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        兔口腔鱗狀細(xì)胞癌的臨床診斷

        2021-10-25 07:15:20范志宇陳萌萌仇汝龍魏后軍宋艷華朱偉峰徐為中薛家賓
        中國獸醫(yī)雜志 2021年5期
        關(guān)鍵詞:角化箭頭家兔

        范志宇,陳萌萌,仇汝龍,胡 波,魏后軍,宋艷華,朱偉峰,徐為中,薛家賓,王 芳

        (江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病診斷與免疫重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,江蘇 南京 210014)

        2018年,安徽某兔場不間斷發(fā)現(xiàn)死亡毛兔口腔中有增生物、個(gè)體消瘦、顏面變形等情況。本試驗(yàn)對(duì)臨床患病兔進(jìn)行剖檢,通過病理組織石蠟切片方法,對(duì)兔口腔增生物進(jìn)行病理學(xué)檢查,并進(jìn)行了乳頭瘤病毒的檢測。綜合剖檢、病理切片和病原檢測結(jié)果,最終診斷病兔患口腔鱗狀細(xì)胞癌。本試驗(yàn)首次報(bào)道了家兔口腔鱗狀細(xì)胞癌,為相關(guān)疾病的診斷和研究提供了科學(xué)依據(jù)。

        1 疾病調(diào)查

        通過問詢家兔養(yǎng)殖場場主及養(yǎng)殖人員得知,在本養(yǎng)殖場及周邊5個(gè)兔養(yǎng)殖場均出現(xiàn)口腔腫瘤發(fā)病情況,發(fā)病兔均為毛兔,暫未發(fā)現(xiàn)有肉兔和獺兔發(fā)生該病,并且該病集中發(fā)生于兔毛長且有卷曲的毛兔,發(fā)病率在20%以上,相同養(yǎng)毛期內(nèi)兔毛短而直的毛兔未見發(fā)病?;疾∶媚挲g偏大,均為2歲以上。

        2 臨床癥狀

        通過問詢得知,當(dāng)發(fā)現(xiàn)毛兔出現(xiàn)口腔問題時(shí),腫瘤已經(jīng)相對(duì)較大,患病兔出現(xiàn)面部變形,精神沉郁,體溫正常,口腔增生物嚴(yán)重影響動(dòng)物正常采食,采食量減少,吞咽困難,流涎,食欲減退,體重減輕,逐漸消瘦衰竭死亡。

        3 大體剖檢病變

        對(duì)瀕死的患兔安樂死后剖檢,結(jié)果顯示,患兔發(fā)育完全,體形偏瘦;天然孔(口、鼻、肛門)黏膜呈粉紅色,毛細(xì)血管充盈時(shí)間正常;口腔增生物呈浸潤性生長致使面部腫脹、變形,口腔內(nèi)部皮膚多有壞死與出血;觸診增生物質(zhì)地較硬,有結(jié)締組織將其分為多葉,最大的大小為2.5 cm×2 cm×1 cm,切面灰白色。經(jīng)仔細(xì)檢查,頭部及身體其他部位未發(fā)現(xiàn)增生物。

        4 病原檢測

        設(shè)計(jì)PCR引物擴(kuò)增不同的乳頭瘤病毒DNA片段,E3-F:5′-ATGATAGGCAGAACTCCTAAG-3′和E3-R:5′-CAGTTACAACACTCCGGGCAC-3′,擴(kuò)增病毒基因片段E3,大小為 285 bp;E4-F:5′-ATGAGCCATGGACATTGC-3′和E4-R:5′-TTATAAGCTCGCGAAG-CC-3′,擴(kuò)增病毒基因片段E4,大小為639 bp;E5-F:5′-ATGGGCTTTAGTGACGTGTA-3′和E5-R:5′-CTA-GTCGACCCCCAGAACC-3′,擴(kuò)增病毒基因片段E5,大小為639 bp;P-450-F:5′-CTGGCAGAGCGCTTTG-GACCG-3′和450-R:5′-CTTGTCCTTAAACTCCCGCAAAG-3′,擴(kuò)增兔細(xì)胞色素P-450,大小為159 bp,作為有效擴(kuò)增的對(duì)照。反應(yīng)體系:10×PCR Buffer(Mg2+Plus)2.5 μL,上下游引物各(10 μmol/L)1 μL,dNTP(10 mmol/L)2 μL,TaqDNA聚合酶0.5 μL,抽提物5 μL,加水補(bǔ)至25 μL。擴(kuò)增程序:94 ℃ 5 min,然后進(jìn)行32次循環(huán)(94 ℃ 30 s,53 ℃ 30 s,72 ℃ 40 s),72 ℃ 5 min,4 ℃保溫。

        提取增生組織RNA,反轉(zhuǎn)錄為cDNA,以此為模板,利用針對(duì)乳頭瘤病毒的特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳,結(jié)果為陰性(圖1),結(jié)合臨床初步判斷該病不是乳頭瘤病毒感染所致。

        圖1 PCR擴(kuò)增乳頭瘤病毒不同DNA片段M:DNA marker(DL 2 000);1~4:以增生物活檢DNA 為模板分別擴(kuò)增病毒核酸E3、E4、E5和兔細(xì)胞色素P450;5~8:以乳頭瘤病毒DNA為模板分別擴(kuò)增病毒E3、E4、E5和兔細(xì)胞色素P450

