亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的藥效學(xué)研究

        2021-10-28 12:27:56劉夢(mèng)麗林欣媛閆超雙王方園舒子璇賈曉益桂雙英
        關(guān)鍵詞:青風(fēng)藤巴布青藤

        劉夢(mèng)麗,林欣媛,閆超雙,王方園,舒子璇,賈曉益,桂雙英,2,3,4

        (1.安徽中醫(yī)藥大學(xué);2.安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院藥物制劑研究所;3.現(xiàn)代藥物制劑安徽省教育廳工程技術(shù)研究中心;4.藥物制劑技術(shù)與應(yīng)用安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,安徽 合肥 230012)

        類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一種系統(tǒng)性、自身免疫性疾病,主要病理表現(xiàn)為滑膜增生,血管翳形成,關(guān)節(jié)軟骨破壞等[1]。目前對(duì)RA的治療主要以藥物治療為主,治療藥物主要有非甾體抗炎藥、慢作用抗風(fēng)濕藥物、糖皮質(zhì)激素、生物制劑等[2]。上述藥物對(duì)于緩解臨床癥狀、控制病情進(jìn)展具有顯著優(yōu)勢(shì),但尚不能完全治愈和降低RA的致殘率[3-4]。近年來(lái),傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療RA愈來(lái)愈受到人們的重視。復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑由青風(fēng)藤和桂枝經(jīng)提取制備而成[5],青風(fēng)藤具有祛風(fēng)濕,通經(jīng)絡(luò),利小便的功效[6]。桂枝具有發(fā)汗解肌,溫通經(jīng)脈,助陽(yáng)化氣,平?jīng)_降氣的功效[7]。二者配伍共奏祛風(fēng)除濕、溫通經(jīng)脈、散寒止痛之功效。巴布劑具有載藥量大、使用方便、無(wú)污染等特點(diǎn)。因此,本實(shí)驗(yàn)采用完全弗氏佐劑(Complete Freund’s Adjuvant,CFA)左后跖皮內(nèi)注射誘導(dǎo)大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎(Adjuvant Arthritis,AA)模型,觀察復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑對(duì)AA大鼠的保護(hù)作用,為復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑的進(jìn)一步研究與開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年SD大鼠48只,SPF級(jí),雄性,體質(zhì)量160~200 g,購(gòu)自安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號(hào):SCXK(皖)2017-001,動(dòng)物倫理號(hào):AHUCM-rats-2020016。動(dòng)物均飼養(yǎng)于溫度(25±2)℃和濕度(50±10)%的屏障環(huán)境內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼養(yǎng)并自由飲水,每日光照12 h。實(shí)驗(yàn)前,適應(yīng)性飼養(yǎng)4 d以上。

        1.2 主要試劑完全弗氏佐劑(Sigma,批號(hào):SLBD0736);戊巴比妥鈉(北京化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):061222);青藤堿(純度≥98%,上海煦朗實(shí)業(yè)有限公司,批號(hào)SS105956);氫氧化鈉(江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司,批號(hào):20141025);多聚甲醛(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)20140206);無(wú)水乙醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):20140102);二甲苯(上海蘇懿化學(xué)試劑,批號(hào):20140806);蘇木精-伊紅染料(自制);青風(fēng)藤和桂枝飲片均購(gòu)于安徽亳州藥材市場(chǎng),經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)楊青山副教授鑒定均為合格飲片;聚丙烯酸鈉NP-700(日本昭和公司,批號(hào):0005488791);甘油(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):20160721);酒石酸(汕頭市達(dá)濠化工廠,批號(hào):920128);交聯(lián)聚維酮(PVPP,安徽山河藥用輔料股份有限公司,批號(hào):141006);甘氨酸鋁(上海麥克林生化科技有限公司,批號(hào):10042001);卡波姆(南京威爾化工有限公司,批號(hào):20110702);三乙醇胺(上海試劑三廠,批號(hào):0815);氮酮(鄭州津北化工有限公司,批號(hào):20140326);丙二醇(江西益普生藥業(yè)有限公司,批號(hào):20150501);聚維酮K-90(PVPK-90,廣東粵美化工有限公司,批號(hào):20160215);生理鹽水(開(kāi)開(kāi)援生制藥有限公司,批號(hào):14071734)。

        1.3 儀器設(shè)備自動(dòng)脫水機(jī)(湖北孝感,型號(hào):亞光ZT-12M);石蠟包埋機(jī)(湖北孝感,型號(hào):亞光YB-7B):切片機(jī)(德國(guó),型號(hào):Leica RM2135);切片漂烘儀(安徽合肥電子研究所科,型號(hào):力飛QP-B);顯微鏡(德國(guó),型號(hào):Olympus BXS1);數(shù)碼照相裝置(德國(guó),型號(hào):Olympus DP70)。

