陳鴻楨，劉建珍，吳寧，謝麗清

(廣州市花都區(qū)婦幼保健院，廣州 花都 510800)

0 引言

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展，對(duì)于男性生育力評(píng)估技術(shù)越開越多，但是判斷男性生育力功能時(shí)，還是首選傳統(tǒng)的精液分析[1]。精液質(zhì)量分析是臨床上對(duì)男性生育力評(píng)價(jià)的重要依據(jù)。近年來, 隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的迅猛發(fā)展, 計(jì)算機(jī)輔助精液質(zhì)量分析(CASA)技術(shù)在我國得到了廣泛普及, 逐漸取代了利用顯微鏡和牛鮑計(jì)數(shù)板進(jìn)行人工計(jì)數(shù)的傳統(tǒng)方法[2]?，F(xiàn)在計(jì)算機(jī)輔助精液分析系統(tǒng)(CASA)也逐漸成為主流。CASA是一種高度自動(dòng)或全自動(dòng)化，標(biāo)準(zhǔn)化，重復(fù)性好，數(shù)字化集中于一體的精液分析儀器。為了評(píng)估兩種CASA系統(tǒng)各項(xiàng)參數(shù)結(jié)果的可比性，我們隨機(jī)抽取135例精液標(biāo)本分別使用上海北昂和西班牙SCA系統(tǒng)進(jìn)行檢測和比較分析。現(xiàn)將結(jié)果展示出來。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

2019年6至10月，本院生殖中心患者的精液標(biāo)本135份(精子濃度>2×106/mL)，禁欲2～7天，年齡20～40歲，手淫法留取所有精液于清潔、無毒密閉容器內(nèi)，及時(shí)送檢。置37℃水浴箱中孵育30分鐘，液化后檢測。

1.2 儀器

精液分析系統(tǒng)采用上海北昂公司的V4.2-SN，檢測物鏡為20倍，以及西班牙SCA型號(hào)SCA-H-01，檢測物鏡為10倍。計(jì)數(shù)板使用安科20um深，四池的精子計(jì)數(shù)板。濃度質(zhì)控珠為美國QC-BEADs。

1.3 方法

精液液化后充分混勻。先制作濕片判斷是否要稀釋[3]。用移液槍吸取10μL樣本滴加于破片，蓋上蓋玻片。肉眼估算，如果精子濃度>50×106/mL，進(jìn)行精液與生理鹽水1∶1稀釋，如果濃度>100×106/mL，進(jìn)行精液與生理鹽水1∶2稀釋。移液槍吸取5μL樣本或稀釋后樣本加入精子計(jì)數(shù)板，待標(biāo)本充滿計(jì)數(shù)池之后，使用CASA分析儀進(jìn)行檢測。主要檢測內(nèi)容包括精子濃度、PR、NP、IM、直線性(LIN)、曲線速率(VCL)、平均路徑速率(VAP)、前向性(STR)、擺動(dòng)性(WOB)、精子頭側(cè)擺幅度(ALH)、直線速率(VSL)、鞭打頻率(BCF)。每份樣本至少計(jì)算200條精子。嚴(yán)格按照兩臺(tái)CASA操作手冊(cè)進(jìn)行檢測。

1.4 質(zhì)量控制

每天檢測樣本前，進(jìn)行CASA高低兩種濃度質(zhì)控珠的檢測。在控后方可進(jìn)行精液樣本檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 11.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。兩種系統(tǒng)相同參數(shù)間進(jìn)行相關(guān)性分析和配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

兩臺(tái)CASA的檢測結(jié)果表明，135份隨機(jī)標(biāo)本經(jīng)過兩種儀器檢測，兩臺(tái)儀器各項(xiàng)結(jié)果具有顯著性相關(guān)(P<0.05)。其精子濃度、LIN檢測結(jié)果，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而IM、NP、PR、VCL、VSL、VAP、STR、WOB、ALH、BCF結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩臺(tái)CASA各檢測項(xiàng)目結(jié)果比較(±s)

表1 兩臺(tái)CASA各檢測項(xiàng)目結(jié)果比較(±s)

分析項(xiàng)目 n V4.2-SN SCA-H-01 r 相關(guān)性P t值 P精子濃度(×106/mL) 135 60.9±47.1 61.9±57.2 0.954 <0.05 0.657 >0.05 PR(%) 135 33.2±13.9 29.2±14.8 0.917 <0.05 -7.83 <0.05 NP(%) 135 7.1±2.9 14.9±6.2 0.650 <0.05 17.34 <0.05 IM(%) 135 59.7±14.9 56.2±18.7 0.915 <0.05 -5.20 <0.05 LIN(%) 135 48.3±6.5 47.4±8.9 0.460 <0.05 -1.17 >0.05 VCL(μm/s) 135 57.0±10.8 42.8±6.5 0.747 <0.05 -22.83 <0.05 VAP(μm/s) 135 32.6±6.2 29.2±7.0 0.579 <0.05 -6.55 <0.05 STR(%) 135 81.8±5.1 68.1±6.8 0.513 <0.05 -26.26 <0.05 WOB(%) 135 56.4±6.0 65.4±6.3 0.420 <0.05 15.83 <0.05 ALH(μm) 135 2.8±0.6 1.9±0.4 0.713 <0.05 -22.60 <0.05 BCF(次/s) 135 6.7±0.9 5.9±1.1 0.397 <0.05 -8.16 <0.05 VSL(μm/s) 135 28.2±5.6 22.7±7.2 0.535 <0.05 -10.04 <0.05

