何維敏，李筱雯，況世昌，王 純，李 昆，王喜亮，肖運(yùn)才，李自力，周祖濤

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院/湖北省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢 430070；2.湖北華大瑞爾科技有限公司/生物發(fā)酵飼料湖北省工程研究中心，武漢 430070）

規(guī)?；B(yǎng)豬場多采用早期斷奶技術(shù)提高母豬繁殖效率，但仔豬早期斷奶常出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，表現(xiàn)為機(jī)體免疫力低下、易腹瀉、生長遲緩甚至死亡［1］。生產(chǎn)實(shí)踐中，以保健促生長為目的的抗生素類飼料添加劑（AGPs）在提高動物生產(chǎn)性能、預(yù)防疾病方面效果顯著［2］。但抗生素濫用導(dǎo)致動物腸道菌群紊亂，使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，殘留造成環(huán)境污染，對人類健康造成很大威脅。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第194號公告指出“自2020年1月1日起，退出除中藥外的所有促生長類藥物飼料添加劑品種；自2020年7月1日起，飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長類藥物飼料添加劑（中藥類除外）的商品飼料”。因此，研發(fā)綠色、健康促生長的飼料添加劑成為研究重點(diǎn)。中藥經(jīng)益生菌發(fā)酵處理，可降解或轉(zhuǎn)化中藥的某些活性成分，提高中草藥的藥用成分，有利于動物的代謝吸收，提高飼料消化和利用率［3］。本試驗(yàn)將發(fā)酵中藥（組方：白術(shù)、白芍、黨參、茯苓）和微生態(tài)制劑聯(lián)合，添加在斷奶仔豬日糧中，對斷奶仔豬生長性能、血液生化指標(biāo)和抗氧化能力進(jìn)行測定，為開發(fā)一種用于斷奶仔豬的綠色促生長飼料添加劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

發(fā)酵中藥：經(jīng)薄層色譜鑒定合格的發(fā)酵中藥合劑，主要成分：白術(shù)、白芍、黨參、茯苓。微生態(tài)制劑：枯草芽孢桿菌TL，有效活菌數(shù)2.0×1010CFU/g，發(fā)酵中藥和微生態(tài)制劑由湖北華大瑞爾科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取23日齡斷奶的平均體重為（7.744±0.446）kg的杜×長×大三元雜交健康仔豬共120頭，隨機(jī)分為4個組：對照組（基礎(chǔ)日糧）、抗生素組（基礎(chǔ)日糧+0.075 g/kg金霉素+0.015 g/kg恩拉霉素+0.1 g/kg喹乙醇）、試驗(yàn)Ⅰ組（基礎(chǔ)日糧+0.3%發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑+0.15 g/kg枯草芽孢桿菌TL）、試驗(yàn)Ⅱ組（基礎(chǔ)日糧+0.3%發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑+0.3 g/kg枯草芽孢桿菌TL），每組3個重復(fù)，每個重復(fù)10頭仔豬。飼喂時間為仔豬保育階段，具體從23日齡開始到52日齡結(jié)束，共30 d。

1.3 試驗(yàn)日糧

仔豬前期乳豬料和后期仔豬料由湖北加益加生物科技有限公司提供，其乳豬料為粉料，仔豬料為顆粒料。每天飼喂前將抗生素、發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑和微生物制劑分別與基礎(chǔ)日糧充分混合后使用，保證現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.4 飼養(yǎng)管理

仔豬斷奶后第1周飼喂乳豬料，斷奶后第8～11天將乳豬料和仔豬料分別按照4∶1、3∶2、2∶3、1∶4的比例進(jìn)行混合飼喂，逐步將乳豬料過渡到仔豬料。每天飼喂仔豬4次，分別是8：00、12：00、16：00和20：00，計(jì)量不限料（以料槽無剩余料為原則）并按欄記錄飼料投喂量；采用鴨嘴式自動飲水器自由飲水。期間免疫接種程序按規(guī)?；i場養(yǎng)殖程序進(jìn)行。

1.5 指標(biāo)測定及方法

1.5.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)測定 試驗(yàn)期間，每天記錄各組采食量和仔豬數(shù)，觀察豬群的健康狀況。在試驗(yàn)第1天和第30天8：00分別對每頭仔豬空腹稱重。仔豬平均體重、平均日增重、平均日釆食量、料肉比和腹瀉率的計(jì)算參照文獻(xiàn)［4］。

1.5.2 血液采集與處理 在試驗(yàn)第30天8：00時（空腹），各組按30%比例隨機(jī)進(jìn)行前腔靜脈采血，每頭豬采血5 mL，迅速倒入真空促凝管中，將促凝管血樣傾斜于室溫下靜置2 h，4℃保存待血清滲出后，4℃下3 000 r/min離心15 min，分裝血清，-20℃保存待檢。

