陳 丹，許 莉，秦 飛，祝珊珊，羅聯(lián)忠*

(1.廈門(mén)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，福建 廈門(mén) 361023；2.廈門(mén)醫(yī)學(xué)院 廈門(mén)市海洋藥用天然產(chǎn)物資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門(mén) 361023；3.廈門(mén)醫(yī)學(xué)院 海洋生物醫(yī)藥資源福建省高校工程研究中心，福建 廈門(mén) 361023)

阿爾茲海默癥(AD)是一種多因素的復(fù)雜疾病，其具體發(fā)生機(jī)制尚不明確，目前針對(duì)AD的治療措施很有可能是基于錯(cuò)誤的病理學(xué)機(jī)制。在早期，基于膽堿能假說(shuō)開(kāi)發(fā)了幾種以乙酰膽堿酯酶(AChE)為靶點(diǎn)的化合物來(lái)提高腦中乙酰膽堿(ACh)水平，如他克林[1]、多奈培齊[2]、利伐替明[3]、加蘭他敏[4]等，但這些藥物只能緩解疾病癥狀，之后開(kāi)發(fā)的谷氨酸鹽保護(hù)劑美金剛[5]也只能單純緩解疾病癥狀。從上市藥物的作用機(jī)制來(lái)看，它們只與乙酰膽堿酯酶的中心催化位點(diǎn)相互作用。加利福尼亞電鰩乙酰膽堿酯酶(TcAChE)的晶體結(jié)構(gòu)顯示其活性位點(diǎn)位于一個(gè)又深又窄的峽谷(20 ?)底部，該峽谷被稱(chēng)為“活性位點(diǎn)峽谷”或“芳香峽谷”[6]。在活性位點(diǎn)，催化三聯(lián)體負(fù)責(zé)水解乙酰膽堿中的酯鍵；保守殘基Trp279是第二結(jié)合位點(diǎn)的主要組成部分，被稱(chēng)為外周“陰離子”位點(diǎn)(PAS)，由Tyr70、Asp72、Tyr121、Trp279和Tyr334氨基酸殘基組成，距離峽谷頂部附近的活性位點(diǎn)14 ?[7]。大量研究證明，乙酰膽堿酯酶是β-淀粉樣蛋白(amyloid β-protein，Aβ)[8]聚集積累過(guò)程中最重要的分子伴侶，它可以加速β-淀粉樣蛋白的聚集，誘導(dǎo)β-淀粉樣蛋白的積累，并與之結(jié)合形成穩(wěn)定復(fù)合物，從而增強(qiáng)其神經(jīng)毒性。也有研究表明，暴露在乙酰膽堿酯酶表面的關(guān)鍵殘基Trp279導(dǎo)致β-淀粉樣蛋白聚集[9]。還有研究證實(shí)了多靶點(diǎn)配體(MTDL)在癡呆動(dòng)物模型中的有效性[10-12]，為AD治療提供了新的方向。

近年來(lái)，有許多抗AD藥物以及對(duì)AD具有潛在治療效果的藥物，在經(jīng)過(guò)臨床試驗(yàn)后因種種原因先后被放棄，如在Ⅲ期臨床試驗(yàn)中失敗的γ-分泌酶抑制劑Semagacestat(LY450139)[13]、γ-分泌酶抑制劑(R)-氟比洛芬、不可逆性膽堿酯酶抑制劑甲硝唑、膽堿酯酶和NMDA受體拮抗劑拉地吡啶等。越來(lái)越多的研究人員認(rèn)為，AD是由多病原引起的疾病，因此尋找多靶點(diǎn)藥物成為新的研究趨勢(shì)[6]。常見(jiàn)的靶點(diǎn)有乙酰膽堿酯酶、β-淀粉樣蛋白、Tau蛋白等。因此，發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)有效的同時(shí)與中心催化位點(diǎn)和外周活性位點(diǎn)相互作用的多靶點(diǎn)抗AD藥物是目前研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 基于先導(dǎo)化合物的虛擬篩選