3 討論

精液常規(guī)分析是評(píng)價(jià)男性生育力的一項(xiàng)最基本檢查。其分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，會(huì)影響臨床對(duì)男性患者最初判斷。隨著技術(shù)的發(fā)展，工作效率的提高，越來越多生殖中心實(shí)驗(yàn)室使用計(jì)算機(jī)輔助精子分析(CASA)分析精子活力，濃度和形態(tài)學(xué)[4]。也有些實(shí)驗(yàn)室分析精液，使用光散射原理的SQA-V[5-6]。

CASA是在顯微鏡檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上, 利用電子計(jì)算機(jī)圖形分析技術(shù), 在瞬間捕捉計(jì)數(shù)池中精子的靜態(tài)圖形, 根據(jù)精子的形態(tài)參數(shù), 分辨出精子和非精子, 計(jì)算出單位體積中的精子數(shù), 計(jì)數(shù)精子密度;并利用連續(xù)捕捉圖像的功能, 在單位時(shí)間內(nèi)連續(xù)捕捉數(shù)幀至數(shù)十幀連續(xù)的精子靜態(tài)圖像, 進(jìn)行疊加, 分析單位時(shí)間內(nèi)的精子位移關(guān)系, 模擬出精子運(yùn)動(dòng)軌跡, 根據(jù)軌跡計(jì)算出一系列運(yùn)動(dòng)參數(shù)來反映精子的運(yùn)動(dòng)能力[7]。較人工方法，其優(yōu)點(diǎn)在于高精確性和提供精子動(dòng)力學(xué)參數(shù)的量化數(shù)據(jù)。有多種牌子的CASA，其測定原理為灰度法。

影響CASA檢測因素很多，除了判別精子與非精細(xì)胞，還有儀器所用的攝像機(jī)捕抓能力，還有精液液化特性，精子計(jì)數(shù)池的深度等。其中，精子濃度、精子活動(dòng)力、精子存活率又是常規(guī)檢查項(xiàng)目中最重要的指標(biāo)。所以要求實(shí)驗(yàn)人員在操作CASA時(shí)要細(xì)心與耐心，要對(duì)捕抓圖片中的非精子去除。

通過我們的對(duì)比研究，北昂CASA和西班牙CASA對(duì)于精液檢測的主要參數(shù)，諸如精子濃度、活力、活力輔助參數(shù)具有很好的一致性(P<0.05)。兩種不同的CASA的檢測項(xiàng)目均能反映不同精液之間的差異，但是兩種儀器之間結(jié)果卻不盡相同。有學(xué)者提出，不同的CASA在設(shè)置上有所差異，是因?yàn)镃ASA灰度法在識(shí)別精子過程中，需調(diào)整灰度和閾值，用以分開精子與非精細(xì)胞[8]。本次研究所形成這種差異，可能是兩種儀器檢測所用的檢測目鏡不一樣。本研究所用目鏡倍數(shù)高，視野變小，精子運(yùn)動(dòng)軌跡變長。計(jì)算機(jī)所測的速率，頻率會(huì)有所升高。如VCL，VSL，VAP，STR，WOB，ALH，BCF。說明反映活力速率，頻率結(jié)果上，儀器所用檢測鏡頭會(huì)對(duì)結(jié)果有所影響。但是在其參數(shù)之間，存在比較一致的相關(guān)性。參數(shù)設(shè)置和評(píng)價(jià)算法等因素對(duì)兩種品牌CASA系統(tǒng)的評(píng)價(jià)結(jié)果有顯著影響。應(yīng)用CASA進(jìn)行精液分析還應(yīng)注意質(zhì)量控制[9]。

CASA對(duì)精子活力檢測，應(yīng)當(dāng)有標(biāo)準(zhǔn)的精子活動(dòng)視頻作為校準(zhǔn)，質(zhì)控。再者有相應(yīng)生物參考區(qū)間[10-11]。校準(zhǔn)視頻，可校正CASA檢測精子活力能力。其質(zhì)控可評(píng)價(jià)CASA的可控范圍，可靠程度。對(duì)于操作CASA的技術(shù)人員，也是內(nèi)部質(zhì)控的重要環(huán)節(jié)，新晉人員需要經(jīng)過培訓(xùn)，與熟練技術(shù)人員對(duì)比結(jié)果后，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義才能上崗[12]。對(duì)于不同CASA精子活力參數(shù)的室間質(zhì)評(píng)暫時(shí)還沒開展。精子活力的室間質(zhì)評(píng)，暫時(shí)只是局限于人工對(duì)精子活力視頻(PR、NP、IM)計(jì)數(shù)。對(duì)于計(jì)算機(jī)所檢測的精子輔助項(xiàng)目如速率，頻率相關(guān)項(xiàng)目質(zhì)控或?qū)Ρ?，還是比較少。

生殖實(shí)驗(yàn)室所用全自動(dòng)，半自動(dòng)精子分析儀也不盡相同。不同CASA之間所用精子計(jì)數(shù)池深度，體積也應(yīng)當(dāng)有相應(yīng)的質(zhì)控品。對(duì)于計(jì)算機(jī)輔助的項(xiàng)目，如VCL，VSL，VAP，STR，WOB，ALH，BCF，還是缺乏相關(guān)性能評(píng)價(jià)方法[13-14]。減少分析儀間活力差異，需要標(biāo)準(zhǔn)的精子活力視頻。活力輔助項(xiàng)目室間質(zhì)評(píng)是很有意義的。相信不久的將來，具有濃度，活力質(zhì)控功能的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控視頻，會(huì)配備于我們的CASA中[15]；不同牌子的CASA結(jié)果差異也逐漸縮小，男科學(xué)檢測水平也顯著提高。

總之，精液質(zhì)量分析是評(píng)價(jià)男性生育力的基本項(xiàng)目。保證CASA數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，需做好室內(nèi)質(zhì)控與室間質(zhì)評(píng)。兩種CASA比較在各主要參數(shù)具有很好的一致性，可以反映臨床患者精液情況。