王希，張勇峰，段會娟

河南科技大學第一附屬醫(yī)院病理科，河南 洛陽4710030

胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，全球范圍內，胃癌的發(fā)病率居惡性腫瘤第四位，病死率居惡性腫瘤第二位。目前，胃癌的臨床治療以手術切除病灶聯(lián)合化療等綜合治療為主，但胃癌的臨床治療水平仍有待進一步提高。近年來，精準靶向治療是胃癌臨床研究的重點，免疫療法已成為臨床研究的熱點。叉頭框蛋白P3（forkhead box P3，F(xiàn)OXP3）等免疫細胞及其相關因子的表達水平與胃癌的發(fā)生發(fā)展、轉移與預后密切相關，因此，調節(jié)性T（regulatory T，Treg）細胞可影響胃癌的進展，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。FOXP3 是一種轉錄因子，在Treg 細胞的形成與免疫抑制中發(fā)揮重要作用。FOXP3 為Treg 細胞的特異性標志物，而Treg 細胞的功能與表型呈多樣性，F(xiàn)OXP3 Treg 細胞在惡性腫瘤微環(huán)境中也存在諸多表型異質性，不同腫瘤組織中的FOXP3 表達水平及功能亦可能存在差異。目前，臨床研究主要集中于胃癌患者的胃癌組織和外周血FOXP3的表達方面，在胃癌組織與癌旁組織中的研究較少。本研究探討FOXP3在胃癌組織及癌旁組織中的表達情況，為患者的病情和預后評估提供必要參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年1 月至2018 年12 月河南科技大學第一附屬醫(yī)院收治的胃癌患者。納入標準：①年齡≥18 歲；②經手術病理或內鏡活檢確診為胃癌。排除標準：①癌前病變及其他胃部疾?。虎诤喜⑵渌麗盒阅[瘤；③3 年隨訪資料完整；④因其他病因行胃、腹部手術。依據(jù)納入和排除標準，本研究共納入115例胃癌患者，其中男90例，女25例；年齡﹤70 歲70 例，≥70 歲45 例。取115 例胃癌患者的胃癌組織及相應的癌旁組織。

1.2 免疫組化法檢測FOXP3 的表達情況

取胃癌組織及相應的癌旁組織常規(guī)切片，厚度3～5 μm，妥善黏附，65 ℃烘片1 h，置于二甲苯中10 min，重復1 次，以無水乙醇清洗5 min，重復1次。使用90%、80%、70%梯度的乙醇清洗，雙蒸水（doble distilled water，ddHO）清洗5 min；pH=6.0 的檸檬酸緩沖液1 L 于高壓鍋內煮沸，將玻片放入高壓鍋內煮沸3 min，自然冷卻后以ddHO 清洗3 次，每次5 min。室溫下以3%的過氧化氫浸泡15 min；pH=7.2 的磷酸緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）浸泡3 次，每次5 min；置入濕盒內維持37 ℃加封閉液封閉1 h，PBS 浸泡3 次，每次5 min。加入一抗，4 ℃孵育過夜，PBS 浸泡3 次，每次5 min；加入二抗，室溫下孵育1 h，PBS浸泡3次，每次5 min。二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯 色，ddHO 漂洗5 min，蘇木素襯染后自來水沖洗，65 ℃的烤箱內烘干，中性樹膠封片。

使用Dmetrix 掃描系統(tǒng)轉換為數(shù)字切片，由2名病理科副主任醫(yī)師以雙盲法閱片，如遇分歧由2名醫(yī)師協(xié)商一致后決定。顯微鏡下觀察細胞核著色強度（陽性細胞），計算陽性細胞所占比例，無陽性細胞計0 分，﹤10%計1 分，10%～50%計2 分，﹥50%計3 分；0～1 分為低表達，2～3 分為高表達。

1.3 隨訪方法

治療后每月復查1 次，復查3 次后改為每3 個月復查1 次，于復查時隨訪，未到院復查的通過電話隨訪，以患者死亡或隨訪3 年為隨訪終點。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23.0 軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用

