王麗麗，謝明慧，盧祥婷

(1.舞鋼公司總醫(yī)院 皮膚科，河南 平頂山 462500；2.河南省人民醫(yī)院 皮膚科，河南 鄭州 450000)

特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis，AD)是皮膚科常見的慢性多發(fā)性炎癥性疾病，主要病理特征為血清免疫球蛋白E(immunoglobulin E，IgE)異常增加，免疫反應(yīng)過度激活，臨床上主要表現(xiàn)為頑固性瘙癢、皮膚干燥及各種形態(tài)的皮損反復(fù)發(fā)作[1]。據(jù)報(bào)道，AD的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，我國AD的患病率從2002年的3.07%增加至2014年的12.94%[2]。多數(shù)AD患者在兒童期發(fā)病，直至成年時(shí)仍然遷延不愈。AD可能影響全球20%兒童的身心健康和生活質(zhì)量[3]。目前認(rèn)為AD的發(fā)病機(jī)制為遺傳與環(huán)境因素的相互作用，通過免疫途徑引起致病性炎癥改變及皮膚穩(wěn)態(tài)破壞[4]。研究顯示，AD患者皮損處的表皮中Claudin-1的水平較低，可能引起細(xì)胞旁路通透性增加和機(jī)體免疫防御能力降低，使機(jī)體對(duì)外界致病因素易感[5]。Gittler等[6]在急、慢性AD患者的皮損中發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素-17(interleukin-17，IL-17)及白細(xì)胞介素-22(interleukin-22，IL-22)的水平顯著升高，可能與AD的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。研究表明，白細(xì)胞介素-25(interleukin-25，IL-25)通過固有免疫反應(yīng)可引起皮膚急性炎癥，IL-25在AD等炎癥性皮膚病中高表達(dá)[7]。Peng等[8]研究發(fā)現(xiàn)，降低AD患者IL-33的表達(dá)水平可能對(duì)該病有治療效果。因此，為進(jìn)一步了解AD的病因與發(fā)病機(jī)制以預(yù)防及治療該病，本研究擬探討血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25、IL-33水平與AD的嚴(yán)重程度是否存在相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2020年1月至2021年6月于舞鋼公司總醫(yī)院皮膚科門診就診的40例AD患者作為病例組，選取同時(shí)間段于舞鋼公司總醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的40名志愿者為對(duì)照組。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查。納入對(duì)象或家屬簽署知情同意書。(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①參考Williams制定的AD診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，病例組患者被確診為AD；②所有研究對(duì)象之間無血緣關(guān)系；③研究對(duì)象溝通無障礙，配合度高。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①器官移植術(shù)后；②存在其他自身免疫性疾病、感染性疾病、惡性腫瘤或血液系統(tǒng)疾??；③伴有重要器官功能衰竭；④入組前2個(gè)月內(nèi)服用過皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑等。對(duì)照組男22例，女18例，年齡4～38歲，中位年齡17歲。病例組男23例，女17例，年齡5～38歲，中位年齡16歲。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 差異性基因表達(dá)GSE16161陣列的基因表達(dá)譜和相關(guān)臨床數(shù)據(jù)可從Gene Expression Omnibus(GEO，https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)下載。從病例組患者(9例)和對(duì)照組(9名)中篩選候選因子，使用HG-U133_Plus_2微陣列測量基因表達(dá)。 根據(jù)|logFC|>1和 adj.p<0.001篩選差異表達(dá)的基因。

1.3 血清指標(biāo)研究對(duì)象入組后次日清晨8～9點(diǎn)空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周靜脈血，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33水平。(1)主要試劑：人Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33的ELISA試劑盒購自武漢博士德生物公司。(2)主要儀器：離心機(jī)(濟(jì)南鑫宇鑫公司)，恒溫箱(河北匯能公司)，酶標(biāo)儀(美國BioTek公司)。(3)實(shí)驗(yàn)方法：采集研究對(duì)象的空腹靜脈血，靜置分層后，于4 ℃低溫離心機(jī)中離心10 min，離心半徑10 cm，轉(zhuǎn)速3 000 r·min-1，上層即為血清。根據(jù)相應(yīng)的ELISA試劑盒說明書測定血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33水平。

