劉巧凌，劉 沖，林 偉＊

（1.新縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站，河南新縣 464000；2.信陽農(nóng)林學(xué)院，河南信陽 464000）

克氏原螯蝦，也被稱為紅螯蝦或淡水小龍蝦，隸屬節(jié)肢動物門，是近幾年來我國淡水蝦蟹五個主要養(yǎng)殖品種中產(chǎn)量年均增長速率最高的[1]。隨著克氏原螯蝦養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，集約化養(yǎng)殖的持續(xù)增加，使得養(yǎng)殖過程中各種藥物使用的劑量和頻率不斷增加，隨之而來的水體環(huán)境污染和各種疾病的發(fā)生也不斷涌現(xiàn)，給養(yǎng)殖戶們帶來不小的經(jīng)濟損失。強力碘作為一種常見的廣譜殺菌消毒劑，因其價格適中、使用方法簡單且安全高效的優(yōu)點被越來越多的養(yǎng)殖戶所接受。但是由于養(yǎng)殖戶們的養(yǎng)殖水平不一，養(yǎng)殖觀念的不同還有廠家指導(dǎo)的不足造成了養(yǎng)殖戶們的盲目用藥，有時就導(dǎo)致了克氏原螯蝦中毒死亡。因此，為了給克氏原螯蝦的用藥提供科學(xué)指導(dǎo)，研究強力碘對克氏原螯蝦的急性毒性是很有必要的。

1 試驗時間、地點及條件

試驗于2019年3～5月在信陽農(nóng)林學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院水產(chǎn)動物病害學(xué)實驗室進行，試驗用水為經(jīng)過48h（小時）循環(huán)曝氣的自來水，水體溫度為20～23℃；水體總硬度為3.6，pH值為6.9～7.4，堿度為1.49mmol/L。

2 材料

2.1 試驗動物

試驗采用的克氏原螯蝦均采購于羅山某養(yǎng)殖戶，平均體長為（6.53 ±0.38）cm，平均體重為（11.72±1.25）g，試驗前小龍蝦先在實驗室內(nèi)暫養(yǎng)7d，每天換水一次，每次換水約1/2，并撈出運動不正常個體，暫養(yǎng)及試驗過程中均不進行投喂，待小龍蝦的存活狀況達到穩(wěn)定狀態(tài)方能用于試驗。

2.2 試驗試劑

強力碘藥品（有效碘濃度約為2%）購自鄭州康諾生物科技有限公司，藥物保存在避光陰涼處，使用時現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.3 器材

藍色塑料箱（53cm×35cm×12cm）、（10mL、500mL）、容量瓶（1000mL）、吸耳球、分析天平、試管刷、玻璃棒、溫度計、pH測試儀、移液管等均由上海生工生物工程有限公司鄭州分公司提供。

3 方法

3.1 步驟

采用靜水生物試驗法[2]，用強力碘進行急性毒性試驗。試驗開始前經(jīng)過大量相關(guān)文獻的查閱并擬定了預(yù)試驗濃度，經(jīng)預(yù)試驗確定了本次試驗所需強力碘溶液對試驗對象的急性毒性的濃度范圍（全數(shù)致死下限濃度和全部存活上限濃度）。根據(jù)預(yù)試驗得到的濃度范圍進行對等數(shù)間距設(shè)置6個正式試驗濃度，同時設(shè)置空白對照組（空白對照組為無強力碘添加），其中每個濃度組和空白對照組都設(shè)置3個平行對照組，每個試驗組放入規(guī)格大小無差異且須肢健全的健康蝦10只，在20～23℃水溫且完全靜水停食的條件下進行試驗。用藥后前6h持續(xù)觀察蝦的存活狀況，及時取出死蝦，之后每24h觀察記錄一次試驗動物中毒反應(yīng)和死亡情況，發(fā)現(xiàn)死亡個體及時記錄并撈出。

3.2 死蝦判斷標準

用玻璃棒觸碰蝦體，在3min內(nèi)無刺激反應(yīng)，判定死亡[3]。

3.3 數(shù)據(jù)處理

采用改良寇氏法計算半致死濃度[4]。

Xm：為最大劑量組劑量的對數(shù)值。

i：相鄰兩組劑量對數(shù)值之差。

P：各組動物的死亡率。

∑p：各組動物死亡率之和。

通過24h LC50和48h半致死濃度，計算出安全濃度。計算公式為：安全濃度（SC）=48h LC50×0.3 ×（24hLC50×48hLC50-1）-2[4]（2）

4 結(jié)果與分析

4.1 各濃度組不同時間的死亡情況

預(yù)試驗得出的強力碘對克氏原螯蝦全數(shù)致死下限濃度為3200mg/L全部存活上限濃度為800mg/L，依據(jù)此濃度范圍，設(shè)置等對數(shù)間距的濃度組6個，分別 為：800mg/L、1056mg/L、1393mg/L、1838mg/L、2425mg/L、3200mg/L。每個濃度組有3個平行組，對照組也有三個空白對照，合計21組。每個濃度組依次編號，每個暫養(yǎng)箱放入克氏原螯蝦10只。水體溫度為20～23℃，水體pH值為6.8～7.5，總硬度為3.5，堿度為1.54mmol/L。各濃度組克氏原螯蝦死亡情況如表1。

