吳曉晴，盧雯平

（中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京 100053）

卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一，中國(guó)人群卵巢癌新發(fā)病例為52 971 例/年，死亡達(dá)30 886 例/年［1］。中醫(yī)認(rèn)為卵巢癌屬于“癥瘕”、“積聚”等范疇，治療宜溫陽(yáng)益氣，活血消癥。桂枝茯苓丸首載于《金匱要略》，具有活血化瘀消癥之效，仲景用其治療婦科癥瘕、胎動(dòng)不安、胎漏，后人用其治療卵巢癌、月經(jīng)病、子宮肌瘤、卵巢囊腫、子宮內(nèi)膜異位癥、腫大增生性內(nèi)科疾病、心腦血管疾病等［2］也取得了良好的臨床效果。有動(dòng)物體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)報(bào)道了桂枝茯苓丸能誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡［3］，抑制大鼠和裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)［4，5］，聯(lián)合西醫(yī)治療能加強(qiáng)晚期卵巢癌患者的療效，提高生存質(zhì)量［6，7］。中藥復(fù)方治療疾病具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，因此本文采取網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，預(yù)測(cè)桂枝茯苓丸作用卵巢癌的治療靶點(diǎn)和信號(hào)通路，并使用分子對(duì)接進(jìn)行驗(yàn)證。

1 資料與方法

1.1 篩選桂枝茯苓丸的有效成分和靶點(diǎn)

在TCMSP（http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmspsearch.php）數(shù)據(jù)庫(kù)中分別檢索桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮和桃仁，得到每味中藥的化學(xué)成分。根據(jù)口服利用度（Oral bioavailability，OB）≥30%，類藥性（drug likeness，DL）≥0.18 的屬性值對(duì)檢索到的所有化學(xué)成分進(jìn)行篩選，收集到桂枝茯苓丸的活性成分。通過TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)查找收集到的活性成分的作用靶點(diǎn)，根據(jù)已發(fā)表的文獻(xiàn)對(duì)藥物靶點(diǎn)進(jìn)行補(bǔ)充。在Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)中，將已知藥物靶點(diǎn)蛋白轉(zhuǎn)化為靶基因。使用Cytoscape 軟件構(gòu)建桂枝茯苓丸藥物-成分-靶基因網(wǎng)絡(luò)圖，使用Network Analyze 功能對(duì)該網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治觯玫皆摼W(wǎng)絡(luò)各個(gè)節(jié)點(diǎn)的度值Degree 值、緊密度Closeness 值和介度Betweenness值三個(gè)參數(shù)的值確定藥物的主要活性成分。

1.2 篩選卵巢癌的疾病靶點(diǎn)

在Genecards 數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索關(guān)鍵詞“ovarian cancer”、“ovarian carcinoma”，獲取疾病靶點(diǎn)。Score值的大小代表該靶點(diǎn)與疾病的相關(guān)度，選取Score值大于中位數(shù)的靶點(diǎn)作為卵巢癌的疾病靶點(diǎn)。在OMIM、Digsee、TTD、Drugbank 數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索上述關(guān)鍵詞，把獲取的疾病靶點(diǎn)補(bǔ)充到在Genecards 數(shù)據(jù)庫(kù)中得到的靶點(diǎn)中，在Excel 表中進(jìn)行去重，得到最終的疾病靶點(diǎn)庫(kù)。使用Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)將最終得到的基因靶點(diǎn)轉(zhuǎn)化為靶基因。

1.3 獲取桂枝茯苓丸對(duì)卵巢癌的作用樞紐基因

樞紐基因是指是在生物學(xué)過程中發(fā)揮至關(guān)重要作用的基因，在相關(guān)通路中，其他基因的調(diào)控往往要受到該基因的影響，是重要的靶基因。使用R 3.5.3 軟件對(duì)桂枝茯苓丸作用靶基因和卵巢癌的疾病靶基因取交集，并繪制韋恩圖。使用String 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行蛋白質(zhì)互相作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，蛋白質(zhì)來(lái)源為“Homo Sapiens”，導(dǎo)出蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)的數(shù)據(jù)表，導(dǎo)入Cytoscape 中使用Cytohubba 插件篩選樞紐基因。將經(jīng)過12 種算法計(jì)算出的樞紐基因取交集，篩選出前20 個(gè)權(quán)重較大的基因作為關(guān)鍵樞紐基因。