1.4 疾病嚴(yán)重程度通過歐洲特應(yīng)性皮炎評(píng)分指數(shù)(scoring atopic dermatitis index，SCORAD)[10]評(píng)估AD的嚴(yán)重程度，總分共計(jì)103分。0～24分為輕度，25～50分為中度，51～103分為重度。輕度組(13例)：男6例，女7例；年齡5～35歲，中位年齡15歲。中度組(15例)：男7例，女8例；年齡5～37歲，中位年齡16歲。重度組(12例)：男6例，女6例；年齡6～38歲，中位年齡16歲。3組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2 結(jié)果

2.1 基因表達(dá)譜篩選候選因子從GSE16161數(shù)據(jù)集中進(jìn)行病例組與正常組的差異性基因表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33上調(diào)，Claudin-1下調(diào)。見圖1。

圖1 基因表達(dá)譜篩選候選因子

2.2 血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33與對(duì)照組相比，病例組血清Claudin-1水平較低，IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33水平均較高(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33水平比較

2.3 不同嚴(yán)重程度AD患者血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33水平的比較3組Claudin-1、IL-22、IL-25水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；重度組Claudin-1水平低于輕度組(P<0.05)；與輕度組比較，中度組和重度組IL-22水平均較高(P<0.05)；重度組IL-25水平高于輕度組和中度組(P<0.05)；3組IL-17A、IL-33水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同嚴(yán)重程度AD患者血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33水平的比較

2.4 AD患者血清Claudin-1、IL-22、IL-25水平與SCORAD評(píng)分的相關(guān)性Pearson相關(guān)分析顯示，AD患者血清Claudin-1水平與SCORAD評(píng)分無關(guān)(P>0.05)(見圖2)，血清IL-22、IL-25水平與SCORAD評(píng)分呈正相關(guān)(P<0.05)，見圖3和圖4。

圖2 AD患者血清Claudin-1與SCORAD評(píng)分的相關(guān)性

圖3 AD患者血清IL-22與SCORAD評(píng)分的相關(guān)性

圖4 AD患者血清IL-25與SCORAD評(píng)分的相關(guān)性

3 討論

AD是一種易反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥性皮膚疾病，其具體發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明，一般認(rèn)為與基因、環(huán)境、免疫因素相關(guān)[11]。但其病理生理學(xué)十分復(fù)雜，皮膚屏障破壞、免疫紊亂、炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)及超敏反應(yīng)等多種因素可能參與了AD的發(fā)病過程[12]。Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25和IL-33在皮膚屏障功能、免疫功能、炎癥反應(yīng)等多個(gè)方面具有重要作用，在AD患者皮損表皮中的水平發(fā)生變化[11-13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，病例組血清Claudin-1水平較低，IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33水平均較高。潘云雷[14]研究發(fā)現(xiàn)，重度AD患者血清IL-22水平高于輕中度組，但血清Claudin-1、IL-17A水平在重度組、輕中度組之間無明顯差異。本研究結(jié)果顯示，重度組AD患者血清Claudin-1水平低于輕度組，血清IL-17A水平在輕、中、重度AD患者中無顯著差異，中、重度組血清IL-22水平均高于輕度組。石艷麗[15]研究表明，中重度組血清IL-25、IL-33水平與輕度AD患者相比無明顯差異。本研究顯示，重度組血清IL-25水平高于輕度組和中度組，血清IL-33水平在輕、中、重度AD患者中無顯著差異。本研究還通過Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，AD患者血清Claudin-1水平與SCORAD評(píng)分無關(guān)，血清IL-22、IL-25水平與SCORAD評(píng)分呈正相關(guān)。潘云雷[14]研究表明，AD患者血清IL-17A、IL-22水平與SCORAD評(píng)分呈正相關(guān)，而Claudin-1與SCORAD評(píng)分無關(guān)。這些研究結(jié)果存在一定的差異，可能與研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)、樣本量、研究設(shè)計(jì)方案、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法等有關(guān)，有待更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)拇髽颖?、多中心相關(guān)研究來驗(yàn)證血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25及IL-33水平是否可作為反映AD嚴(yán)重程度的指標(biāo)。

血清Claudin-1、IL-17A、IL-22、IL-25和IL-33水平可能與AD的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。血清IL-22和IL-25水平可能與AD的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。臨床可通過檢測其血清水平初步判斷AD患者的病情嚴(yán)重程度。