表1 強力碘不同濃度各組克氏原螯蝦死亡情況（n=10）

4.2 不同濃度組的半致死濃度和安全濃度計算

根據(jù)表1的數(shù)據(jù)，用公式（1）和公式（2）計算各時間段的半致死濃度和安全濃度。結(jié)果如表2。

表2 強力碘對克氏原螯蝦在24h、48h、72h、96h的半致死濃度mg·L-1

4.3 中毒反應(yīng)

克氏原螯蝦在不同濃度的強力碘溶液中表現(xiàn)的中毒癥狀各異。高濃度組的克氏原螯蝦在20分鐘后出現(xiàn)中毒初期癥狀，蝦四處移動，活動劇烈。此時用玻璃棒輕觸蝦身，克氏原螯蝦會表現(xiàn)出正常的抵御反應(yīng)。而低濃度組和對照組的克氏原螯蝦則表現(xiàn)出正常狀態(tài)，身體緊貼箱壁趴臥在箱底。高濃度組的蝦在6h后活動減弱，螯足附肢收縮、僵硬。部分蝦仍有爬行能力，但是移動的非常緩慢。有的蝦則喪失運動能力，仰臥在箱底，步足無規(guī)律的抽動，還有一些蝦則側(cè)躺在箱底。此時用玻璃棒觸碰蝦體時不表現(xiàn)任何的抵御反應(yīng)；除了高濃度組的蝦在24h內(nèi)全部死亡外，其他組的死亡率也有不同程度的增加，中毒死亡蝦的身體僵硬呈現(xiàn)收縮狀，和缺氧死亡蝦的癥狀有很大的區(qū)別。

5 討論

5.1 強力碘對克氏原螯蝦的毒性強度

根據(jù)本試驗的研究結(jié)果，強力碘對克氏原螯蝦24h、48h、72h、96h的半致死濃度分別為1923.1mg/L、1770.1mg/L、1721.9mg/L、1721.9mg/L。強力碘對克氏原螯蝦的安全濃度為449.9mg/L，根據(jù)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則》中農(nóng)藥對魚類的毒性等級的劃分(劇毒,96h LC50≤0.1mg/L；高毒,96h LC50≤1.0mg/L；中毒，1.0mg/L＜96h LC50≤10.0mg/L；低毒，96h LC50＞10.0mg/L)[6]，可判定強力碘對克氏原螯蝦為低毒。高曉華等的研究中聚維酮碘對克氏原螯蝦的96h的LC50為13.89mg/L，安全濃度為1.39mg/L[7]，但高曉華選用的克氏原螯蝦規(guī)格較大，藥品的純度及生產(chǎn)廠家不同，試驗進行時的水溫較此次試驗高，說明不同環(huán)境下聚維酮碘對蝦的安全濃度有較大差異，不同廠家生產(chǎn)的藥品對蝦的毒性大小不同，不同規(guī)格的的蝦對聚維酮碘的敏感度也有較大區(qū)別。

5.2 強力碘在克氏原螯蝦生產(chǎn)中的使用注意事項

強力碘是一種新型的碘的化合物，作為水產(chǎn)上常用的一種水體消毒藥物，不僅能用于預(yù)防疾病,還有治療作用[7]，因養(yǎng)殖戶們的養(yǎng)殖觀念的不同，養(yǎng)殖戶在使用時經(jīng)常加量甚至超量，但超劑量使用該藥物容易產(chǎn)生耐藥性,甚至對水生動物產(chǎn)生毒害作用,引起死亡,更嚴重的是還會給位于食物鏈頂端的人類帶來健康隱患[8]。本試驗中強力碘對克氏原螯蝦的安全濃度為449.9mg/L，根據(jù)國家標準和試驗結(jié)果表明強力碘對克氏原螯蝦是安全的。盡管克氏原螯蝦具有很強的生理適應(yīng)性，但在其養(yǎng)殖過程中強力碘還是不宜多用的，為了達到高效、精準用藥的目的，在用藥之前可以進行藥物敏感試驗。

有些養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖過程中把強力碘作為一種常用藥物進行使用，但是強力碘對養(yǎng)殖動物的病害有時不產(chǎn)生效果的情況時有發(fā)生。原因很多，有時是養(yǎng)殖戶自身原因，養(yǎng)殖戶的使用方法不對，養(yǎng)殖戶在使用時用藥加量或者減量；有時是藥物本身的原因，養(yǎng)殖戶買到假藥或者過期藥品，還有就是保存不當(dāng)造成的藥物藥效減小甚至消失。以上這些因素都會造成強力碘對養(yǎng)殖動物的病害無效。為了在克氏原螯蝦的養(yǎng)殖過程中使藥物達到應(yīng)有的效果，在此提醒使用者注意三個方面的問題。首先是藥物用量，可以在使用強力碘之前進行藥物敏感試驗以確定準確用量。其次是使用方法，因強力碘內(nèi)含聚維酮碘，具有易升華、易揮發(fā)的特性，在使用時要注意溫度和光照的問題，溫度過高會導(dǎo)致碘的升華繼而使藥物失效，光照也會影響藥物藥效，因此在配置藥物時溫度不宜過高，施用此藥時盡量選在日出前或日落后等光照不強的時間段。在堿性環(huán)境下碘制劑非常不穩(wěn)定，有效碘的含量和酸堿度成反比，在使用強力碘時不要與生石灰等強堿物質(zhì)合用。同樣是因為含聚維酮碘，對二價金屬制品會有腐蝕作用，所以在配置和保存時不要選用金屬容器，盡量選用玻璃瓶等，保存在避光陰涼處。最后一定要選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的通過獸藥GMP認證的藥品。