傳統(tǒng)中草藥駱駝?shì)?PeganumnigrllastrumBunge)是蒺藜科駱駝蓬屬植物，其全株可入藥，有清熱、消炎、祛濕、殺蟲(chóng)的作用。駱駝?shì)锏闹θ~和種子含有多種生物堿，可治療風(fēng)濕痹痛、無(wú)名腫毒。現(xiàn)代藥理研究證明，駱駝?shì)锷飰A具有降血糖[14]和抗癌作用[15]。從駱駝?shì)锏募状继崛∥镏蟹蛛x到多種生物堿，包括脫氧鴨嘴花堿酮，其體外生物實(shí)驗(yàn)顯示其對(duì)乙酰膽堿酯酶有輕微的抑制作用[16]。因此，作者以脫氧鴨嘴花堿酮(圖1)為先導(dǎo)化合物，設(shè)計(jì)并合成脫氧鴨嘴花堿酮衍生物，通過(guò)測(cè)定其半數(shù)最大抑制濃度(IC50)來(lái)評(píng)價(jià)其體外抑制活性。

利用MOE研究脫氧鴨嘴花堿酮與乙酰膽堿酯酶的結(jié)合模式，篩選設(shè)計(jì)了一系列不同取代基的脫氧鴨嘴花堿酮衍生物Ⅰ1～Ⅰ4、Ⅱ1～Ⅱ4(圖2)。衍生物的ASE評(píng)分(MOE中可靠的評(píng)分函數(shù))越低，相互作用力越強(qiáng)；IC50值越低，抑制作用越強(qiáng)。

圖2 虛擬篩選的脫氧鴨嘴花堿酮衍生物的結(jié)構(gòu)式

1.1.1 酶蛋白的處理

由于人乙酰膽堿酯酶(hAChE)與TcAChE具有高度的序列同一性，所以選擇從Protein Data Bank20中獲得的TcAChE與加蘭他敏衍生物(1W6R)的復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)作為受體蛋白分子對(duì)接的側(cè)鏈開(kāi)口構(gòu)象，從蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)下載的蛋白質(zhì)PDB編號(hào)為1QTI[17]。

具體操作步驟及參數(shù)設(shè)置如下：除去復(fù)合物中的配體和水分子，添加氫原子(All)、AMBER7 FF99電荷；活性口袋定義為與加蘭他敏中任一原子的距離在1.0 nm范圍內(nèi)的所有氨基酸殘基；用MOL2格式輸出用于Gold計(jì)算。

1.1.2 配體小分子的處理

首先構(gòu)建目標(biāo)小分子，修正配體分子中原子和鍵的類(lèi)型，添加氫原子，并對(duì)小分子配體進(jìn)行能量?jī)?yōu)化，添加氫原子和Gasteiger-Marsili[18]電荷。然后運(yùn)用Tripos[19]力場(chǎng)對(duì)小分子進(jìn)行1 000步的分子力學(xué)優(yōu)化，迭代算法為Powell，迭代終止條件為能量梯度0.005 kca1·mo1-1·A-1，非鍵相互作用截?cái)嘀禐?0.0，介電常數(shù)為78.0，以MOL2格式保存。

1.1.3 分子對(duì)接的參數(shù)設(shè)置

將得到對(duì)接口袋片段的蛋白質(zhì)作為分子對(duì)接的靶標(biāo)，將以TcAChE復(fù)合物中的小分子配體為中心、10 ?半徑空間內(nèi)的所有氨基酸殘基片段定義為活性口袋。對(duì)接采用默認(rèn)的GA設(shè)置，設(shè)置配體柔性的選項(xiàng)，限制原子和鍵的浮動(dòng)，每個(gè)配體分子對(duì)接500個(gè)循環(huán)。

1.2 脫氧鴨嘴花堿酮衍生物的合成

1.2.1 試劑與儀器

鄰苯二甲酰亞胺、氫氧化鈉、亞硫酸氫鈉、無(wú)水冰醋酸、4-氨基丁酸、二碳酸二叔丁酯、碳酸氫鉀、四氫呋喃、正丁醇、茚三酮、乙酸乙酯、檸檬酸、無(wú)水硫酸鎂、2-吡咯烷酮、三氯氧磷、二氯甲烷、己內(nèi)酰胺、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、2-氨基-4-氯苯甲酸、戊二醛、無(wú)水醋酸鈉、3A分子篩、對(duì)二甲胺基苯甲醛、環(huán)己烷、正己烷、三氯甲烷、柱層析硅膠，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