        5 病理切片觀察

        對(duì)患病家兔耳緣靜脈注射空氣安樂死后,在兔口腔患部進(jìn)行手術(shù)去除增生物,觀察其形態(tài),并取增生物進(jìn)行常規(guī)病理組織學(xué)制片,石蠟包埋,切片厚 5 μm,H.E.染色,采集數(shù)碼圖像。結(jié)果顯示,該增生物為鱗狀細(xì)胞癌,癌組織浸潤性生長,形成大小不等,形狀不同的癌細(xì)胞團(tuán)塊,即癌巢,較大的癌巢中心部分發(fā)生角化,即癌珠;腫瘤細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯異型性,即瘤細(xì)胞排列紊亂,瘤細(xì)胞及其核呈多形性。病變中可見少量明顯的角化不全性角質(zhì)囊腫(中插彩版圖2A黃色箭頭);也可見未非角化型鱗狀細(xì)胞癌小葉,周圍上皮細(xì)胞呈柵欄狀排列(中插彩版圖2B黑色箭頭),中央呈透明細(xì)胞表現(xiàn)(中插彩版圖2B紅色箭頭);可見嗜堿性核內(nèi)包涵體。

        圖2 兔口腔腫瘤H.E.染色切片觀察 (200 ×)A:角化型鱗狀細(xì)胞癌小葉;黃色箭頭:癌巢中可見少量角質(zhì)化不全性角質(zhì)囊腫;B:非角化型鱗狀細(xì)胞癌小葉;黑色箭頭:周圍上皮細(xì)胞呈柵欄狀排列;紅色箭頭:癌小葉中央呈透明細(xì)胞表現(xiàn)

        6 討論

        口腔腫瘤即為口腔頜面部腫瘤,有惡性和良性之分[1]。最常見的口腔惡性腫瘤為鱗狀上皮細(xì)胞癌,占口腔惡性腫瘤的90%,其作為全身惡性腫瘤中常見的腫瘤類型,不僅會(huì)造成面部畸形,同時(shí)也由于腫瘤位置的血液循環(huán)以及淋巴回流豐富,因此具有較高的轉(zhuǎn)移率[2-3]。在犬貓臨床中口腔腫瘤發(fā)生的概率較高,占所有腫瘤的6%[4-6]。

        隨著家兔養(yǎng)殖技術(shù)的發(fā)展,一些品種的家兔(如:曾祖代或祖代種兔、毛兔、寵物兔等)飼養(yǎng)時(shí)間也逐步延長,可能發(fā)生與其他動(dòng)物類似的腫瘤疾病的概率相對(duì)增加。研究顯示,家兔腫瘤疾病發(fā)病率為0.5%~2.7%,常見的家兔腫瘤包括子宮腺癌、乳腺腫瘤和皮膚瘤等[7],口腔腫瘤也有被報(bào)道,但發(fā)病率似乎較低,多為病毒感染引起的良性腫瘤[1,8-9],國內(nèi)外尚未見關(guān)于兔惡性口腔腫瘤-鱗狀細(xì)胞癌的報(bào)道[7,10-12]。家兔腫瘤的發(fā)病率受年齡因素的影響很大,由于絕大多數(shù)商品兔和實(shí)驗(yàn)兔都是在2歲以前就被利用,處于老年期的家兔才是腫瘤的易發(fā)年齡,所以一般兔場很少見家兔腫瘤的發(fā)生。在實(shí)際生產(chǎn)中,毛兔養(yǎng)殖時(shí)間通常在2年以上,由于毛兔養(yǎng)殖時(shí)間周期長,發(fā)生腫瘤的概率也大大增加。

        本試驗(yàn)首次報(bào)道了兔口腔鱗狀細(xì)胞癌。本試驗(yàn)結(jié)果提高了人們對(duì)動(dòng)物腫瘤病,特別是兔口腔惡性腫瘤的認(rèn)識(shí),為未來相關(guān)疾病的診斷和研究提供了科學(xué)依據(jù)。然而,本病產(chǎn)生的具體原因不明,推測可能與飲食、微生物、遺傳因素及品種等因素有關(guān)[13-14]。在調(diào)研中發(fā)現(xiàn),養(yǎng)殖戶在選育過程中更偏愛卷毛的兔子,選育的卷毛兔更容易得口腔惡性腫瘤,這可能與卷毛兔自身存在基因缺陷有關(guān)。在江蘇鹽城等地調(diào)研中也發(fā)現(xiàn)類似病例,均為毛兔發(fā)病,在養(yǎng)毛期相同的情況下,易發(fā)病兔的被毛比正常毛兔被毛長,且前端易卷曲,也進(jìn)一步證實(shí)了該病的發(fā)生和遺傳因素可能有較大關(guān)聯(lián)。

        目前,口腔腫瘤的臨床治療中通常采取包括手術(shù)、化學(xué)藥物、放射、加熱治療以及營養(yǎng)治療等具有針對(duì)性的治療方式,并在綜合治療原則的基礎(chǔ)上,將各個(gè)治療方法進(jìn)行有效的聯(lián)合[2]。由于鱗狀細(xì)胞癌的具體病因還不清楚,暫時(shí)還沒有行之有效的預(yù)防手段,在本試驗(yàn)中,考慮到經(jīng)濟(jì)效益的因素,為了預(yù)防腫瘤的發(fā)生以及減小腫瘤疾病對(duì)家兔的影響,建議養(yǎng)殖場加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,在選育過程中,選擇沒有腫瘤的母兔進(jìn)行繁殖,如遇到有腫瘤的母兔應(yīng)及時(shí)停止繁育并淘汰。對(duì)于寵物兔而言,由于大部分品種有毛兔的遺傳背景,且飼養(yǎng)時(shí)間相對(duì)較長,參考犬、貓等寵物的相關(guān)報(bào)道[4,15],建議在沒有轉(zhuǎn)移病灶的情況下,第一時(shí)間手術(shù)切除全部腫瘤,這樣對(duì)治愈該病可起到積極作用,也可在確診后進(jìn)行安樂死。

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