1.5.3 血清生化指標(biāo)測定 血清生化指標(biāo)包括總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、葡萄糖（GLU）、肌酐（CREA）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHOL）和血清尿素氮（BUN），檢測方法參照文獻(xiàn)［5］。

1.5.4 血清抗氧化指標(biāo)測定 抗氧化指標(biāo)包括總超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px），試劑盒購自南京建成生物工程研究所，測定方法按照試劑盒說明書操作。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，利用ANOVA、LSD進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，用Ducan法做多重比較。試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）”形式表示，P＜0.01表示差異極顯著，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬生長性能的影響

在試驗(yàn)開始后第1天和第30天對斷奶仔豬生產(chǎn)性能相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果見表1。由表1可知，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組平均日采食量和抗生素組持平，對照組最低，各組間差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組平均日增重比對照組提高了18.70%（P＜0.01），比抗生素組降低2.56%（P＞0.05）。與對照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組料肉比顯著降低（P＜0.05），與抗生素組相比差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組的腹瀉率較對照組分別極顯著降低了87.20%和89.63%（P＜0.01），與抗生素組相比分別極顯著降低了70.0%和75.71%（P＜0.01）。

表1 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

2.2 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響

斷奶仔豬血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果見表2。由表2可知，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組血清TP含量高于抗生素組和對照組，但差異不顯著。試驗(yàn)Ⅰ組血清ALB較對照組、抗生素組和試驗(yàn)Ⅱ組提高了11.76%（P＜0.05）、9.38%和10.53%。血清GLU含量上，試驗(yàn)Ⅰ組比對照組和抗生素組分別提高329.6%（P＜0.01）和139.8%（P＜0.01），試驗(yàn)Ⅱ組較對照組和抗生素組分別提高303.5%（P＜0.01）和125.2%（P＜0.01）。試驗(yàn)Ⅱ組CHOL含量最低，與其他各組差異極顯著（P＜0.01）。與對照組和抗生素組相比，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組血清TG含量均極顯著降低，分別降低32.83%、34.78%和43.28%、44.93%（P＜0.01）。與抗生素組對比，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組血清BUN含量分別降低了32.89%（P＜0.05）和36.60%（P＜0.01）。血清CREA含量，以試驗(yàn)Ⅱ組最低，與抗生素組和試驗(yàn)Ⅰ組差異顯著（P＜0.05），與對照組差異不顯著。

表2 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響

2.3 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)結(jié)果見表3。由表3可知，與對照組和抗生素組相比，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組血清T-SOD含量均上升，分別提高了17.75%（P＜0.01）、22.29%（P＜0.01）和32.25%（P＜0.01）、37.76%（P＜0.01）。血清MDA以試驗(yàn)Ⅱ組最低，試驗(yàn)Ⅰ組與抗生素組差異顯著（P＜0.05），與對照組差異不顯著。試驗(yàn)Ⅱ組血清中GSH-Px含量高于對照組和抗生素組，分 別 提 高 了20.45%（P＜0.01）和29.15%（P＜0.01），試驗(yàn)Ⅰ組較對照組和抗生素組分別提高了16.18%（P＜0.05）和24.58%（P＜0.01）。

表3 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

在動物生產(chǎn)中，中草藥和益生菌作為飼料添加劑在促進(jìn)機(jī)體生長、防治疾病等方面具有良好的作用。發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑是將發(fā)酵中藥和益生菌有機(jī)結(jié)合，具有協(xié)同作用，更能促進(jìn)動物生長。王大力等［6］在保育豬日糧中添加中藥微生態(tài)制劑，發(fā)現(xiàn)能夠提高豬的平均日增重。吳道義等［7］在斷奶仔豬日糧中分別添加0.6%和1.2%中藥微生態(tài)制劑，在飼料中添加中藥微生態(tài)制劑能明顯提高斷奶仔豬的平均日增重，降低料肉比和腹瀉率。張鵬［8］在斷奶仔豬日糧添加發(fā)酵板藍(lán)根，當(dāng)添加量為0.3%時，相比對照組，仔豬采食量增加了8.9%，日增重提高33.9%，料重比降低18.4%，腹瀉率降低57.0%。方磊涵等［9］利用乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌發(fā)酵中藥復(fù)方組方，在斷奶仔豬日糧中添加2%中藥復(fù)方發(fā)酵劑，與對照組相比，平均日增重提高31.98%，采食量無差異，料重比降低24.85%，腹瀉率降低52.51%。結(jié)果表明，在斷奶仔豬日糧中添加0.3%發(fā)酵中藥和0.15 g/kg枯草芽孢桿菌TL，即本試驗(yàn)Ⅰ組，在平均日采食量、平均日增重、料肉比及腹瀉率方面效果較好，好于試驗(yàn)Ⅱ組，與抗生素作用相當(dāng)。試驗(yàn)Ⅱ組效果不佳，可能是添加的枯草芽孢桿菌TL添加量過大，益生菌與宿主競爭營養(yǎng)成分，同時斷奶仔豬的消化系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，益生菌數(shù)量過大增加腸胃負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致消化吸收緩慢，促生長效果不理想。適量的中藥微生態(tài)制劑可以提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能，促生長效果與抗生素相當(dāng)。