1.4 KEGG 通路富集分析和GO 富集分析

在Metascape 數(shù)據(jù)庫(kù)中錄入獲取的20 個(gè)樞紐基因，來(lái)源選擇“H.Sapiens”，進(jìn)行自定義富集分析。設(shè)置篩選條件為：Min overlap＝3，Pvalue cutoff＝0.01，min enrichment＝1.15。分別進(jìn)行KEGG 通路富集分析、GO 分子生物學(xué)功能（GO MF）、GO 生物過程（GO BP）、GO 細(xì)胞組分（GO CC）富集分析，并使用R 軟件。

1.5 分子對(duì)接驗(yàn)證

在PubMed、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索樞紐基因?qū)β殉舶┳饔玫南嚓P(guān)文獻(xiàn)，篩選出研究較充分的靶點(diǎn)作為對(duì)接的靶蛋白。采用AutoDock Tools 1.5.6 軟件去除靶蛋白中水分子，添加非極性氫，分離配體和受體，計(jì)算電荷，保存為pdbqt 格式文件。在PubChem 有機(jī)小分子生物活性（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)下載小分子3D 坐標(biāo)文件，在pyMol 軟件中利用openbabel 轉(zhuǎn)換為pdb 格式，并下載主要活性成分的3D 結(jié)構(gòu)文件，用Chem3D 17.1 軟件轉(zhuǎn)化為PDB 格式。將結(jié)構(gòu)文件載入AutoDock Tools 1.5.6 軟件，添加原子電荷，分配原子類型，所有柔性鍵均默認(rèn)可旋轉(zhuǎn)，作為對(duì)接配體。以靶蛋白作為受體，以藥物主要活性成分作為配體，根據(jù)靶蛋白復(fù)合物中配體的坐標(biāo)確定分子對(duì)接的活性位點(diǎn)，根據(jù)靶蛋白活性口袋設(shè)置Gridbox 坐標(biāo)及大小，采用AutoDock Vina 進(jìn)行分子對(duì)接，選取自由結(jié)合能最低的結(jié)合構(gòu)象，使用PyMol和LigPlus 軟件進(jìn)行可視化處理。

2 結(jié)果

2.1 桂枝茯苓丸活性成分及靶點(diǎn)

桂枝的活性成分有7個(gè)，茯苓的活性成分有15個(gè)，赤芍的活性成分有28個(gè)，桃仁的活性成分有23個(gè)，牡丹皮的活性成分有10個(gè)，其中谷甾醇、兒茶素為桂枝、牡丹皮、赤芍的共有成分，常春藤皂苷元為茯苓和桃仁的共有成分，β-谷甾醇為桂枝、赤芍和桃仁的共有成分，見表1。在數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選五味中藥的作用靶點(diǎn)并去重后共得到201 個(gè)藥物靶點(diǎn)，并對(duì)已知作用靶點(diǎn)的化合物根據(jù)中藥名首字母進(jìn)行編號(hào)（如桂枝中已知作用靶點(diǎn)的活性成分命名為GZ1、GZ2……）。不同中藥共有的活性成分根據(jù)所共有的中藥名首字母進(jìn)行編號(hào)，如桂枝、赤芍和桃仁共有的活性成分命名為GCT，桂枝、牡丹皮和赤芍共有的活性成分命名為GMC1、GMC2，茯苓和桃仁共有的活性成分命名為FT。

表1 桂枝茯苓丸藥物活性成分Tab 1 Active components of Guizhi Fuling pills

2.2 構(gòu)建藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

使用Cytoscape 構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖，直觀顯示五味中藥成分和靶點(diǎn)的關(guān)系及其重要性。圖中共有252 個(gè)節(jié)點(diǎn)，633 條網(wǎng)絡(luò)，節(jié)點(diǎn)的大小與度值相關(guān)，節(jié)點(diǎn)越大代表度值越大，見圖1。度值是指連接該節(jié)點(diǎn)的邊的數(shù)量，連接該點(diǎn)的邊越多，度值越大，說明與該點(diǎn)相關(guān)的網(wǎng)絡(luò)越復(fù)雜。根據(jù)拓?fù)浞治鼋Y(jié)果獲取藥物的主要活性成分，見表2。