DHJF-2005型低溫反應(yīng)釜，鄭州長(zhǎng)盛實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；SHZ-D(Ⅲ) 型循環(huán)水式多用真空泵，鞏義予華儀器有限責(zé)任公司；C-MAG HS 7型磁力攪拌器、RV10 digital型數(shù)顯旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、HB10 digital型恒溫水浴鍋，IKA；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱，中興儀器設(shè)備有限公司；XMTD-8222型真空干燥箱，精宏儀器設(shè)備有限公司；ZF-2型三用紫外儀，上海安亭電子儀器廠(chǎng)。

1.2.2 合成方法

在三氯氧磷的存在下合成脫氧鴨嘴花堿酮衍生物Ⅰ1～Ⅰ4，三氯氧磷由于其良好的脫水性能，捕獲了縮合反應(yīng)產(chǎn)生的水分子。通過(guò)衍生物Ⅰ1～Ⅰ4與對(duì)二甲胺基苯甲醛[20]的親核加成反應(yīng)合成衍生物Ⅱ1～Ⅱ4。反應(yīng)機(jī)理類(lèi)似于醛縮合反應(yīng)，氮原子附近碳原子上的氫被亞氨基活化，形成碳負(fù)離子作為親核試劑攻擊對(duì)二甲胺基苯甲醛，最終產(chǎn)物產(chǎn)率較高。合成路線(xiàn)如圖3所示。

圖3 脫氧鴨嘴花堿酮衍生物的合成路線(xiàn)

1.2.2.1 2,3-二氫吡咯并[2,1-b]喹唑啉-9(1H)-酮(Ⅰ1)的合成

將1.37 g(10 mmol)鄰氨基苯甲酸(參照文獻(xiàn)[21]合成，下同)、1.14 mL(11 mmol)2-吡咯烷酮和6 mL三氯氧磷依次加入到100 mL帶攪拌器的圓底燒瓶中，100 ℃無(wú)水條件下回流1 h；自然冷卻后，將反應(yīng)物傾入碎冰中，用碳酸氫鉀溶液調(diào)節(jié)體系pH值至8，用100 mL二氯甲烷萃取3次，減壓旋蒸除去溶劑；以二氯甲烷為洗脫劑用柱層析色譜分離產(chǎn)物，得衍生物Ⅰ11.246 g，產(chǎn)率67%。

1.2.2.2 7,8,9,10-四氫氮雜并[2,1-b]喹唑啉-12(6H)-酮(Ⅰ2)的合成

將1.37 g(10 mmol)鄰氨基苯甲酸、1.695 g(15 mmol)己內(nèi)酰胺和6 mL三氯氧磷依次加入到100 mL帶攪拌器的圓底燒瓶中，100 ℃無(wú)水條件下回流1 h；自然冷卻后，將反應(yīng)物傾入碎冰中，用碳酸氫鉀溶液調(diào)節(jié)體系pH值至8，用100 mL二氯甲烷萃取3次，減壓旋蒸除去溶劑；以二氯甲烷為洗脫劑用柱層析色譜分離產(chǎn)物，得衍生物Ⅰ21.521 g，產(chǎn)率71%。

1.2.2.3 6-氯-2,3-二氫吡咯并[2,1-b]喹唑啉-9(1H)-酮(Ⅰ3)的合成

將1.73 g(10 mmol)2-氨基-4-氯苯甲酸、1.14 mL(11 mmol)2-吡咯烷酮和6 mL三氯氧磷依次加入到100 mL帶攪拌器的圓底燒瓶中，100 ℃無(wú)水條件下回流1 h；自然冷卻后，將反應(yīng)物傾入碎冰中，用碳酸氫鉀溶液調(diào)節(jié)體系pH值至8，用100 mL二氯甲烷萃取3次，減壓旋蒸除去溶劑；用DMF/H2O混合溶劑重結(jié)晶，得衍生物Ⅰ31.652 g，產(chǎn)率75%。

1.2.2.4 3-氯-7,8,9,10-四氫氮雜并[2,1-b]喹唑啉-12(6H)-酮(Ⅰ4)的合成

將1.73 g(10 mmol)2-氨基-4-氯苯甲酸、1.695 g(15 mmol)己內(nèi)酰胺和6 mL三氯氧磷依次加入到100 mL帶攪拌器的圓底燒瓶中，100 ℃無(wú)水條件下回流1 h；自然冷卻后，將反應(yīng)物傾入碎冰中，用碳酸氫鉀溶液調(diào)節(jié)體系pH值至8，用100 mL二氯甲烷萃取3次，減壓旋蒸除去溶劑；以二氯甲烷為洗脫劑用柱層析色譜分離產(chǎn)物，得衍生物Ⅰ41.814 g，產(chǎn)率73%。

