妊娠期母體營養(yǎng)不良會影響胎兒發(fā)育，進而導(dǎo)致后代初生重較低。孫銳鋒等[15]研究表明，在妊娠后期提高能量水平（120%正常水平）能夠使母羊在產(chǎn)前和產(chǎn)后保持良好膘情，從而保證胎兒的正常發(fā)育并提高初生重。He 等[16]研究表明，在母羊妊娠后期限制飼糧蛋白質(zhì)和能量水平會降低羔羊的初生重和臟器重。本試驗中絨山羊妊娠期埋植褪黑素對羔羊的初生重沒有顯著影響，說明妊娠期按照2 mg/kg BW 劑量埋植褪黑素對母體營養(yǎng)狀況沒有影響。

3.2 內(nèi)蒙古絨山羊妊娠期埋植褪黑素對其羔羊毛囊發(fā)育的影響 絨山羊皮膚初級毛囊的形態(tài)發(fā)生與成熟均在羔羊胎兒期階段完成，出生后不會出現(xiàn)新的初級毛囊的形態(tài)發(fā)生，其數(shù)量也不再發(fā)生變化；而次級毛囊發(fā)生起始于胎兒期，在羔羊4～6 月齡才發(fā)育成熟[1-3]。Lambert 等[17]研究表明，在妊娠期60～90 d 給母羊補充營養(yǎng)能夠增加羔羊出生后第1 個月的次級毛囊數(shù)量，提示妊娠前期是促進羔羊次級毛囊發(fā)育的關(guān)鍵時期。Yang 等[18]給出生羔羊埋植褪黑素發(fā)現(xiàn)，褪黑素通過提高皮膚抗氧化力、減少氧化應(yīng)激損傷，抑制次級毛囊細胞凋亡，從而顯著增加次級毛囊和成熟次級毛囊密度。本試驗中，在絨山羊妊娠期60 d 和120 d 進行2 次褪黑素埋植顯著增加子代絨山羊1 月齡成熟次級毛囊比例。其作用機制可能是在羔羊次級毛囊發(fā)生發(fā)育關(guān)鍵期（即妊娠期）埋植褪黑素，可能通過調(diào)控毛囊細胞的分化增殖以及細胞凋亡之間的平衡來促進毛囊的生長發(fā)育，有待開展進一步的研究。本試驗中褪黑素埋植對子代羔羊1 月齡次級毛囊和成熟次級毛囊密度影響不大，與Yang 等[18]的研究結(jié)果不一致，可能原因是Yang 等[18]直接給羔羊埋植褪黑素，而本試驗是給妊娠母羊埋植褪黑素，母子傳導(dǎo)效果不如直接給羔羊埋植，這可能通過加大母羊埋植劑量得以改善。綜合來看，在次級毛囊發(fā)育初期施用褪黑素對羔羊毛囊發(fā)育能夠產(chǎn)生積極影響，妊娠期母體埋植褪黑素可以促進羔羊次級毛囊發(fā)育。

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果顯示，內(nèi)蒙古絨山羊妊娠期埋植褪黑素對母羊生產(chǎn)性能沒有影響，但能增加其子代羔羊1 月齡成熟次級毛囊比例，說明妊娠期埋植褪黑素能夠促進羔羊次級毛囊發(fā)育，通過妊娠期埋植褪黑素促進羔羊毛囊發(fā)育具有一定的可行性。但仍需要繼續(xù)開展相關(guān)研究加以證實，特別是加大埋植劑量對毛囊發(fā)育的影響研究，進一步揭示褪黑素對胚胎期毛囊發(fā)生發(fā)育的影響。