董 軍 周 琴 邵仲達(dá)

1 紹興市中醫(yī)院 浙江 紹興 312000

2 浙江震元股份有限公司 浙江 紹興 312000

前胡為傘形科植物白花前胡（Peucedanum praeruptorum Dunn）的根。功能降氣化痰，散風(fēng)清熱[1]。《本草綱目》中引用陶弘景語：“近道皆有，生下濕地，出吳興者為勝。”“吳興”即今浙江吳興，說明浙產(chǎn)前胡質(zhì)量在南北朝時就獲推崇。2020版《中華人民共和國藥典》（簡稱《藥典》）以白花前胡甲素、白花前胡乙素作為前胡含量測定的指標(biāo)，規(guī)定白花前胡甲素含量不得少于0.9%，白花前胡乙素含量不得少于0.24%[1]。由于前胡的種植范圍廣，各產(chǎn)地的氣候、自然環(huán)境有很大差異[2]，因此，不同產(chǎn)地前胡藥材質(zhì)量也可能存在差異?；诖?，本課題組收集了4個產(chǎn)地的前胡，用HPLC法測定不同產(chǎn)地前胡中白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量，以期為前胡的質(zhì)量評價和道地性研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 1260型高效液相色譜儀（安捷倫，美國），白花前胡甲素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111711-201904），白花前胡乙素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111904-201804），甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。前胡藥材分別產(chǎn)于浙江、貴州、安徽、四川，經(jīng)紹興市食品藥品檢驗研究院蔣永海主任中藥師鑒定為傘形科植物白花前胡的根。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備：精密稱取白花前胡甲素對照品、白花前胡乙素對照品適量，分別加甲醇制成0.102mg/ml和0.102mg/ml的對照品儲備液。

2.2 供試品溶液的制備：精密稱定各品種前胡藥材粉末（過3號篩）約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）10min，放冷，再稱定質(zhì)量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液5ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得。

2.3 色譜條件：色譜柱：Kromasil 100-5-C18（4.6mm×250mm，5μm），流動相：甲醇-水（75∶25），檢測波長：321nm，流速：0.8ml/min。柱溫35℃，進(jìn)樣量：10μl。

2.4 線性范圍考察：取“2.2”項下對照品儲備液，加甲醇制成含白花前胡甲素10.2、20.4、50.1、71.4、102μg/ml及白花前胡乙素 10.2、20.4、50.1、71.4、102μg/ml的系列混合對照品溶液，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定色譜峰面積，以對照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，計算回歸方程：白花前胡甲素：Y=29.36653X+14.6625（r＝0．99987），白花前胡乙素：Y＝26.05555X＋6.78927（r＝1.00000），結(jié)果表明：白花前胡甲素、白花前胡乙素均在10.2～102μg/ml范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1、表2。

表1 白花前胡甲素標(biāo)準(zhǔn)曲線

表2 白花前胡乙素標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 精密度實驗：取“2.2”項下對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定兩種對照品峰面積，得出白花前胡甲素、白花前胡乙素RSD分別為0.08%和0.34%。結(jié)果見表3、表4。

表3 白花前胡甲素精密度實驗

表4 白花前胡乙素精密度實驗

2.6 重復(fù)性實驗：按“2.3”項下方法平行制備6份供試品溶液（產(chǎn)地安徽），分別測定色譜峰面積，白花前胡甲素RSD為4.17%（n＝6）。白花前胡乙素RSD為4.99%（n＝6），結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。結(jié)果見表5。

表5 重復(fù)性實驗

2.7 加樣回收率實驗：取6份已知含量的樣品（產(chǎn)地安徽）各約0.25g，精密稱定，每份分別精密加入適量的白花前胡甲素、白花前胡乙素對照品，按供試品溶液制備及測定方法操作，進(jìn)行色譜分析，結(jié)果見表6。

表6 加樣回收率實驗結(jié)果

2.8 含量測定：分別精密吸取前胡樣品的供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法計算供試品白花前胡甲素、乙素的含量。結(jié)果見表7。

表7 前胡樣品中2種香豆素的含量

3 討論

作為一味常用中藥，前胡有非常悠久的使用歷史。過去前胡以野生為主，隨著臨床使用不斷擴(kuò)大，野生資源日益枯竭，目前使用多為栽培品。課題組前期應(yīng)用ITS2序列對4個產(chǎn)地的前胡進(jìn)行DNA條形碼鑒定研究，通過鄰接法(NJ)構(gòu)建系統(tǒng)聚類發(fā)育樹，從樹圖發(fā)現(xiàn)，4個產(chǎn)地的前胡聚為一個單枝，支持率為100%，很容易與其混偽品區(qū)別開。且4個產(chǎn)地前胡ITS2序列種內(nèi)變異極小，平均K2P遺傳距離幾乎為0。由此判斷，4個產(chǎn)地前胡無種內(nèi)變異，可能均為栽培品種。周潔等[3]通過比較12個產(chǎn)地前胡提取物對于HBSMSCs增殖的抑制作用，發(fā)現(xiàn)來自浙江淳安、浙江臨安昌化、浙江磐安和安徽寧國4個產(chǎn)地的抑制作用最佳。聶小忠等[4]對浙江、江西、安徽、重慶等地野生和栽培前胡質(zhì)量進(jìn)行比較，與本研究樣品采集地不同。

通過本次研究，筆者發(fā)現(xiàn)產(chǎn)地不同，前胡中所含白花前胡甲素、白花前胡乙素含量存在差異，比較而言，浙江產(chǎn)前胡質(zhì)量較好，白花前胡甲素、白花前胡乙素含量符合《藥典》規(guī)定，其他產(chǎn)地前胡存在白花前胡甲素、白花前胡乙素部分或全部低于《藥典》情況，從一方面驗證了浙產(chǎn)前胡的道地性。但結(jié)果是否具有普遍性，還有待進(jìn)一步的研究。