表2 桂枝茯苓丸主要活性成分Tab 2 main active components of Guizhi Fuling pills

圖1 藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig 1 Drug-ingredient-target network diagram

2.3 桂枝茯苓丸對(duì)卵巢癌的作用靶點(diǎn)

在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到卵巢癌的基因靶點(diǎn)7 071 個(gè)，篩選出相關(guān)度得分大于中位數(shù)的靶點(diǎn)作為疾病的潛在靶點(diǎn)，得到潛在靶點(diǎn)3 540 個(gè)。根據(jù)OMIM、TTD，DRUGBANK 數(shù)據(jù)庫(kù)補(bǔ)充卵巢癌相關(guān)靶點(diǎn)，共得到疾病潛在靶點(diǎn)3 937 個(gè)。使用R軟件將藥物成分靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)進(jìn)行分析，得到共同靶點(diǎn)160 個(gè)，如圖2。

圖2 疾病靶基因-藥物靶基因韋恩圖Fig 2 Wayne map of disease target gene-drug target gene

2.4 桂枝茯苓丸治療卵巢癌的樞紐基因

把藥物和疾病的交集基因靶點(diǎn)導(dǎo)入String 數(shù)據(jù)庫(kù)，限定物種為人，獲取蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，共有160 個(gè)節(jié)點(diǎn)，618 條邊，平均節(jié)點(diǎn)度值7.72。將經(jīng)String 數(shù)據(jù)庫(kù)分析后的數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 軟件后，使用Cytohubba 插件進(jìn)行拓?fù)浞治觯玫搅烁鱾€(gè)節(jié)點(diǎn)的關(guān)鍵程度，構(gòu)建了蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)圖，節(jié)點(diǎn)的顏色越深代表節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的權(quán)重越大，即在網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮的作用越關(guān)鍵，見圖3，根據(jù)12 種算法計(jì)算出的樞紐基因取交集得到值最大的20 個(gè)樞紐基因，分別為VEGFA、AKT1、MAPK8、JUN、MMP9、IL-6、TNF、CXCL8、PTGS2、TP53、CASP3、MAPK1、EGF、ESR1、EGFR、MYC、FOS、CCL2、CXCL8 和IL1B，這些節(jié)點(diǎn)最有可能是藥物在治療疾病中發(fā)揮作用的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)。

圖3 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖Fig 3 Protein-protein interaction network

2.5 KEGG 通路富集分析和GO 富集分析

將樞紐基因進(jìn)行KEGG 通路富集分析和GO 富集分析，獲得靶基因參與的通路和生物過程。KEGG 通 路160 個(gè)條目，GO MF 分析245 條目，GO BP 分 析3 083 個(gè) 條 目，GO CC 分 析205 個(gè) 條 目。

根據(jù)-log10（P）值篩選出10 條較為主要的通路，為癌癥信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、乙型肝炎、美國(guó)錐蟲病、糖尿病并發(fā)癥中的年齡-年齡信號(hào)通路、腫瘤壞死因子信號(hào)通路、百日咳、IL-17 信號(hào)通路、膀胱癌，如圖4 所示。IL-17 信號(hào)通路富集基因數(shù)和富集程度最高，癌癥信號(hào)通路的富集基因數(shù)量和富集程度均較高，腫瘤壞死因子信號(hào)通路富集程度較高，這3 條通路可能是桂枝茯苓丸治療卵巢癌的靶標(biāo)通路。

圖4 KEGG 通路富集分析結(jié)果圖Fig 4 KEGG pathway enrichment analysis result diagram

在Metascape 中對(duì)藥物和疾病的樞紐基因靶點(diǎn)進(jìn)行GO MF、GO CC、GO BP 三個(gè)部分的富集分析，P 值越小代表富集程度越高，篩選出每個(gè)部分富集程度最高的10 個(gè)結(jié)果，使用R 軟件進(jìn)行可視化，繪出氣泡圖，氣泡的大小代表富集基因的數(shù)量，氣泡的顏色代表富集程度，紅色代表富集程度高，綠色代表富集程度低，見圖5～7。由此得出，在分子生物學(xué)功能中，主要參與細(xì)胞因子受體結(jié)合、細(xì)胞因子活性、一氧化氮合酶調(diào)節(jié)活性、受體配體活性、受體調(diào)節(jié)活性、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合、RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、核心啟動(dòng)子結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、磷酸酶結(jié)合這些功能過程，見圖5；在細(xì)胞組分富集分析中，含有膜筏、膜微區(qū)、膜內(nèi)區(qū)、質(zhì)膜筏、囊腔、RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物、分泌顆粒腔、細(xì)胞質(zhì)囊腔、轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物、受體復(fù)合體10 個(gè)條目，見圖6；在生物過程中，藥物主要參與對(duì)脂多糖的反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、對(duì)活性氧的反應(yīng)、鎘離子對(duì)細(xì)胞的反應(yīng)、細(xì)胞遷移的正調(diào)控、細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的正向調(diào)節(jié)、細(xì)胞成分運(yùn)動(dòng)的正向調(diào)節(jié)、運(yùn)動(dòng)正調(diào)節(jié)這些過程，見圖7。