1.2.2.5 3-(4-(二甲胺基)亞芐基)-2,3-二氫吡咯并[2,1-b]喹唑啉-9(1H)-酮(Ⅱ1)的合成

將186 mg(1 mmol)衍生物Ⅰ1、195 mg (1.3 mmol)對(duì)二甲胺基苯甲醛、5顆活化的3A分子篩和5 mL無(wú)水冰醋酸依次加入到100 mL帶攪拌器的圓底燒瓶中，120 ℃無(wú)水條件下回流8 h；自然冷卻后，減壓旋蒸除去溶劑；用環(huán)己烷重結(jié)晶，得衍生物Ⅱ1146 mg，產(chǎn)率46%。

1.2.2.6 6-(4-(二甲胺基)亞芐基)-7,8,9,10-四氫氮雜并[2,1-b]喹唑啉-12(6H)-酮(Ⅱ2)的合成

將214 mg(1 mmol)衍生物Ⅰ2、195 mg(1.3 mmol)對(duì)二甲胺基苯甲醛、5顆活化的3A分子篩和5 mL無(wú)水冰醋酸依次加入到100 mL帶攪拌器的圓底燒瓶中，120 ℃無(wú)水條件下回流8 h；自然冷卻后，減壓旋蒸除去溶劑；用環(huán)己烷重結(jié)晶，得衍生物Ⅱ2177.1 mg，產(chǎn)率51%。

1.2.2.7 6-氯-3-(4-(二甲胺基)亞芐基)-2,3-二氫吡咯并[2,1-b]喹唑啉-9(1H)-酮(Ⅱ3)的合成

將221 mg(1 mmol)衍生物Ⅰ3、195 mg(1.3 mmol)對(duì)二甲胺基苯甲醛、5顆活化的3A分子篩和5 mL無(wú)水冰醋酸依次加入到100 mL帶攪拌器的圓底燒瓶中，120 ℃無(wú)水條件下回流8 h；自然冷卻后，減壓旋蒸除去溶劑；用環(huán)己烷重結(jié)晶，得衍生物Ⅱ3172 mg，產(chǎn)率49%。

1.2.2.8 3-氯-6-(4-(二甲胺基)亞芐基)-7,8,9,10-四氫氮雜并[2,1-b]喹唑啉-12(6H)-酮(Ⅱ4)的合成

將249 mg(1 mmol)衍生物Ⅰ4、195 mg(1.3 mmol)對(duì)二甲胺基苯甲醛、5顆活化的3A分子篩和5 mL無(wú)水冰醋酸依次加入到100 mL帶攪拌器的圓底燒瓶中，120 ℃無(wú)水條件下回流8 h；自然冷卻后，減壓旋蒸除去溶劑；用環(huán)己烷重結(jié)晶，得衍生物Ⅱ4206.5 mg，產(chǎn)率54%。

2 結(jié)果與討論

2.1 虛擬篩選結(jié)果

對(duì)接結(jié)果表明，苯基和氮原子是獲得既能與靶點(diǎn)中心催化位點(diǎn)又能與外周活性位點(diǎn)相互作用的化合物的關(guān)鍵。利用MOE設(shè)計(jì)了一系列不同取代基的脫氧鴨嘴花堿酮衍生物Ⅰ1～Ⅰ4、Ⅱ1～Ⅱ4。虛擬篩選結(jié)果顯示，所有衍生物的ASE評(píng)分(表1)均低于先導(dǎo)化合物脫氧鴨嘴花堿酮，特別是具有二甲胺基芐基取代的衍生物Ⅱ。ASE評(píng)分越低，相互作用越強(qiáng)。

