◎ 秦德萍，江 生，楊乾展，黃思瑜，韓 燕，鄭 爽

（1.重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶 401121；2.島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司，重慶 400010）

大米（亦稱稻米），是我國(guó)的主糧產(chǎn)品，稻谷在種植和儲(chǔ)藏過程中不合理使用農(nóng)藥，可能造成大米中農(nóng)藥殘留量超標(biāo)，影響人體的健康。因此，快速測(cè)定大米中多種農(nóng)藥的殘留量具有重要的意義。目前，檢測(cè)大米中農(nóng)藥殘留量的主要儀器方法有氣相色譜法（GC）[1]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS和GCMS/MS）[2-3]、高效液相色譜法（HPLC）[4]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS和LC-MS/MS）[5-6]等。GC和HPLC是檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留量的常用方法，由于各農(nóng)藥的化學(xué)性質(zhì)不同和檢測(cè)器的定性定量能力有限，需配備多種檢測(cè)器，所以同時(shí)檢測(cè)多種農(nóng)藥殘留量存在一定局限性。LC-MS/MS和GC-MS/MS能將樣品溶液中多種農(nóng)藥進(jìn)行分離和離子化，檢測(cè)特定的離子碎片，該過程對(duì)目標(biāo)物凈化要求低，能有效減少基質(zhì)干擾，具有很高的選擇性、靈敏度和準(zhǔn)確度，適合同時(shí)對(duì)多種農(nóng)藥殘留量進(jìn)行定量分析。2018年6月，國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督總局聯(lián)合發(fā)布《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB 23200.113—2018），該國(guó)標(biāo)方法中大米樣品需加入酸化乙腈提取、凈化和濃縮，再用乙酸乙酯復(fù)溶后檢測(cè)，在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)操作步驟煩瑣，濃縮時(shí)間太長(zhǎng)，且甲胺磷、乙酰甲胺磷和氧樂果等易分解的農(nóng)藥在氮吹過程中氮吹溫度不能過高，不能氮吹干，否則回收率偏低。本試驗(yàn)在國(guó)標(biāo)方法的基礎(chǔ)上，簡(jiǎn)化溶劑提取過程，優(yōu)化了凈化劑的種類和配比，采用氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法，建立了QuEChERS-氣質(zhì)聯(lián)用-同位素內(nèi)標(biāo)法測(cè)定大米中208種農(nóng)藥殘留量的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

TQ8050NX三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀：日本島津公司；VF-1701毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）：美國(guó)安捷倫科技有限公司；MSA225S-100-DU天平：德國(guó)賽多利斯公司；Multifuge X1R離心機(jī)：美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

208種農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）和環(huán)氧七氯B標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）：天津阿爾塔科技有限公司；C18和PSA固相分散凈化劑：美國(guó)安捷倫科技有限公司；乙酸乙酯和乙腈為國(guó)產(chǎn)色譜純；氯化鈉和硫酸鎂為國(guó)產(chǎn)分析純；富硒米、長(zhǎng)粒香米、珍珠米：購于重慶市人和重百超市。208種農(nóng)藥名稱信息見GB 23200.113—2018。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

準(zhǔn)確移取208種農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.04 mL，用乙酸乙酯定容到2.0 mL，得到2 mg·L-1208種農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，備用。

準(zhǔn)確移取環(huán)氧七氯B標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL于25 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容，得到4 mg·L-1內(nèi)標(biāo)貯備溶液，備用。

準(zhǔn)確移取混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.01 mL、0.02 mL、0.04 mL、0.05 mL、0.075 mL和0.10 mL于1.0 mL容量瓶中，用大米的空白基質(zhì)溶液定容，加入20 μL內(nèi)標(biāo)貯備溶液，得到0.020～0.200 mg·L-1混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.2 樣品處理

大米樣品采用四分法均勻取樣，粉碎后備用。稱取大米粉5.0 g于50 mL塑料離心管中，加入10 mL水渦旋后放置20 min，加8 mL乙酸乙酯+6 g無水硫酸鎂+2 g氯化鈉+1顆陶瓷均質(zhì)子，渦旋0.5 min后放入冰浴中降溫2 min，振蕩10 min，5 000 r·min-1離心4 min，吸取上清液2.0 mL于10 mL離心管（裝有150 mg無水硫酸+100 mg C18），加入40 μL內(nèi)標(biāo)貯備溶液，振蕩0.5 min，靜置5 min，上清液過0.22 μm濾膜，上機(jī)檢測(cè)。

空白試驗(yàn)：除不加大米試樣，其余步驟與上述方法一樣。

1.2.3 結(jié)果計(jì)算

內(nèi)標(biāo)法定量，按下式進(jìn)行計(jì)算：

式中：X為樣品中農(nóng)藥殘留量，mg·kg-1；A為樣液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，mg·L-1；a為空白試驗(yàn)農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，mg·L-1；V為樣品的定容體積，mL；m為樣品的稱量質(zhì)量，g。

1.3 儀器條件

進(jìn)樣口溫度為280 ℃，離子源溫度為280 ℃，傳輸線溫度為280 ℃，電子轟擊源：70 eV。色譜柱程序升溫步驟：初始溫度為40 ℃保持1 min，40 ℃·min-1升溫至120 ℃，5 ℃·min-1升溫至240 ℃保持10 min，12 ℃·min-1升溫至300 ℃保持6 min。不分流進(jìn)樣，載氣（氦氣）流速為1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量為1.0 μL，溶劑延遲：6 min。檢測(cè)208種農(nóng)藥的離子質(zhì)譜條件參照GB 23200.113—2018。