3.2 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響

血液生化指標(biāo)能反映出動物機(jī)體新陳代謝、營養(yǎng)物質(zhì)吸收利用情況及某些組織機(jī)能的生理狀態(tài)。血清TP和ALB含量反映了機(jī)體蛋白質(zhì)的吸收、合成和分解情況，同時也反映出了機(jī)體免疫力狀況［10］。試驗(yàn)Ⅰ組血清TP和ALB含量均高于對照組和抗生素組，表明發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑可促進(jìn)斷奶仔豬對蛋白質(zhì)的消化和吸收，改善肝功能，提高動物機(jī)體免疫力。血液中GLU含量反映動物機(jī)體對飼料淀粉的吸收和代謝情況。GLU水平反映腸道吸收血液的葡萄糖的量，與日糧中碳水化合物的消化率直接相關(guān)。試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組的GLU含量均顯著高于對照組和抗生素組，表明發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑可增強(qiáng)機(jī)體對葡萄糖的轉(zhuǎn)化和利用效率。血液中CHOL和TG含量反映仔豬體內(nèi)脂類代謝的情況，當(dāng)TG含量降低時表明脂肪的沉積下降［11］。試驗(yàn)Ⅱ組血清CHOL顯著低于其他各組，試驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ組血清TG含量均顯著低于對照組和抗生素組，表明發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑可改善仔豬機(jī)體脂肪代謝，使脂肪氧化增加，為機(jī)體提供合成蛋白質(zhì)所需的能量，促進(jìn)仔豬生長。血清BUN與動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況有關(guān)，其濃度下降表明平衡良好，蛋白質(zhì)合成大于分解，組織中蛋白質(zhì)沉積增加。試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組血清BUN含量降低，與抗生素組差異顯著，說明發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑可促進(jìn)斷奶仔豬體內(nèi)蛋白質(zhì)合成代謝。斷奶仔豬日糧中添加發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑，血液中TP、ALB和GLU含量升高，CHOL、TG和BUN含量降低，說明發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑可促進(jìn)斷奶仔豬體內(nèi)蛋白質(zhì)、脂類的合成代謝及吸收利用。

3.3 發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑對斷奶仔豬抗氧化指標(biāo)的影響

動物體內(nèi)的GSH-Px和SOD是體內(nèi)細(xì)胞清除自由基的主要生物酶［7］。GSH-Px能特異性地催化還原型谷胱甘肽對H2O2的還原反應(yīng)，減少H2O2對膜脂的氧化損傷，進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整。SOD作為主要的內(nèi)源性抗氧化劑，能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。MDA是生物體內(nèi)自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，引起蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變異，損傷生物膜結(jié)構(gòu)。臨床上GSH-Px、SOD活性和MDA含量是衡量機(jī)體抗氧化能力主要指標(biāo)［12］。當(dāng)機(jī)體發(fā)揮清除氧自由基的作用時，SOD、GSH-Px活性升高，MDA含量降低［13］。張中橋［14］將復(fù)方制劑（魚腥草、黃芪、刺五加、厚樸等）添加于25日齡斷奶仔豬日糧中，飼喂28 d后中藥復(fù)方組SOD含量比抗生素組和空白組，分別提高10.6%和18.31%。馮志華等［15］用地衣芽孢桿菌發(fā)酵紅花，發(fā)現(xiàn)10、20和30 g/L的紅花發(fā)酵液對羥自由基的清除率比相應(yīng)紅花水浸液分別提高了37.7%、48.8%和61.4%。試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組血液中T-SOD和GSH-Px活性顯著高于對照組和抗生素組，試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組血液中MDA含量顯著低于抗生素組，表明發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑可提高動物機(jī)體抗氧化能力。

4 結(jié)論

在斷奶仔豬日糧中添加0.3%發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑和0.15 g/kg枯草芽孢桿菌TL，在平均日采食量、平均日增重、料肉比及腹瀉率方面效果較好，與抗生素作用相當(dāng)。發(fā)酵中藥微生態(tài)制劑在促進(jìn)脂肪代謝、提高機(jī)體抗氧化能力方面作用明顯。