圖5 GO MF 分析結(jié)果top10Fig 5 Top10 of GO MF analysis result

圖6 GO CC 分析結(jié)果top10Fig 6 Top10 of GO CC analysis result

圖7 GO BP 分析結(jié)果top10Fig 7 Top10 of GO BP analysis result

2.6 分子對(duì)接結(jié)果

槲皮素、β-谷甾醇、山奈酚、常春藤皂苷元、兒茶素、鞣花酸、豆甾醇和花旗松素分別與選取的IL-6、MAPK1、VEGFA、AKT1、TP53、TNF 和CCL2 編碼的蛋白作為靶點(diǎn)進(jìn)行小分子-蛋白分子對(duì)接。結(jié)合自由能可以評(píng)估受體和配體之間的親和性，結(jié)合能小于0 時(shí)，認(rèn)為配體和受體可以自由結(jié)合［8］，且結(jié)合自由能越低，二者親和力越強(qiáng)，對(duì)接結(jié)果如表3。鞣花酸和TNF-α 蛋白親和力最強(qiáng)，將這一構(gòu)象進(jìn)行 可視化分析，結(jié)果見圖8。

圖8 TNF-α 蛋白和鞣花酸的分子對(duì)接構(gòu)象圖Fig 8 Molecular docking conformation of TNF-α protein with ellagic acid

表3 靶蛋白和藥物主要活性成分分子對(duì)接結(jié)合自由能表（kcal/mol）Tab 3 Free energy table of docking binding between target proteins and main active components of drugs（kcal/mol）

3 討論

卵巢癌屬于中醫(yī)婦科癥瘕范疇內(nèi)，瘀血凝聚是卵巢癌形成的原因之一，桂枝茯苓丸具有活血化瘀消癥的功效，在《金匱要略》中提到：“婦人宿有癥病，經(jīng)斷未及三月，而得漏下不止，胎動(dòng)在臍上者，為癥痼害……當(dāng)下其癥，桂枝茯苓丸主之”，可見仲景用此方治療婦科癥瘕。方中桂枝為君藥，溫通經(jīng)脈，調(diào)和營(yíng)衛(wèi)；茯苓利水滲濕，“血不利則為水”，既能化瘀利水，又能給瘀血以出路；桃仁能活血祛瘀，且有“苦以泄滯血，甘以生新血”一說，能祛瘀血而生新血；牡丹皮清熱涼血，活血化瘀；赤芍入血分，能清熱涼血，散瘀止痛。全方以攻邪為主，處方精妙，共奏活血化瘀，散結(jié)消癥之效。

