張 政，鄧月婷，△，盧 英，仲萬春，賈繼禧，王小芳，張 智

1 甘肅省中藥固體分散制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅 蘭州730102；2 甘肅隴神戎發(fā)藥業(yè)股份有限公司

藤茶保肝片是以藤茶、茯苓、綠豆、高良姜為原料加工制成的對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助治療功能的保健食品。藤茶為顯齒蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata）的嫩葉，藤茶的使用已有三千多年的歷史。我國最早在《詩經(jīng)》中稱之為古剎鉤藤，唐朝陸羽在《茶經(jīng)》里將其歸為藤茶，于是藤茶的命名沿用至今。其藥性味甘淡、功效清熱解毒，主治黃疸型肝炎、風(fēng)熱感冒、咽喉腫痛等。顯齒蛇葡萄葉在2013 年被中華人民共和國衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新食品原料?，F(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明藤茶有保肝護(hù)肝作用［1-3］。藤茶中水溶性糖含量約為10%；氨基酸含量約為5%；多酚類化合物含量約為20%；黃酮類化合物含量在40% 左右，其中二氫楊梅樹皮素含量可達(dá)38.5%［4-5］；二氫楊梅素對(duì)四氯化碳致大鼠肝纖維化有明顯保護(hù)作用［6］，并且具有預(yù)防和治療酒精性肝損傷的功效［7］，以及防醉、解酒作用［8-10］；茯苓是藥食兩用的藥材，茯苓的化學(xué)成分主要為多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等；茯苓多糖具有抗腫瘤、保肝、利尿、抗衰老、抗炎、降血脂、增強(qiáng)免疫、催眠等作用；茯苓三萜具有抗腫瘤、保肝、抗衰老、增強(qiáng)免疫等作用［11］；綠豆的成分主要有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、粗纖維、鈣、磷、鐵、胡蘿卜素、維生素等，具有清熱解毒，消暑除煩，止渴健胃，利水消腫等作用，還具有降血脂、降膽固醇、抗過敏、抗菌、抗腫瘤、增強(qiáng)食欲、保肝護(hù)腎等藥理作用［12-13］；高良姜主要含黃酮類、揮發(fā)油和二芳基庚烷類化合物，高良姜有較強(qiáng)的抗?jié)?、抗腹瀉、利膽、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗缺氧、抗凝、抗血栓等作用［14-17］。本產(chǎn)品配方中藤茶清胃熱、利酒濕，為君藥。茯苓、綠豆淡滲利濕，使酒濕之邪從小便出，茯苓健脾，同時(shí)促進(jìn)脾胃運(yùn)化，綠豆甘涼壓熱，可解酒毒，故為臣藥；高良姜性辛熱，少用起到反佐功效，同時(shí)起止嘔作用，故為佐藥。全方配伍，清熱利濕，滲濕健脾，解毒止嘔，共奏解酒保肝之效。同時(shí)，中藥片劑是一種常見劑型，便于儲(chǔ)存、運(yùn)輸、攜帶和服用。本研究以藤茶、茯苓、綠豆、高良姜為原料，制成對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助治療作用的保健食品。

1 材料

1.1 藥物與試劑藤茶（貴州江口梵凈山云峰野生植物開發(fā)有限公司）；茯苓、高良姜（亳州發(fā)揚(yáng)中藥材有限責(zé)任公司）；玉米淀粉（西安國維淀粉有限責(zé)任公司）；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉（安徽山河藥用輔料股份有限公司）；花旗松素對(duì)照品（中國食品檢定研究院，批號(hào)：111816-201102）；無水乙醇（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）。

1.2 儀器與設(shè)備MS205DU型電子天平（METTLER TOLRDO）；JA2603B 型電子天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司）；TU-1901 型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；HWS26 型恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；DGG-9240B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；DNT-03-00 型多功能提取濃縮機(jī)組（浙江溫兄機(jī)械閥業(yè)有限公司）；FBWS3 型實(shí)驗(yàn)室多功能沸騰制粒機(jī)（浙江迦南科技股份有限公司）；ZP35B型旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)（上海天祺藥機(jī)械有限公司）；YPD-3000 型片劑硬度儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；ZB-1E 型智能崩解儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；FT-2000AE 型脆碎度檢查儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 提取工藝 將藤茶與茯苓、綠豆、高良姜分別采用正交水提方法優(yōu)選提取工藝參數(shù)。