        1.4 方法

        1.4.1 復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑的制備 分別稱取青風(fēng)藤360 g,桂枝90 g,加入6倍量90%乙醇,回流提取3次,每次1.5 h。合并提取液,減壓濃縮,干燥得干浸膏[5]。取聚丙烯酸鈉NP-700 2.5 g、甘氨酸鋁0.08 g、PVPP 0.5 g、中藥干浸膏4.2 g和氮酮1.21 g加入11 g甘油中,攪拌均勻,作為A相;另取PVP-K90 0.8 g加20 g水溶解,加入酒石酸0.08 g充分溶解,作為B相;將B相加入到A相中,攪拌均勻,取適量灘涂于無(wú)紡布上,蓋上防黏層,壓制,即得[6]。

        1.4.2 青藤堿凝膠的制備 取4 g卡波姆940于純水中溶脹過(guò)夜,精密稱取4 g青藤堿,用乙醇和丙二醇充分溶解后加入卡波姆溶液中,不斷攪拌至均勻,用三乙醇胺調(diào)pH至7.0,加純水至200 g,即得2%的青藤堿凝膠[8]。

        1.4.3 AA模型建立 雄性SD大鼠48只,按體重大小編號(hào)后,隨機(jī)數(shù)表法抽取40只大鼠于左后跖皮內(nèi)注射CFA 0.1 mL制作AA模型[9],余下8只作為空白對(duì)照組,同法注射0.1 mL生理鹽水。

        1.4.4 分組與給藥 造模后第18天,用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)定大鼠非致炎側(cè)足爪容積,計(jì)算非致炎側(cè)足腫脹度(腫脹度=致炎后的足容積-致炎前的足容積[10]),根據(jù)大鼠足跖腫脹度將40只AA大鼠隨機(jī)分為5組,每組8只,即模型組,復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑高、中、低劑量組12.0、6.0、3.0 g/(kg·d)和陽(yáng)性藥組。給藥前24 h,用剃毛機(jī)剃去大鼠腹部3 cm×3 cm長(zhǎng)毛,從造模后第19天在腹部給藥,復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑高、中、低劑量組分別貼敷不同劑量的巴布劑[11],陽(yáng)性藥組涂抹青藤堿凝膠,模型組和空白對(duì)照組均貼敷空白基質(zhì)巴布劑,給藥1次/d,每次貼敷24 h,連續(xù)給藥7 d。

        1.5 觀察指標(biāo)

        1.5.1 一般情況 觀察大鼠體毛色澤,神志及活動(dòng)狀態(tài),飲食變化等情況。

        1.5.2 體重 分別于造模前(0 d)和造模后第7天、10天、13天、16天、19天、22天、25天稱取各組大鼠的體重并記錄。

        1.5.3 繼發(fā)側(cè)足爪腫脹度 分別于造模前(0 d)和造模后第7天、10天、13天、16天、19天、22天、25天用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)定大鼠非致炎側(cè)足爪容積。

        1.5.4 細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α 于末次給藥后12 h,腹腔3%戊巴比妥鈉麻醉,進(jìn)行腹主動(dòng)脈取血,靜置30 min后,離心10 min,轉(zhuǎn)速為3500 r/min,分離血清,-20 ℃冷凍保存,待測(cè)。IL-1β和TNF-α測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法,操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行。

        1.5.5 病理組織學(xué)檢測(cè) 于末次給藥12 h后,處死大鼠,取踝關(guān)節(jié)置于4%多聚甲醛固定,5%硝酸脫鈣,至用針刺入組織無(wú)阻力感為止。脫水、透明、石蠟包埋、切片及蘇木精-伊紅(HE)染色,顯微鏡下觀察踝關(guān)節(jié)組織滑膜細(xì)胞增殖情況、細(xì)胞侵蝕程度、血管翳形成以及軟骨表面光滑與否。

        HE染色法:石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟→水化→蘇木素染色10 min(染細(xì)胞核)→鹽酸酒精分化→伊紅染色(染細(xì)胞漿)→梯度酒精脫水→二甲苯透明→樹(shù)脂膠封片→光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠踝關(guān)節(jié)的病理表現(xiàn)。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料結(jié)果以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析[6]或重復(fù)測(cè)量方差分析方法,P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 一般情況造模成功的大鼠毛色較粗糙,精神倦怠,食量下降,大小便未見(jiàn)異常,注射佐劑部位的皮膚無(wú)潰爛,少許紅腫,大鼠行動(dòng)較困難,急性炎癥出現(xiàn)時(shí)以爬行為主,有舔足、抖動(dòng)的現(xiàn)象出現(xiàn)。待繼發(fā)側(cè)炎癥出現(xiàn)時(shí),右足紅腫,但程度輕于致炎側(cè);通過(guò)給予復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑和青藤堿凝膠治療后,上述癥狀有所緩解。

