李 紅,敬海明,林長纓,郭 婧,張 勐,張 超,高 珊,余儒洋

(1.北京市疾病預(yù)防控制中心/北京市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究中心,北京100013;2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,北京100083)

血糖是指血液中葡萄糖（glucose）。血糖含量異常升高可引發(fā)糖尿病（diabetes mellitus，DM）。DM是以高血糖為特征的代謝性疾病，糖尿病腎病、糖尿病足和眼部疾病等一系列并發(fā)癥嚴(yán)重危害人類健康。關(guān)于影響大鼠血糖異常的相關(guān)因素［1-6］、血糖異常的中藥治療［7-8］等已有較多研究報告。作為臨床診斷依據(jù)的血糖水平，實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的質(zhì)量非常重要。

對樣品檢測實(shí)施嚴(yán)格的全面質(zhì)量控制，包括樣品分析前、分析中和分析后3個階段。樣品送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)入分析中的這個階段，檢測系統(tǒng)涉及儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和分析人員等，探討分析中使用的檢測儀器、試劑對大鼠血清葡萄糖測定的影響，以及比較收到送檢血樣即刻檢測與不同條件放置再檢測之間的差異，對于保證樣品檢測過程的質(zhì)量具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

7600-日立全自動生化分析儀、7170-日立全自動生化分析儀均購自日本日立高新技術(shù)有限公司。

1.2 試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控系統(tǒng)

葡萄糖氧化酶法血糖測定試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控血清均購自中生北控生物科技股份有限公司，己糖激酶法血糖測定試劑、復(fù)合校準(zhǔn)品和質(zhì)控血清購自日本和光純藥工業(yè)株式會社。

1.3 大鼠血樣

本中心生化分析實(shí)驗(yàn)室收到送檢清潔級Wistar大鼠血清樣品，均由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供［SCXK-（軍）2012-0004、SYXK（京）2013-0033］，分別包括比較兩臺生化分析儀測定的71只大鼠（體質(zhì)量為160～200 g）血樣，比較兩種方法所用試劑測定的90只大鼠（體質(zhì)量為200～250 g）血樣，以及比較不同保存條件下測定的140只大鼠（體質(zhì)量為408～799 g）血樣。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

在7600-P模塊-日立生化分析儀和7170-日立全自動生化分析儀上使用己糖激酶法試劑同時檢測71只大鼠血清葡萄糖水平。在7600-P模塊-日立生化分析儀上分別用葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法試劑檢測90只大鼠血清葡萄糖水平。

將另外140只大鼠血樣編號，每個血樣分裝5個凍存管并立刻加蓋，凍存管放入凍存盒保存，在7600-P模塊-日立生化分析儀上使用己糖激酶法試劑分別即刻檢測，以及4℃冷藏保存4 h、24 h后，－20℃與－80℃冷凍保存1個月后檢測血清葡萄糖水平。具體操作按照試劑盒及儀器使用說明進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計處理。組間比較采用配對t檢驗(yàn)，以P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清葡萄糖水平檢測結(jié)果

71只大鼠血清使用兩臺生化分析儀檢測的葡萄糖水平差值為0.03 mmol/L。采用己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法試劑檢測90只大鼠血清中葡萄糖水平，結(jié)果顯示前者比后者低0.35 mmol/L。4℃冷藏分別保存4 h、24 h后的檢測結(jié)果與即刻檢測140只大鼠血清中葡萄糖結(jié)果一致，－20℃和－80℃分別冷凍1個月后測定結(jié)果降低。具體檢測結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。

2.2 檢測結(jié)果的相關(guān)性分析

兩臺生化分析儀、即刻檢測與4℃冷藏分別保存4 h和24 h檢測結(jié)果的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。兩種方法的試劑、即刻檢測與－20℃和－80℃分別冷凍1個月檢測的結(jié)果差異明顯（P＜0.05）。比對各結(jié)果的相關(guān)性均良好，具體的統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)見表2。

表1不同方法檢測大鼠血清葡萄糖含量Table 1 The serum glucose content in rats detected by different mothods

表2大鼠血清葡萄糖檢測結(jié)果的相關(guān)性Table 2 Relationship of detected results for serum glucose content in rats between different mothods

3 討論

依據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）文件EP9-A2中的要求，使用兩臺儀器檢測時，結(jié)果差異應(yīng)無統(tǒng)計學(xué)意義，且有良好的相關(guān)性［r≥0.975，或r2≥0.95）］［9］。血糖測定有全自動、半自動儀器和快速血糖儀等多種檢測方式，不同儀器生產(chǎn)廠家、不同檢測速度的儀器等都會造成檢測結(jié)果的差異［10-11］。比色杯材質(zhì)為石英玻璃或塑料，水浴是循環(huán)恒溫水浴或恒溫液控制，進(jìn)樣方式為軌道式或圓盤式，反應(yīng)時間為固定或可選擇模式，試劑加入可添加2種或者4種等，均可影響檢測結(jié)果［12］。設(shè)計生產(chǎn)的差別可造成儀器精密度和準(zhǔn)確度的差異，檢測系統(tǒng)涉及的儀器設(shè)備是分析中實(shí)驗(yàn)室檢測的基礎(chǔ)，做好儀器設(shè)備日常維護(hù)保養(yǎng)是檢測工作質(zhì)量的另一保證。

已有文獻(xiàn)報告，不同的血糖檢測方法其結(jié)果有差異性［13］。本研究中兩種試劑測定結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但兩個結(jié)果相關(guān)性良好。另外，血清即刻測定與4℃冷藏保存4 h、24 h測定結(jié)果的差別無統(tǒng)計學(xué)意義，且相關(guān)性良好；與－20℃和－80℃冷凍保存1個月測定結(jié)果差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，但相關(guān)性良好。實(shí)驗(yàn)室收到血樣后離心分離血清，盡量及時檢測，不能及時檢測的樣品應(yīng)加蓋密封保存并在24 h內(nèi)進(jìn)行檢測。國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心各實(shí)驗(yàn)室之間質(zhì)量評價葡萄糖水平的可接受范圍為±0.33 mmol/L或±10%［14］。實(shí)驗(yàn)室條件不同，有些檢測結(jié)果的差異雖然沒有臨床意義，但是動物實(shí)驗(yàn)比對應(yīng)盡量保持一致性。因此，需要嚴(yán)格控制檢測過程分析中的每個環(huán)節(jié)，保證動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。