2 結(jié)果與分析

2.1 QuEChERS方法的優(yōu)化

2.1.1 提取溫度的優(yōu)化

按照國(guó)標(biāo)GB 23200.113—2018，大米樣品加入10 mL水浸潤(rùn)、15 mL乙腈-醋酸溶液、6 g無水硫酸鎂后，無水硫酸鎂吸水會(huì)瞬間釋放大量的熱，導(dǎo)致樣品溶液溫度升高。該過程會(huì)導(dǎo)致熱不穩(wěn)定的農(nóng)殘分解，比如導(dǎo)致聯(lián)苯、敵敵畏等回收率偏低。在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)加入無水硫酸鎂后，若不及時(shí)混勻樣品溶液，無水硫酸鎂會(huì)吸水結(jié)塊，影響吸水效果。本試驗(yàn)中，在樣品溶液中加入無水硫酸鎂并渦旋0.5 min后，迅速將樣品溶液放入冰浴中，可降低樣品溶液的溫度。

2.1.2 提取溶劑的選擇

按食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)糧谷類樣品進(jìn)行農(nóng)藥殘留量的分析時(shí)，作為提取農(nóng)藥的有機(jī)溶劑有石油醚、丙酮、乙酸乙酯、乙腈等。本試驗(yàn)考慮石油醚和丙酮揮發(fā)性較強(qiáng)，乙腈在氣相中熱膨脹系數(shù)大（不能直接進(jìn)樣），且甲胺磷、乙酰甲胺磷和氧樂果氮吹溫度不能太高，氮吹不要吹干等條件，選擇的提取溶劑為乙酸乙酯，樣品溶液不需氮吹后即可上機(jī)檢測(cè)。

2.1.3 凈化條件的優(yōu)化

在陰性大米樣品中加入0.10 mg·kg-1濃度水平的208種混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，放置過夜，作為含有208種混合農(nóng)藥的陽性大米樣品，用此探索凈化條件。根據(jù)大米中含有色素較少的特點(diǎn)，本試驗(yàn)選擇的凈化劑有C18、PSA。試驗(yàn)分別對(duì)A組（150 mg MgSO4+0 mg C18+0 mg PSA）、B組（150 mg MgSO4+0 mg C18+100 mg PSA）、C組（150 mg MgSO4+100 mg C18+0 mg PSA）、D組（150 mg MgSO4+100 mg C18+100 mg PSA）做對(duì)比試驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)3次，考察不同凈化條件對(duì)農(nóng)藥回收率的影響，結(jié)果見表1。

表1 不同凈化劑對(duì)208種農(nóng)藥回收率的影響表

A組 農(nóng) 藥 回 收 率 為46.8%～124.0%，B組 農(nóng)藥回收率為2.9%～119.4%，C組農(nóng)藥回收率為61.3%～119.7%，D組農(nóng)藥回收率為3.5%～118.8%。按照《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）[7]，即208種農(nóng)殘項(xiàng)目的回收率在60%～120%為符合要求，C組滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范。在乙酸乙酯溶液中，PSA對(duì)滅菌磷、乙酰甲胺磷、安硫磷、甲胺磷和氧樂果有不同程度的吸附性，導(dǎo)致其回收率偏低。本試驗(yàn)選擇150 mg MgSO4+100 mg C18為凈化材料。

2.2 方法的線性范圍、定量限、精密度和準(zhǔn)確度

在優(yōu)化后的試驗(yàn)條件下，配制一系列含208種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度為0.02 mg·L-1、0.04 mg·L-1、0.08 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.15 mg·L-1和0.20 mg·L-1），以定量離子峰面積對(duì)質(zhì)量濃度做線性回歸方程。結(jié)果表明，各農(nóng)藥在該質(zhì)量濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，加標(biāo)回收率為61.3%～119.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～8.7%。本試驗(yàn)方法中各農(nóng)藥的定量限（S/N=10）為0.01～0.02 mg·kg-1，與GB 23200.113—2018的定量限一致。

2.3 樣品分析

對(duì)購買的3種大米按選定的試驗(yàn)方法和GB 23200.113—2018進(jìn)行前處理和檢測(cè)，分別做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，比較2種方法的檢測(cè)結(jié)果。2種方法均未檢出農(nóng)藥。本試驗(yàn)方法中208種農(nóng)藥的回收率均大于60%；GB 23200.113—2008中硫草敵、聯(lián)苯、敵敵畏、敵草腈土菌靈、氟蟲腈、蟲螨畏、氯苯甲醚、禾草敵、四氯硝基苯、環(huán)草敵和六氯苯回收率均低于50%，其余農(nóng)藥回收率為60.5%～119.8%。結(jié)果表明，本試驗(yàn)方法可行，能夠完全提取大米中農(nóng)藥。相比于國(guó)標(biāo)方法，本方法提取劑用量少，成本低，樣品提取液不需濃縮即可上機(jī)檢測(cè)，避免了熱不穩(wěn)定的農(nóng)藥分解，前處理過程簡(jiǎn)便，適用于大批量大米樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)通過優(yōu)化QuEChERS方法，建立了QuEChERS-氣質(zhì)聯(lián)用-同位素內(nèi)標(biāo)法測(cè)定大米中208種農(nóng)藥殘留量的方法。本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠、實(shí)驗(yàn)成本低，適用于大批量大米樣品中多種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。