1.3.1.1 藤茶提取工藝 采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)提取時(shí)間、提取次數(shù)及料液比三因素進(jìn)行考察，各取3個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以出膏得率、二氫黃酮（以二氫槲皮素計(jì)）含量為指標(biāo)進(jìn)行工藝優(yōu)選。L9（34）正交表見表1。

表1 藤茶提取因素水平

1.3.1.2 茯苓、高良姜、綠豆提取工藝 采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)提取時(shí)間、料液比和提取次數(shù)三因素進(jìn)行考察，各取3 個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn)，以出膏得率為指標(biāo)進(jìn)行工藝優(yōu)選，L9（34）正交表見表2。

表2 茯苓、高良姜、綠豆提取因素水平

1.3.2 藤茶片制備工藝

1.3.2.1 制粒 將兩種提取液混合后濃縮干燥并粉碎成細(xì)粉。采用沸騰制粒機(jī)將浸膏粉與不同輔料制粒：進(jìn)風(fēng)溫度70～90℃，物料溫度40～60℃，進(jìn)風(fēng)風(fēng)量60～100 m3/h，黏合劑流速5～10 r/min，霧化壓力0.15 Mpa，以顆粒合格率、休止角、堆密度為考察指標(biāo)，確定填充劑。見表3。

表3 浸膏粉與不同輔料配比

1.3.2.2 黏合劑的確定 將浸膏粉∶填充劑∶崩解劑按1∶0.2∶0.025 充分混勻，選擇不同黏合劑，采用沸騰制粒機(jī)制粒后壓片，以硬度、脆碎度、崩解時(shí)限為指標(biāo)，確定合適的黏合劑。

1.3.3 壓片 按優(yōu)選工藝，以淀粉為填充劑，交聯(lián)羧甲基纖維素納為崩解劑，4% 淀粉漿為黏合劑，硬脂酸鎂為潤滑劑，按浸膏粉∶填充劑∶崩解劑=1∶0.2∶0.025 的比例充分混勻，用一步制粒機(jī)制粒后壓片。

1.3.4 出膏得率測定 將提取液過濾并定容至500 mL，從中精密量取10 mL 提取液至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴濃縮至干，然后放入烘箱中于105℃干燥至恒重后稱重。

出膏得率（%）=干膏重/藥材重量×100%

1.3.5 二氫黃酮含量測定［16］

1.3.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取花旗松素（二氫槲皮素）對(duì)照品10.17 mg，置50 mL 容量瓶中，加70%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得二氫槲皮素對(duì)照品溶液。精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL 二氫槲皮素對(duì)照品溶液，分別置25 mL具塞比色管中，各加70%乙醇稀釋至2 mL，加pH 6.6 的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液4 mL，混勻，再加2%四氫硼鈉甲醇溶液3 mL，搖勻，放置20 min，再加濃鹽酸3 mL，在50℃水浴上加熱15 min，取出后放冷，加70% 乙醇至刻度，搖勻，放置30 min，以相應(yīng)試劑作為空白，于紫外可見分光光度計(jì)290 nm 的波長處測定吸光度，以吸收度（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)線性回歸，得回歸方程：Y=0.0618X-0.0036（R2=0.9994），二氫槲皮素在1.609～11.265 μg/mL 范圍內(nèi)與吸光度成良好的線性關(guān)系。

1.3.5.2 樣品處理 將正交試驗(yàn)提取的樣品搖勻后，分別取1 mL置25 mL容量瓶中，加水定容，搖勻?yàn)楣┰嚻啡芤海郎y。

1.3.5.3 樣品測定 精密量取供試品溶液1 mL，置25 mL 具塞比色管中，用70% 乙醇稀釋至2 mL，加pH 6.6 的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液4 mL，混勻，再加2% 四氫硼鈉甲醇溶液3 mL，搖勻，放置20 min，再加濃鹽酸3 mL，在50℃水浴上加熱15 min，取出后放冷，加70 %乙醇至刻度，搖勻，放置30 min，同時(shí)精密量取1 mL 70% 乙醇溶液，同上操作，作為空白。紫外可見分光光度計(jì)290 nm波長處測定吸光度，根據(jù)公式計(jì)算樣品中二氫黃酮含量。

