袁小筍 張 蕾 馬慧利 薛永飛 李長生 張敬偉 任中海

南陽市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科二病區(qū) (河南 南陽， 473000)

原發(fā)性肝癌(PHC)發(fā)病率居全球惡性腫瘤第4位，腫瘤相關(guān)死亡率居第2位[1]，PHC患者大多起病隱匿，患者往往因缺乏特異性臨床癥狀而難以及時確診和治療，50%以上的患者確診時已進展為晚期腫瘤，且大多伴有遠處臟器轉(zhuǎn)移，預后往往較差，5年生存率低于30%[2，3]，因此，對PHC患者早期診斷和及時干預至關(guān)重要。甲胎蛋白(AFP)是目前臨床上用于診斷PHC的血清學標志物，研究顯示，AFP單獨診斷PHC的特異度在90%左右，但敏感度較低，尚不足70%，故而臨床上亟需尋找一種診斷PHC具有較高敏感度和特異度的血清學標志物[4，5]。近年來發(fā)現(xiàn)婆羅雙樹樣基因-4(SALL4)與腫瘤細胞的增殖、侵襲及遠處轉(zhuǎn)移等有關(guān)[6]。本研究調(diào)查PHC患者血清中SALL4的表達水平及其相關(guān)影響因素，進一步探討SALL4單獨及聯(lián)合AFP用于診斷PHC中的臨床效能。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 納入2019年1月至2019年12月于南陽市中心醫(yī)院就診的70例PHC患者、40例乙型肝炎肝硬化(LC)患者和35例健康體檢者作為研究對象。PHC組患者經(jīng)過術(shù)后病理診斷，符合PHC診療規(guī)范(2017年版)[7]，臨床資料完善，近3個月內(nèi)未經(jīng)過手術(shù)、化療或靶向生物制劑治療，且未合并其他原發(fā)性惡性腫瘤。LC組患者診斷符合既往乙型肝炎肝炎病史多年，通過肝臟B超或CT確診。另選取我院體檢中心無肝炎、肝硬化及惡性腫瘤的健康體檢者作為對照組。3組研究對象在性別、年齡上比較差異無統(tǒng)計學意義，具有一定的可比性，見表1。所有研究對象及家屬均知情同意，且簽署知情同意協(xié)議書，本研究經(jīng)過我院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 臨床及病理特征資料 PHC患者的臨床資料如性別、年齡、HBsAg狀態(tài)、腫瘤細胞分化程度、TNM分期、腫瘤大小、Child-Pugh分級和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移等信息均來源于住院病歷。血清AFP、CEA和CA19-9水平均在我院檢驗科檢測。

1.2.2 血清SALL4表達水平的檢測 于清晨空腹抽取3組研究對象外周靜脈血5 ml于抗凝管中，在常溫下離心收集上層血清，并置于-80℃冰箱中保存。采用ELISA法檢測3組研究對象血清SALL4的表達水平。血清SALL4檢測試劑盒由北京博邁斯科技發(fā)展有限公司提供。所有操作步驟均嚴格按照ELISA試劑盒中的說明書執(zhí)行，由南陽市中心醫(yī)院檢驗科完成。

2 結(jié)果

2.1 研究對象一般資料比較 見表1。

表1 一般資料在研究對象中的比較

2.2 PHC患者血清SALL4水平與臨床特征的關(guān)系 單因素分析結(jié)果顯示，PHC患者血清SALL4水平與腫瘤細胞分化程度、TNM分期、Child-Pugh分級及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。見表2。

表2 PHC患者血清SALL4水平與臨床-病理特征的相關(guān)性分析

2.3 PHC患者血清SALL4水平的多因素分析 Logistic回歸分析結(jié)果顯示，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Child-Pugh分級均是PHC患者血清SALL4水平升高的危險因素。見表3。

