黃麗芳，劉斯萍，楊麗娜，陳方定，易 偉，楊志懷

（1.井岡山市拾野山蜜發(fā)展有限公司，江西 吉安 343604；2.江西省江咨工程咨詢有限公司，江西 南昌 330038；3.江西省養(yǎng)蜂研究所，江西 南昌 330045）

井岡山市拾野山蜜發(fā)展有限公司在生產(chǎn)中蜂成熟蜜時(shí)，對(duì)蜂場環(huán)境、養(yǎng)蜂生產(chǎn)、全自動(dòng)分裝的整個(gè)過程進(jìn)行了高標(biāo)準(zhǔn)、嚴(yán)要求的監(jiān)控。每年對(duì)生產(chǎn)的成熟蜜也進(jìn)行全面檢測，包括理化指標(biāo)，微生物指標(biāo)和十幾種抗生素。在檢測羥甲基糠醛含量的過程中發(fā)現(xiàn)，配制好的檢測用溶液貯存時(shí)間的長短，對(duì)檢測結(jié)果會(huì)有影響，為了確定影響的大小，找到規(guī)律和提高檢測精度的方法，我們做了以下實(shí)驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用樣品2 個(gè)，樣品1 是2020 年8 月6 日本企業(yè)生產(chǎn)的拾野山蜜（中蜂成熟蜜）；樣品2 是2019 年9 月8 日生產(chǎn)的拾野山蜜（中蜂成熟蜜）。

1.2 儀器設(shè)備和試劑

儀器設(shè)備：分光光度計(jì)（550 nm），水浴鍋。

試劑：巴比妥酸，對(duì)甲苯胺，異丙醇，冰乙酸，無氧蒸餾水。

1.3 試驗(yàn)方法

一次性配制出可以檢2 個(gè)樣品共30 次的巴比妥酸溶液和對(duì)甲苯胺溶液。配制方法如下：

巴比妥酸溶液：稱取500 mg 巴比妥酸于燒杯中，加70 mL 蒸餾水，置于熱水浴上加熱攪拌，使其溶解。冷卻后移入100 mL 容量瓶中，用蒸餾水定容到刻度。

對(duì)甲苯胺溶液：稱取10.0 g 對(duì)甲苯胺，溶解于約50 mL 的異丙醇中，溫?zé)崛芙夂笥卯惐嫁D(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，加入10 mL 冰乙酸，冷卻，再用異丙醇定容至刻度。溶液配制后貯存于暗處。

按以上方法再配2 次，將3 次配的溶液混合轉(zhuǎn)移至300 mL 容量瓶中，貯存至暗處。

以上溶液配制完成后，馬上按以下程序操作。

稱取10 g 樣品，溶于20 mL 無氧蒸餾水，并用無氧蒸餾水將樣品溶液移入50 mL 容量瓶中，定容至刻度，混勻。此樣液為待測液，應(yīng)立即進(jìn)行下列測定。

分別吸取2.0 mL 樣液于2 個(gè)試管中，并在每個(gè)試管中加入5.0 mL 對(duì)甲苯胺溶液，然后在一個(gè)試管中加入1 mL 無氧蒸餾水（作空白對(duì)照），另一個(gè)試管中加入1.0 mL 巴比妥酸溶液，兩試管立即振搖混合，于分光光度計(jì)550 nm 波長下用1 cm 比色皿以空白為對(duì)照測定樣品的吸光度，讀取達(dá)到的最大吸光度。

結(jié)果計(jì)算：羥甲基糠醛（HMF)按下式計(jì)算：

X=A×19.2

式中：X—每100 g 樣品中羥甲基糠醛的毫克數(shù)，mg/100 g；

A—吸光度。

按以上方法測出樣品1 和樣品2 的羥甲基糠醛含量后，做好記錄，從這時(shí)起，每隔24 h測一次，直至測量結(jié)果誤差越來越大為止。

2 結(jié)果與分析

表1 是溶液配制后貯存時(shí)間從0 至14 d，蜂蜜樣品1 和蜂蜜樣品2 的羥甲基糠醛檢測結(jié)果。

表1 溶液配制后不同天數(shù)羥甲基糠醛檢測結(jié)果

圖1 是以對(duì)甲苯胺和巴比妥酸溶液配制后貯存時(shí)間為橫坐標(biāo)，以蜂蜜中羥甲基糠醛含量為縱坐標(biāo)，形象地展示了隨著貯存時(shí)間的延長，兩個(gè)蜂蜜樣品的羥甲基糠醛重復(fù)檢驗(yàn)值的變化。

圖1 溶液配制后不同天數(shù)羥甲基糠醛檢測結(jié)果

從圖1 可以看出，剛配好的溶液檢測結(jié)果，一號(hào)樣偏高，二號(hào)樣偏低，而且誤差很大。這也證明了檢測標(biāo)準(zhǔn)“SN/T 0852-2000”要求對(duì)甲苯胺溶液配制后貯存于暗處24 h 后方能使用的原因。還可以看出從第3 天到第10 d，重復(fù)檢驗(yàn)誤差最少；10 d 后，測定的羥甲基糠醛值都有升高的趨勢。

3 結(jié)論

根據(jù)這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為提高蜂蜜中羥甲基糠醛檢測精度，防止溶液配制后貯存時(shí)間的影響。我們規(guī)定：對(duì)甲苯胺溶液要配制后貯存于暗處48 h 后方能使用，貯存時(shí)間超過10 d 就必須廢棄，不能再使用。