式中：X為樣品中二氫黃酮含量（g/100g）；C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得被測液中二氫黃酮濃度（μg/mL）；M為樣品質(zhì)量（g）。

1.3.6 顆粒合格率測定 顆粒合格率是制粒、干燥、整粒后所得的合格顆粒比率：

顆粒成型率（%）=所得合格顆粒重量/所用藥粉與輔料重量×100%

1.3.7 顆粒休止角測定 采用固定漏斗法：將3只漏斗串聯(lián)并固定于水平放置的坐標(biāo)紙上約3 cm高度處，將制得的顆粒沿漏斗倒入第一只漏斗中，直到最下面漏斗形成的藥粉圓錐體尖端接觸到漏斗口為止，這時(shí)顆粒形成一圓錐體堆，通過坐標(biāo)紙測出圓錐底部的半徑R，并測定其堆高H，根據(jù)tgα=H/R，計(jì)算得顆粒休止角α。

1.3.8 顆粒壓縮松密度及振實(shí)密度測定

1.3.8.1 松密度測定 精密稱取約30 g 顆粒通過短頸漏斗，緩慢沿漏斗壁倒入100 mL量筒中，使量筒中粉末表面鋪平，不得振蕩，讀出其體積（V1），松密度=m/V1。

1.3.8.2 振實(shí)密度測定 將上述裝有顆粒的量筒，由2 cm 高度自墜落臺(tái)面上，反復(fù)操作100 次，量體積V0，繼續(xù)上述操作30 次，量體積V2，當(dāng)V0與V2相差小于2 mL 時(shí)，記錄振實(shí)后的體積（V2），則振實(shí)密度=m/V2。

顆粒壓縮度=（振實(shí)密度-松密度）/振實(shí)密度×100%

1.3.9 硬度測定 根據(jù)《中華人民共和國藥典（2015 年版）》中的標(biāo)準(zhǔn)。取樣品20 片，每片放入硬度儀中分別測量其硬度，計(jì)算平均值。

1.3.10 脆碎度測定 根據(jù)《中華人民共和國藥典（2015 年版）》標(biāo)準(zhǔn)。取樣品若干片，使其總重約為6.5 g，用吹風(fēng)機(jī)吹去片劑脫落的粉末，精密稱重，置圓筒中，轉(zhuǎn)動(dòng)100 次，取出吹去的粉末，精密稱重，計(jì)算減失重量與樣品原重量的比值。

1.3.11 崩解時(shí)限測定 根據(jù)《中華人民共和國藥典（2015 年版）》標(biāo)準(zhǔn)，取藤茶保肝片劑6 片，將其分別置于潔凈吊籃玻璃管中，每管各放1 片。將裝有供試品的吊籃浸入溫度為（37±1）℃的水中，啟動(dòng)崩解儀進(jìn)行檢查，直至樣品完全崩解。記錄每片樣品崩解時(shí)間，計(jì)算平均值。

1.3.12 重量差異 取供試品20 片，精密稱定總重量，求得平均片重后，再分別精密稱定每片的重量，每片重量與平均片重進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

2.1 藤茶提取結(jié)果從出膏得率結(jié)果分析，各因素條件影響大小依次為提取次數(shù)＞提取時(shí)間＞料液比，從二氫黃酮含量結(jié)果分析各因素條件影響大小依次為提取次數(shù)＞料液比＞提取時(shí)間。A因素出膏得率和二氫黃酮含量各水平之間比較差異較小，為提高提取效率，節(jié)約生產(chǎn)成本，確定A因素試驗(yàn)水平為A1；B因素中出膏得率和二氫黃酮含量各水平比較差異較小，因此確定B因素試驗(yàn)水平為B1；C因素的出膏得率和二氫黃酮含量均為K3值最大，并且C因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，因此確定試驗(yàn)水平為C3。最后確定藤茶最終提取工藝為A1B1C3，即提取時(shí)間為0.5 h，料液比為1∶8，提取次數(shù)為3次。見表4—5。

