張艷茹，菅艷艷，寶山，巴乙拉

（1包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 包頭；2內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特）

0 引言

哈日阿嘎如由35味藥組成，其中含有進(jìn)口沉香、豆蔻、旋復(fù)花、木棉花、沒(méi)藥、肋柱花、牦牛心、馬錢子(制)味等。具有調(diào)“赫依”熱“粘”交爭(zhēng)。哈日阿嘎如在臨床中多用于治療“山川間熱”“赫依”、熱兼盛，胸滿氣短，干咳少痰，游走刺痛，心悸失眠，譫妄等。哈日阿嘎如中的主要藥物之一是梔子，其含有環(huán)烯醚萜類、三萜類、黃酮類化合物、多糖類等化合物[1-3]。而梔子的主要成分為梔子苷[4,5]，本文以梔子苷作為測(cè)定指標(biāo)，建立了HPLC法測(cè)定梔子中梔子苷的含量，結(jié)果表明HPLC法的操作簡(jiǎn)潔、靈活度較高，而且專屬性強(qiáng)，處方中其他成分均未對(duì)梔子苷的測(cè)定造成相關(guān)的干擾[6]。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

U3000型高效液相色譜儀；隔膜真空泵(鞏義市英峪儀器廠)；KQ-250DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Heal Force NW15UV型超純水系統(tǒng)；ADVENTURERTM型 電 子 天 平（萬(wàn) 分 之 一）；Ohaus Discovery型電子天平（十萬(wàn)分之一）；FW400A型多功能粉碎機(jī)（材茂科技有限公司）。

1.2 試劑材料

梔子苷對(duì)照品（批號(hào)：110749-201919），由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；供試品三批（批號(hào)：202011、202012、202013），由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院提供，自制樣品一批由包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心制；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Alltima C18柱(250mm×4. 6 mm，5μm)；流動(dòng)相的選擇：乙腈-水溶液(15:85)；柱溫：33℃；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm；理論塔板數(shù)：按梔子苷計(jì)不得低于1500。

2.2 配制對(duì)照品溶液

取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含46.5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 配制供試品溶液

準(zhǔn)確稱量約1.0g的供試品粉末，置具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確添加25ml的甲醇，稱量，超聲處理30min（功率250kW，頻率40kHz），冷卻后，再次稱量，對(duì)于已經(jīng)損失的重量使用甲醇進(jìn)行補(bǔ)足處理，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。

2.4 配制陰性對(duì)照溶液

以不含梔子的陰性供試品按處方配比制備陰性對(duì)照液。

2.5 提取方法的選擇及提取時(shí)間的考察

參考文獻(xiàn)[7]“梔子”項(xiàng)下，以甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲處理（功率90Hz），試驗(yàn)中考察了不同提取時(shí)間（超聲10min、20min、30min、40min等）對(duì)提取效率的影響，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 梔子苷提取時(shí)間考察

從表中數(shù)據(jù)可見(jiàn)，超聲處理30min時(shí)，在供試品中提取梔子苷的含量最高，故將提取時(shí)間定為30min。

2.6 專屬性

準(zhǔn)確稱量陰性對(duì)照，供試品和對(duì)照品溶液各10μl，將其注入色譜儀并記錄色譜圖。

在同一保留時(shí)間8.0min處，在相同的保留時(shí)間內(nèi)，供試品在梔子苷色譜圖中具有相同的梔子苷吸收峰，陰性對(duì)照在梔子苷相同保留時(shí)間內(nèi)無(wú)吸收峰，提示，該方法具有較好的特異性、專屬性。

2.7 線性關(guān)系考察

取梔子苷對(duì)照品約7.3mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加純甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻(梔子苷實(shí)際濃度為0.0734mg/ml)，然后吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl分別進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)梔子苷的進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果梔子苷在進(jìn)樣體積在1-20μl范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y=0.135223X-0.07817，r2=0.9996。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

一份相同的供試品溶液分別在0h、2h、4h、5h、6h、7h、8h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同時(shí)間測(cè)定供試品中梔子苷的峰面積積分值

從表中數(shù)據(jù)可見(jiàn)，梔子苷在8h內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

2.9 精密度試驗(yàn)

取同一份供試品0.10036g，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定梔子苷峰面積積分值，測(cè)定供試品含量，RSD為1.08%，液相色譜儀精密度良好。

2.10 重復(fù)性試驗(yàn)

按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，用同一批樣品配制供試品溶液6份，測(cè)得了峰面積積分值，并計(jì)算了含量。平均含量為0.9985mg/g，RSD為1.80%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.11 加樣回收試驗(yàn)

取供試品6份，均約0.5g，精密稱定，6份樣品中分別加入10 ml用甲醇配制的梔子苷對(duì)照溶液(梔子苷濃度：0.0465mg/ml)，測(cè)定各樣品的含量，按含量測(cè)定法計(jì)算回收率。結(jié)果表明，平均加樣回收率為95.34%(n=6),RSD為1.95%，本方法準(zhǔn)確度較好。

2.12 樣品含量測(cè)定

取樣品以及自制品各約1.0g，精密稱定配制成供試品溶液，注入10μl，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算梔子苷含量。數(shù)據(jù)顯示，三批樣品的含量1.62mg/g與自制樣品梔子苷含量1.00mg/g，這說(shuō)明梔子藥材的質(zhì)量，對(duì)成品中梔子苷的含量影響較大。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取梔子苷對(duì)照品溶液在200-600nm波長(zhǎng)處進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明，梔子苷在238nm波長(zhǎng)處吸收最大，與文獻(xiàn)[7]“梔子”項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定一致,故選擇238nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 含量限度的測(cè)定

三批供試品中梔子苷的含量最低為1.55mg/g，自制樣品中梔子苷的平均含量為1.00mg/g，實(shí)驗(yàn)中用相同方法對(duì)生產(chǎn)用相同梔子藥材進(jìn)行了含量測(cè)定，測(cè)得梔子苷的含量為30.13mg/g（3.013%）。根據(jù)本品處方量折算，理論上每1g供試品含梔子藥材20/704=0.0284g，本品梔子苷的含量=0.0284g/g×1000×3.013%=0.856mg/g。再根據(jù)文獻(xiàn)[7]“梔子藥材的梔子苷的含量限度不得少于1.8%”，還考慮不同產(chǎn)地木香藥材質(zhì)量差異，下浮20%[8-10]，木香烴內(nèi)酯含量低限=0.0284g×1000×1.8%×80%=0.409mg/g。結(jié)合實(shí)際測(cè)定結(jié)果最低含量為1.55mg/g，綜合評(píng)判，確定本品以木香烴內(nèi)酯計(jì)不得少于0.50mg。