表1 脫氧鴨嘴花堿酮衍生物的ASE評(píng)分

分子對(duì)接和相互作用分析結(jié)果顯示，所有衍生物都與TcAChE中的多活性位點(diǎn)相互作用。當(dāng)衍生物Ⅱ4同時(shí)與酶中心催化位點(diǎn)和外周活性位點(diǎn)結(jié)合時(shí)，MOE對(duì)接結(jié)果最好。對(duì)接模型(圖4)表明，衍生物Ⅱ4的苯環(huán)D與Phe284的苯基通過(guò)經(jīng)典的平行π-π積累相互作用，帶正電荷的氮原子與疏水位點(diǎn)Trp279的苯基通過(guò)陽(yáng)離子-π效應(yīng)相互作用，苯基穿過(guò)活性口袋底部的催化位置，通過(guò)π-π效應(yīng)與Tyr70相互作用。相比之下，衍生物Ⅰ4的亞胺基氮原子通過(guò)水分子與Asp285和Ser286連接；此外，環(huán)A通過(guò)Trp279的苯基與酶的外周活性位點(diǎn)相互作用。顯然，具有二甲胺基芐基取代的衍生物Ⅱ與酶的結(jié)合優(yōu)于沒(méi)有取代的衍生物Ⅰ。

衍生物Ⅰ4與TcAChE的對(duì)接模型 衍生物Ⅱ4與TcAChE的對(duì)接模型

2.2 脫氧鴨嘴花堿酮衍生物的表征

采用Bruker 500型傅立葉變換超導(dǎo)核磁共振儀對(duì)脫氧鴨嘴花堿酮衍生物Ⅰ1～Ⅰ4、Ⅱ1～Ⅱ4進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，結(jié)果如下：

衍生物Ⅰ1:1HNMR(CDCl3,500 Hz),δ:2.236～2.321(m,2H,CH2-CH2-CH2),3.140～3.199(m,2H,N=C-CH2-CH2),4.169～4.226(d,2H,CH2-CH2-N),7.302～7.727(m,3H,Ar-H),8.237～8.280(s,1H,O=C-C=CH)。

衍生物Ⅰ2:1HNMR(CDCl3,500 Hz),δ:2.197～2.258(m,6H,N-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C),3.088～3.120(t,2H,N=C-CH2-CH2),4.109～4.138(t,2H,CH2-CH2-N),7.596～7. 633(s,3H, Ar-H),8.103～8.120(s,1H,O=C-C=CH)。

衍生物Ⅰ3:1HNMR(CDCl3,500 Hz),δ:1.734～1.824(m,2H,CH2-CH2-CH2),2.984～3.006(t,2H,N=C-CH2-CH2),4.308～4.325(t,2H,CH2-CH2-N),7.208～7. 373(d,1H,Cl-C=CH-CH),7.617～7. 935(s,1H,Cl-C=CH-C-N),8.166～8.184(s,1H,O=C-C=CH)。

衍生物Ⅰ4:1HNMR(CDCl3,500 Hz),δ:1.577～2.401(m,6H,N-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C),3.116～3.148(t,2H,N=C-CH2-CH2),4.288～4.306(t,2H,CH2-CH2-N),7.289～7. 310(s,1H,Cl-C=CH-CH),7.515～7. 519(s,1H,Cl-C=CH-C-N),8.084～8.101(s,1H,O=C-C=CH)。

衍生物Ⅱ1:1HNMR(DMSO,500 Hz),δ:2.636～2.712(m,2H,CH2-CH2-C),3.036～3.060(s,6H,N-CH3),3.414～3. 4.31(t,2H,O=C-N-CH2-CH2),6.345(s,1H,C-C=C(H)-Ar-N),6.772～6.781(d,2H,H-o-Ar-N),7.457～7. 498(d,1H,HC=CH-CH),7.457～7.610(d,1H,CH=CH-C-N),7.629(d,2H,H-m-Ar-N),7.899～8.002(d,1H,O=C-C=CH)。

衍生物Ⅱ2:1HNMR(DMSO,500 Hz),δ:1.686～1.778(m,6H,N-CH2-CH2-CH2-CH2-C),3.036～3.060(s,6H,N-CH3),4.321～4.344(t,2H,O=C-N-CH2-CH2),6.356(s,1H,C=C(H)-Ar-N),6.775～6.812(d,2H,H-o-Ar-N),7.457～7.498(d,1H,HC=CH-CH),7.457～7.610(d,1H,CH=CH-C-N),7.629(d,2H,H-m-Ar-N),7.899～8.002(d,1H,O=C-C=CH)。

衍生物Ⅱ3:1HNMR(DMSO,500 Hz),δ:2.633～2.708(m,2H,CH2-CH2-C),3.016～3.021(s,6H,N-CH3),4.282～4.315(s,2H,O=C-N-CH2-CH2),6.356(s,1H,C=C(H)-Ar-N),6.776～6.782(d,2H,H-o-Ar-N),7.521(d,1H,Cl-C=CH-CH),7.542(s,1H,Cl-C=CH-C-N),7.636(d,2H,H-m-Ar-N),7.939～8.005(d,1H,O=C-C=CH)。