        2.2 體重在前10 d各組大鼠的體重均一致增加,從第10天開(kāi)始,除空白對(duì)照組外,其他致炎組體重均有所下降,至第16天,各致炎組大鼠體重明顯下降;自第19天開(kāi)始治療后,除模型組外,各治療組大鼠體重均有所增加,至第25天,各治療組大鼠體重明顯增加,見(jiàn)表1。

        表1 大鼠體重變化情況

        2.3 繼發(fā)側(cè)足爪腫脹度與空白對(duì)照組相比,在第7天和第10天,各致炎組的繼發(fā)側(cè)足腫脹度無(wú)顯著性差異(P>0.05),第16天,各造模組繼發(fā)側(cè)的足腫脹度顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明AA大鼠模型造模成功。從第19天測(cè)完繼發(fā)側(cè)足容積后開(kāi)始給藥,與模型組相比,給藥后第4天,復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑高劑量組和中劑量組大鼠繼發(fā)側(cè)足腫脹度明顯減輕(P<0.05);給藥后第7天,復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑各劑量組、陽(yáng)性藥組大鼠足腫脹度均顯著減輕(P<0.05,P<0.01),且復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑高劑量組的治療效果最好,優(yōu)于陽(yáng)性藥組,見(jiàn)表2。

        表2 大鼠繼發(fā)側(cè)足腫脹度變化情況

        2.4 細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α表達(dá)水平比較與空白對(duì)照組相比,模型組大鼠血清中細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組相比,復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑高、中、低劑量組IL-1β、TNF-α水平顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑高劑量組血清中細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α的水平和空白對(duì)照組沒(méi)有顯著性差異(P>0.05),說(shuō)明高劑量組可以有效降低炎癥大鼠血清中細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α的濃度至正常大鼠水平,且治療效果優(yōu)于中、低劑量組,見(jiàn)表3。

        表3 大鼠血清中IL-1β和TNF-α表達(dá)水平比較

        2.5 病理組織學(xué)檢測(cè)由HE染色結(jié)果可知,空白對(duì)照組大鼠均踝關(guān)節(jié)軟骨表面光滑,滑膜細(xì)胞排列平整,滑膜組織未見(jiàn)增生,無(wú)細(xì)胞侵蝕,無(wú)血管翳形成;模型組大鼠均出現(xiàn)大量血管翳,大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),關(guān)節(jié)軟骨受損嚴(yán)重;復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑高劑量組大鼠均少見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和血管翳,關(guān)節(jié)軟骨表面較光滑;復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑中、低劑量組和陽(yáng)性藥組大鼠均可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和血管翳,關(guān)節(jié)軟骨表面出現(xiàn)中度和輕度不等的受損,見(jiàn)圖1。

        圖1 各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理切片圖(HE,×200)

        3 討論

        AA大鼠模型現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于RA發(fā)病機(jī)制及其相關(guān)藥物防治作用的研究中,是一種經(jīng)典的免疫性炎癥模型[12-13]。CFA是一種強(qiáng)大而有效的致炎劑,注射后能夠引起局部明顯且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的炎癥痛,表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛等基本炎癥反應(yīng)特征,是建立慢性炎癥痛模型最常用的藥物[14-15]。本實(shí)驗(yàn)中,大鼠左后跖皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑后,大鼠毛色較粗糙,精神倦怠,行動(dòng)出現(xiàn)困難,并且可觀察到明顯的紅、腫癥狀,提示CFA成功誘導(dǎo)AA大鼠模型,為開(kāi)展復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑對(duì)AA大鼠的藥效學(xué)研究提供了保障。