根據(jù)拓?fù)浞治稣业搅斯鹬蜍咄璧闹饕钚猿煞郑謩e為槲皮素、β-谷甾醇、山奈酚、常春藤皂苷元、兒茶素、鞣花酸、豆甾醇、花旗松素。既往研究發(fā)現(xiàn)槲皮素能上調(diào)TP53 基因，促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡［9］，還能抑制PTK、PKC、MAPK 等多條信號(hào)通路［10，11］，抑制癌細(xì)胞周期進(jìn)程，能逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞的耐藥性，增加癌細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性［12］。β-谷甾醇能抑制癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡［13］，抑制腫瘤細(xì)胞對(duì)基底膜的黏附和侵入而阻止癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移［14］，且具有預(yù)防腫瘤和治療腫瘤的雙重作用［15］。山奈酚是黃酮類化合物，能夠抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［16］，通過激活p53 的內(nèi)在途徑誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡［17］，還能與雌激素受體結(jié)合產(chǎn)生抗腫瘤作用［18］。常春藤皂苷元能抑制卵巢癌瘤體的生長(zhǎng)［19］，具有對(duì)腫瘤細(xì)胞的膜分解活性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［20］。兒茶素包括表兒茶素、表沒食子兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯和表沒食子兒茶素沒食子酸酯，研究發(fā)現(xiàn)兒茶素能增加卵巢癌細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的敏感性［21］，損傷DNA 和減少DNA 合成抑制癌細(xì)胞增殖［22］，下調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，減少M(fèi)MP2 和MMP9 的分泌［23］。鞣花酸可抑制致癌物質(zhì)在體內(nèi)的代謝，與致癌物結(jié)合，使其不能與DNA 結(jié)合致癌，或直接與DNA 結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性抑制致癌物與DNA 結(jié)合，消除致癌劑毒性，降低癌細(xì)胞抗藥性，降低癌細(xì)胞中ATP 水平，阻斷細(xì)胞生殖周期［24］。豆甾醇衍生物能抑制卵巢癌細(xì) 胞 的 增 殖［25，26］?；?旗 松 素 抑 制 熱 休 克 蛋 白90 抑制癌細(xì)胞增殖［27］，對(duì)胃癌、肝癌、宮頸癌和盲腸癌有生長(zhǎng)抑制作用［28］，干預(yù)影響腫瘤細(xì)胞增殖的Wnt/β-catenin 通路［29］，阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡與P53/P21 途徑有關(guān)［30］。