衍生物Ⅱ4:1HNMR(DMSO,500 Hz),δ:1.722～1.856(m,6H,N-CH2-CH2-CH2-CH2-C),3.006～3.022(s,6H,N-CH3),4.268～4.328(s,2H,O=C-N-CH2-CH2),6.356(s,1H,C=C(H)-Ar-N),6.742(d,2H,H-o-Ar-N),7.516(d,1H,Cl-C=CH-CH),7.534(s,1H,Cl-C=CH-C-N),7.629(d,2H,H-m-Ar-N),7.899～8.002(d,1H,O=C-C=CH)。

2.3 脫氧鴨嘴花堿酮衍生物對(duì)乙酰膽堿酯酶的體外抑制活性

以上市藥物加蘭他敏為陽(yáng)性對(duì)照，采用埃爾曼方法[22]測(cè)定脫氧鴨嘴花堿酮衍生物對(duì)乙酰膽堿酯酶的體外抑制活性，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 脫氧鴨嘴花堿酮衍生物對(duì)乙酰膽堿酯酶的體外抑制活性

由表2可知，與陽(yáng)性對(duì)照加蘭他敏相比，脫氧鴨嘴花堿酮衍生物對(duì)乙酰膽堿酯酶均表現(xiàn)出不同程度的體外抑制活性，且衍生物Ⅱ的體外抑制活性比相應(yīng)衍生物Ⅰ的高；脫氧鴨嘴花堿酮衍生物對(duì)乙酰膽堿酯酶的體外抑制活性測(cè)定值與計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)預(yù)測(cè)值基本一致；體外抑制活性最高的衍生物Ⅱ4的IC50值達(dá)到2.03 μmol· L-1，其體外抑制活性約為陽(yáng)性對(duì)照加蘭他敏的2倍。

2.4 討論

對(duì)對(duì)接結(jié)果和體外抑制活性進(jìn)行了分析和比較：

首先，由于對(duì)二甲胺基苯甲醛片段的取代，衍生物Ⅱ的體外預(yù)測(cè)和檢測(cè)數(shù)據(jù)均表現(xiàn)出比衍生物Ⅰ更強(qiáng)的抑制活性。這一發(fā)現(xiàn)在衍生物與加利福尼亞電鰩乙酰膽堿酯酶的對(duì)接模型中很明顯：衍生物Ⅱ4的苯環(huán)D通過(guò)經(jīng)典的平行π-π積累與Phe284的苯基相互作用，帶正電荷的氮原子通過(guò)陽(yáng)離子-π效應(yīng)與疏水位點(diǎn)Trp279的苯基同時(shí)相互作用，苯基通過(guò)π-π效應(yīng)與Tyr70相互作用。

其次，含氯取代基(R=Cl)的衍生物的體外抑制活性強(qiáng)于沒(méi)有取代基(R=H)的衍生物。這可能是由于：一是氯原子可能延長(zhǎng)了分子的長(zhǎng)度，使配體和受體之間的結(jié)合合理化；二是氯取代基的親電特性使其更容易與乙酰膽堿酯酶中的極性殘基相互作用。

最后，五元和七元雜環(huán)衍生物表現(xiàn)出不同的體外抑制活性，七元雜環(huán)衍生物具有較高的體外抑制活性，這可能是由于在對(duì)接時(shí)識(shí)別活性位點(diǎn)的偏差。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，七元雜環(huán)衍生物的平面結(jié)構(gòu)比五元雜環(huán)衍生物的平面結(jié)構(gòu)更好，可能使其與真實(shí)酶的結(jié)構(gòu)匹配得更好。

3 結(jié)論

設(shè)計(jì)并合成了脫氧鴨嘴花堿酮衍生物，其IC50值在毫摩爾到微摩爾濃度范圍內(nèi)，對(duì)乙酰膽堿酯酶有明顯的體外抑制活性；其中體外抑制活性最高的衍生物Ⅱ4的IC50值僅為2.03 μmol·L-1，其體外抑制活性約為陽(yáng)性對(duì)照加蘭他敏的2倍，在治療AD方面具有潛力。ASE評(píng)分的高低與衍生物抑制活性的高低不完全一致，但總體上表現(xiàn)出一致的傾向。