表4 藤茶提取正交試驗(yàn)結(jié)果

2.2 茯苓、高良姜、綠豆提取結(jié)果最佳提取條件為A3B3C3，A 因素和B 因素對(duì)本試驗(yàn)結(jié)果影響不顯著，但K1與K2之間差異較大，而K2與K3之間的差異不大；從生產(chǎn)周期、生產(chǎn)成本等多個(gè)實(shí)際因素綜合考慮，確定提取時(shí)間和料液比的試驗(yàn)水平為A2、B2；C因素對(duì)出膏得率的K3值最大；提示C因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，因此確定試驗(yàn)水平為C3。最后確定3 味藥材的最終提取工藝為A2B2C3，即提取時(shí)間1.0 h，料液比1∶6，提取次數(shù)3次。見表6—7。

表6 茯苓、高良姜、綠豆提取正交試驗(yàn)結(jié)果

2.3 制粒、壓片成型試驗(yàn)顆粒指標(biāo)測定結(jié)果，見表8。

表8 顆粒指標(biāo)測定結(jié)果

表5 藤茶提取方差分析

表7 茯苓、高良姜、綠豆提取方差分析

從以上結(jié)果可以看出，用淀粉為輔料成型率較高，休止角最小，顆粒流動(dòng)性最好，壓縮度高，說明壓片時(shí)的填充量大。綜合可行性、成本考慮最終選擇淀粉作為填充劑。

4% 淀粉漿為黏合劑的硬度、脆碎度雖不如其他黏合劑好，但在合格范圍內(nèi)，因其崩解時(shí)間短，故選擇4%淀粉漿為黏合劑。見表9。

表9 不同黏合劑對(duì)素片硬度、脆碎度、崩解時(shí)限的影響

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)按照正交試驗(yàn)優(yōu)選工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果基本一致，證明優(yōu)選工藝合理、可行。所制得顆粒外形圓整，流動(dòng)性好，大小均勻，松實(shí)適宜，壓片后，素片表面光滑，色澤均勻一致，硬度好，平均脆碎度0.532%，符合產(chǎn)品技術(shù)要求，成型工藝可行。見表10。

表10 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

將4 味藥材一起提取，發(fā)現(xiàn)過濾過程中隨溫度降低部分物質(zhì)析出，檢測提取液中二氫黃酮含量較文獻(xiàn)報(bào)道低，查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，藤茶中主要黃酮類化合物為二氫楊梅素，其含量在幼葉中達(dá)40%［17］，二氫楊梅素在23℃水中溶解度為0.1876 g/100 mL，100℃中的溶解度為1.5050 g/100 mL［18］。提取時(shí)可利用二氫楊梅素在不同溫度水中溶解度的差異，將藤茶與茯苓、綠豆、高良姜分開提取，解決了提取液中二氫黃酮含量低的問題。

保健食品一般為口服制劑，常見的如口服液、膠囊、顆粒、片、軟膠囊、顆粒、粉等［19］。本產(chǎn)品初期設(shè)計(jì)劑型為咀嚼片，因藤茶有特殊苦味，添加不同矯味劑后口味仍較差，后選擇口服素片，其優(yōu)點(diǎn)如下：1）片劑攜帶、服用、運(yùn)輸和貯存方便；2）劑量準(zhǔn)確，片劑內(nèi)藥物含量差異較??；3）質(zhì)量穩(wěn)定，片劑為干燥固體，光線、空氣、水分等對(duì)其影響較??；4）機(jī)械化生產(chǎn)產(chǎn)量大，成本低，易達(dá)到衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

本研究通過正交設(shè)計(jì)優(yōu)化試驗(yàn)得到藤茶保肝片的最優(yōu)提取工藝，通過單因素試驗(yàn)確定了成型工藝配方，在該工藝下進(jìn)行中試生產(chǎn)的藤茶保肝片各項(xiàng)指標(biāo)均符合產(chǎn)品技術(shù)要求。后續(xù)將中試產(chǎn)品送至有資質(zhì)的檢測單位進(jìn)行安全性和保健功能評(píng)價(jià)，取得報(bào)告后向國家市場監(jiān)督管理總局進(jìn)行申報(bào)。