表3 PHC患者血清SALL4表達水平的影響因素分析

2.4 血清SALL4聯(lián)合AFP診斷PHC的臨床效能 以PHC和LC兩組患者SALL4及AFP水平為檢驗變量，以PHC患者SALL4及AFP水平為狀態(tài)變量繪制ROC曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清SALL4表達水平診斷PHC的AUC為0.836(95%CI0.753～0.872)，當截斷值為104.23 pg/ml時，敏感度和特異度分別為92.51%和76.94%；血清AFP表達水平診斷PHC的AUC為0.744(95%CI0.623～0.791)，當截斷值為168.72 ng/ml時，敏感度和特異度分別為93.24%和63.16%；SALL4聯(lián)合AFP診斷PHC的AUC為0.915(95%CI0.863～0.957)，敏感度和特異度分別為95.18%和90.04%。見圖1。

圖1 血清SALL4聯(lián)合AFP診斷PHC的ROC曲線

3 討論

人類SALL4基因主要位于第20號染色體q13.13-q13.2，長度約為18 000 bp，SALL4可通過調(diào)控腫瘤細胞中的關(guān)鍵致病基因及誘導相關(guān)信號通路的活化而參與多種腫瘤細胞的生長及局部侵襲[6]。鑒于目前國內(nèi)關(guān)于PHC患者血清中SALL4表達水平的臨床報道較少，本研究回顧性納入我院PHC患者，檢測PHC患者血清中SALL4表達水平及其影響因素，進一步探討SALL4是否可作為PHC的一項血清學腫瘤標志物。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組和LC組相比，PHC組血清中SALL4表達水平顯著升高，腫瘤細胞分化程度越低、TNM分期越高、Child-Pugh分級越高及存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清中SALL4表達水平相對較高，提示SALL4可能在PHC的病情進展中扮演了重要作用。Han等[8]通過ELISA法證實，相對于LC及乙型肝炎肝炎患者，PHC患者血清中SALL4表達水平顯著升高，且術(shù)后SALL4表達水平較術(shù)前顯著降低；此外，Wang等[9]證實PHC患者癌組織中SALL4表達水平與癌旁組織相比同樣顯著升高，且與腫瘤細胞分化程度、TNM分期、腫瘤大小等有關(guān)，這一結(jié)論與本研究結(jié)果基本一致。在發(fā)病機制上，SALL4過表達可引起Wnt/β-catenin信號通路的活化而間接促進肝癌細胞的增殖與遷移，而當通過小干擾RNA抑制SALL4的表達后能顯著誘導癌細胞的凋亡[10]；另一方面，劉海榮等[11]發(fā)現(xiàn)LINC00654mRNA表達水平在PHC癌組織中顯著升高，且與不良預后密切有關(guān)，進一步采用生物信息學法證實SALL4參與PHC的發(fā)病機制可能與上調(diào)癌組織中的LINC 00654 mRNA的高表達有關(guān)。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及Child分級較高均是PHC預后不良的危險因素[7]，而本研究中采用Logistic回歸分析證實TNM分期越高、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Child-Pugh分級越高均是PHC患者血清SALL4水平升高的危險因素，提示SALL4高表達與PHC的不良預后有關(guān)。

為明確SALL4診斷PHC的臨床效能，我們采用ROC曲線分析后證實SALL4在鑒別PHC和LC患者的臨床效能顯著，AUC為0.836(95%CI0.753～0.872)，當截斷值為104.23 pg/ml時，敏感度和特異度分別為92.51%和76.94%，提示通過檢測血清中SALL4蛋白表達水平對LC是否進展到肝癌具有顯著的意義，我們認為SALL4可作為診斷PHC的一項血清學標志物。AFP是臨床上用于診斷PHC的常用血清學標志物，但存在敏感度較低的缺陷。我們發(fā)現(xiàn)進一步采用SALL4聯(lián)合AFP診斷PHC的臨床效能更為顯著，AUC為0.915(95%CI0.863～0.957)，敏感度和特異度分別為95.18%和90.04%，因此，SALL4聯(lián)合AFP診斷PHC具有較高的價值。

綜上所述，PHC患者血清中SALL4表達水平顯著升高，SALL4可作為PHC的一項血清學標志物，SALL4高表達也與患者的不良預后顯著相關(guān)，本研究提示SALL4可作為治療PHC的一個靶向位點，然而SALL4在PHC中的作用及其如何調(diào)控下游基因、蛋白的表達尚不完全清楚，這也是日后我們進一步研究的方向。