根據(jù)核心靶點(diǎn)、KEGG 通路分析和已有研究，提示桂枝茯苓丸治療卵巢癌主要調(diào)節(jié)了腫瘤信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路、腫瘤壞死因子（TNF）信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路。癌癥信號(hào)通路包括MAPK信號(hào)通路、Wnt 信號(hào)通路、PI3k-Akt 信號(hào)通路、Jak-STAT 信號(hào)通路、鈣信號(hào)通路、PPAR 信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路、p53 信號(hào)通路、VEGF 信號(hào)通路等多條通路。IL-17 家族與受體結(jié)合后，可誘導(dǎo)IL-6 活化下游的信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖。局部高濃度的TNF-α 可以殺傷腫瘤細(xì)胞，但是緩慢釋放的TNF-α 可以激發(fā)血管生成因子和趨化因子等細(xì)胞因子，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的種植轉(zhuǎn)移和新生血管生成［31］，可 介 導(dǎo)NF-κB 信 號(hào) 通 路，抑 制 細(xì) 胞 凋 亡，MYC 是該通路的下游基因。有臨床試驗(yàn)觀察到33%的復(fù)發(fā)性卵巢癌患者使用TNF 抑制劑依那西普治療后腫瘤穩(wěn)定期延長(zhǎng)了22～40 周，降低了血清內(nèi)的IL-6 和CCL2［32］。MAPK1、MAPK8 屬于絲/蘇氨酸蛋白激酶，其亞族包括主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）、c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、p38 絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和細(xì)胞外信號(hào) 調(diào) 節(jié) 激 酶5［33］，MAPK1 參 與ERK1/2 信 號(hào) 通 路，MAPK8 參與JNK/SAPK 通路，雌激素與雌激素受體α 結(jié)合后可通過刺激血清效應(yīng)元件激活ERK1/2信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，ERK1/2 和JNK 通路的持續(xù)激活可增加癌細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的耐藥性，參與多種細(xì)胞因子對(duì)癌細(xì)胞的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移作用［34］。VEGFA 是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的一種，主要參與調(diào)控血管生成，VEGFA 間接激活PI3K［35］，PI3K 參與內(nèi)皮細(xì)胞微管的形成，也參與內(nèi)皮細(xì)胞增殖、存活、遷移和血管通透性的形成［36］。AKT1 是PI3K 信號(hào)通路下游的主要受體［37］，激活A(yù)KT1，合成并釋放基質(zhì)金屬蛋白酶使腫瘤血管通透性增加，血管擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞遷移。MMP9 是基質(zhì)金屬蛋白酶的一種，屬于明膠酶類，其能釋放生長(zhǎng)因子促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，可降解細(xì)胞外基質(zhì)幫助脫落的癌細(xì)胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)移［38］。IL6、CXCL8 和IL1B 是免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，卵巢癌患者血清和腹水內(nèi)存在高表達(dá)的IL6，與不良預(yù)后相關(guān)［39］，可導(dǎo)致對(duì)鉑類的耐藥性［40］，能間接激活PI3K/AkT 和P38MAPK 通路刺激癌細(xì)胞增殖［41］［42］［43］。JUN 是一種原癌基因，轉(zhuǎn)錄翻譯為c-jun蛋白，與FOS 轉(zhuǎn)錄翻譯的c-fos 蛋白形成的二聚體是轉(zhuǎn)錄因子AP-1 的組成部分，在體內(nèi)的表達(dá)量與癌細(xì)胞的分化程度成正相關(guān)［44］，可通過ERK1/2 被激活促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)［45］。PTGS2、MYC 屬于癌基因，PTGS2 和MYC 的產(chǎn)物PTGS2 蛋白和myc 蛋白能抑制細(xì)胞凋亡，抑制免疫監(jiān)視，促進(jìn)細(xì)胞增 殖，促 進(jìn) 血 管 生 成［46，47］。CCL2 參 與JAK2-Stat5和p38MAPK 通路，增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移［48］。TP53 是一種抑癌基因，TP53 基因突變?yōu)楦呒?jí)別子宮內(nèi)膜樣腺癌主要的分子生物學(xué) 特 點(diǎn)［49］，是 卵 巢 癌 復(fù) 發(fā) 的 獨(dú) 立 危 險(xiǎn) 因 素［50］。CASP3 是細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)通路的下游效應(yīng)分子，被激活的CASP3 是最終導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡的胱冬肽酶［51］。EGF 是一種細(xì)胞生長(zhǎng)因子，EGFR 為其受體，EGFR與配體EGF 結(jié)合并激活后，激活下游的MAPK 信號(hào)通路、PI3K/AKT 信號(hào)通路和JAK/STAT 通路，共同促進(jìn)癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移［52，53］。ESR1 是雌激素受體（ER）α 的編碼基因，雌激素能促進(jìn)ER 陽(yáng)性的卵巢癌myc 蛋白表達(dá)增加，進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖［54］。EGF 可通過激活MAPK 通路加強(qiáng)ERα 的促轉(zhuǎn)錄效應(yīng)［55］，ERα 與雌激素結(jié)合后與靶基因上的雌激素受體反應(yīng)元件結(jié)合調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄［56-57］。在GO 分析中，主要活性成分的生物功能、細(xì)胞組分和生物過程均涉及多種細(xì)胞分子和機(jī)體對(duì)細(xì)胞分子的反應(yīng)過程，藥物的分子生物學(xué)功能主要為調(diào)控配體受體的結(jié)合、調(diào)控細(xì)胞因子和受體的活性、底物的去磷酸化和調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄過程，細(xì)胞組分主要與細(xì)胞膜有關(guān)，在生物學(xué)過程方面主要影響細(xì)胞的遷移、由細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路、外界致癌物致病和炎癥反應(yīng)。綜上所述，桂枝茯苓丸治療卵巢癌可能主要通過調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子調(diào)控免疫系統(tǒng)、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，進(jìn)而抑制癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。

分別把桂枝茯苓丸主要活性成分和核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示結(jié)合自由能均低于0，即主要活性成分和核心靶點(diǎn)之間可以進(jìn)行自由結(jié)合。在鞣花酸-TNF-α 分子對(duì)接構(gòu)象圖中可以看出，配體羥基可與GLU116、CYS101 形成氫鍵作用，形成的氫鍵鍵長(zhǎng)分別為2.92、3.31。疏水殘基Pro100、Gln102、Glu104、Cys101、Ser99、Glu116、Lys98 形成的堆積作用有助于配體的結(jié)合。

惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展涉及多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)，人們?cè)谑褂矛F(xiàn)有靶向藥物治療的過程中逐漸發(fā)現(xiàn)了單靶點(diǎn)藥物的缺點(diǎn)，因此開始尋求多靶點(diǎn)藥物治療惡性腫瘤?；诰W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)桂枝茯苓丸治療卵巢癌的機(jī)制探討，充分體現(xiàn)了桂枝茯苓丸治療卵巢癌多組分、多靶點(diǎn)、多通路的治療特點(diǎn)，為今后進(jìn)一步的研究提供了參考意義。