        青藤堿是從傳統(tǒng)中藥青風(fēng)藤中提取分離的一種生物堿單體,具有抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫抑制等藥理作用[16-17]。目前,青藤堿作為有效成分治療風(fēng)濕和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,臨床上主要?jiǎng)┬陀衅瑒⒛c溶膠囊劑、緩釋片、靜脈注射劑等制劑[18]。青藤堿凝膠貼劑是將青藤堿制成經(jīng)皮給藥制劑,可避免口服吸收制劑的首過(guò)效應(yīng)及靜脈給藥易發(fā)生的不良反應(yīng),增加藥物在給藥部位的濃度積累并起到持續(xù)釋藥的作用。本實(shí)驗(yàn)前期選擇腹部、踝關(guān)節(jié)兩個(gè)部位進(jìn)行考察,由于大鼠足部病變部位面積小,無(wú)法滿足給藥需求,并且大鼠活動(dòng)性強(qiáng),無(wú)自覺(jué)意識(shí),容易撕咬、掙脫巴布劑,給藥時(shí)間不能達(dá)到要求最終選擇腹部進(jìn)行貼敷給藥。在腹部貼敷不僅有充足的給藥面積,同時(shí)加以膠帶固定還可以有效地減少大鼠撕咬、掙脫等情況出現(xiàn),保證有效給藥時(shí)間。此外,本實(shí)驗(yàn)選擇與青風(fēng)藤巴布劑具有相同給藥方式的青藤堿凝膠貼劑作為陽(yáng)性藥物所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更能直觀、科學(xué)的反映青風(fēng)藤巴布劑的治療優(yōu)勢(shì),為該劑型的后續(xù)研發(fā)工作提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。慢性炎癥疼痛涉及外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變,具有復(fù)雜的病理過(guò)程。大量研究表明TNF-α和IL-1β在RA發(fā)病期間發(fā)揮著不可替代的作用,TNF-α可促進(jìn)PEG、IL-1等釋放,使炎癥細(xì)胞進(jìn)入關(guān)節(jié)腔,損傷關(guān)節(jié)滑膜和關(guān)節(jié)軟骨[19];單核和巨噬細(xì)胞可以分泌IL-1β,其可誘導(dǎo)炎癥的發(fā)生,導(dǎo)致滑膜增殖,侵蝕軟骨,大量白細(xì)胞浸潤(rùn)[20-21]。本實(shí)驗(yàn)在前期課題組優(yōu)選出復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑藥材的最佳提取工藝和復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑的最佳基質(zhì)處方和制備工藝相關(guān)研究基礎(chǔ)上,在AA大鼠模型中考察了復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑的抗炎作用。結(jié)果表明復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑高劑量組可以有效地降低AA大鼠血清中TNF-α和IL-1β的濃度,并且療效優(yōu)于青藤堿凝膠(P<0.05,P<0.01),說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)制備的復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑在治療RA方面具有一定的療效。

        綜上,本研究采用CFA誘導(dǎo)AA大鼠模型證實(shí)復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑對(duì)RA有治療作用,且可能與其抑制TNF-α和IL-1β有關(guān),這將為復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

        猜你喜歡
        青風(fēng)藤巴布青藤
        基于色譜指紋圖譜和含量測(cè)定相結(jié)合的青風(fēng)藤質(zhì)量控制方法研究
        中草藥(2022年5期)2022-03-03 12:35:50
        知是荷香慢墨香 從「青藤白陽(yáng)」到海上畫(huà)派
        紫禁城(2020年6期)2020-07-24 09:24:24
        三葉青藤正丁醇部位化學(xué)成分的研究
        中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:08
        復(fù)方青風(fēng)藤巴布劑基質(zhì)處方的優(yōu)化
        中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:51
        青藤歡笑
        青風(fēng)藤功效與常用驗(yàn)方
        溫經(jīng)止痛巴布劑對(duì)痛經(jīng)模型小鼠的影響
        揮發(fā)油包合對(duì)溫臍巴布劑質(zhì)量的影響
        中成藥(2014年10期)2014-02-28 22:29:21
        青藤書(shū)屋聯(lián)語(yǔ)探疑
        青風(fēng)藤提取物對(duì)小鼠非特異性免疫功能的影響
        国产一级av理论手机在线| 精品香蕉久久久爽爽| 日本成人一区二区三区| 日本一区二区三区专区 | 国产福利精品一区二区| 亚洲AV无码不卡无码国产| 日本激情视频一区在线观看| 国产三级精品和三级男人| 色婷婷亚洲一区二区三区| 丝袜足控一区二区三区| 亚洲国产成人久久综合三区| 亚洲日本中文字幕高清在线| 日韩精品无码一本二本三本色| 国产精品高潮呻吟av久久无吗| 黑人一区二区三区在线| 一区二区三区四区在线观看日本| 国产精品v片在线观看不卡| 日韩激情小视频| 日本二区三区视频免费观看| 日本不卡一区二区高清中文| 亚洲女人天堂成人av在线| 成 人色 网 站 欧美大片在线观看 | 亚洲不卡电影| 精品国产日韩亚洲一区在线| 四虎影视久久久免费观看| 日韩av高清无码| 免费无码黄网站在线观看| 中文字幕日韩有码国产| 曰欧一片内射vα在线影院| 97色在线视频| 久久久亚洲一区二区三区| 欧美嫩交一区二区三区| 99精品视频在线观看免费 | 精品国产a毛片久久久av| 中国妇女做爰视频| 蜜臀av一区二区| 国产精品久久久久久久久免费观看 | 秋霞在线视频| 欧美老妇与禽交| 国产三级伦理视频在线| 国产精选自拍视频网站|