χ

檢驗，等級資料的比較采用秩和檢驗；采用Kaplan-Meier 繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗；以

P

﹤0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 FOXP3 表達情況的比較

胃癌組織中FOXP3 高表達52 例，低表達63例；癌旁組織中FOXP3 高表達47 例，低表達68 例；胃癌組織與癌旁組織中FOXP3 表達情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（

χ

=0.443，

P

﹥0.05）。

2.2 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織和癌旁組織中FOXP3 表達情況的比較

不同性別、年齡、腫瘤最大徑、分化程度、臨床分期、N 分期、M 分期胃癌患者癌旁組織中FOXP3表達情況比較，差異均無統(tǒng)計學意義（

P

﹥0.05）。不同性別、年齡、分化程度、臨床分期、M 分期胃癌患者胃癌組織中FOXP3表達情況比較，差異均無統(tǒng)計學意義（

P

﹥0.05）；不同腫瘤最大徑、N 分期胃癌患者胃癌組織中FOXP3表達情況比較，差異均有統(tǒng)計學意義（

χ

=12.916、

Z

=-3.086，

P

﹤0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織和癌旁組織中FOXP3 表達情況的比較（n=115）

2.3 生存情況的比較

隨訪24.86～45.64個月，胃癌組織中FOXP3低表達胃癌患者的平均總生存期為34.837個月（95%CI：33.291～36.384 個月），短于FOXP3 高表達患者的43.392 個月（95%CI：42.038～44.746 個月），差異有統(tǒng)計學意義（

χ

=30.450，

P

﹤0.05）；癌旁組織中FOXP3低表達胃癌患者的平均總生存期為34.959個月（95%CI：33.434～36.484 個月），短于FOXP3 高表達患者的44.278個月（95%CI：43.146～45.410個月），差異有統(tǒng)計學意義（

χ

=36.932，

P

﹤0.05）。（圖1、圖2）

圖1 胃癌組織中FOXP3低表達（n=63）與FOXP3高表達（n=52）胃癌患者的總生存曲線

圖2 癌旁組織中FOXP3低表達（n=68）與FOXP3高表達（n=47）胃癌患者的總生存曲線

3 討論

胃癌為消化系統(tǒng)種常見的惡性腫瘤，早期手術可以獲得理想的預后，但胃癌的病死率仍高居惡性腫瘤第二位。隨著胃癌治療的不斷深入研究，近年來，免疫療法已成為治療胃癌的重要手段。FOXP3 是Treg 細胞的特異性生物學標志物，其在Treg 細胞分化、維持Treg 細胞功能與免疫抑制等方面均發(fā)揮著重要作用。Treg 細胞作為調控機體免疫功能穩(wěn)態(tài)與自身免疫耐受的重要調節(jié)細胞，在腫瘤免疫調控中發(fā)揮著重要調節(jié)作用，其在免疫應答中通過抗原受體刺激后可抑制CD4T 淋巴細胞、CD8T 淋巴細胞、B 細胞的活化增殖。腫瘤組織中FOXP3 表達下調、Treg 細胞減少，多提示預后不良。腫瘤細胞核內FOXP3 高表達是惡性腫瘤患者預后的重要保護因素。目前，F(xiàn)OXP3 在細胞質內表達的臨床價值尚未完全清晰，有研究認為，早期胃癌細胞中FOXP3 高表達與預后良好有關，表明FOXP3 具有拮抗腫瘤細胞的作用。

本研究結果表明，胃癌患者胃癌組織和癌旁組織中FOXP3 高表達患者的總生存期更長，表明FOXP3 高表達可能是胃癌患者預后良好的保護因素。本研究結果顯示，不同腫瘤最大徑、N 分期胃癌患者胃癌組織中FOXP3 表達情況存在差異（

P

﹤0.05），表明胃癌組織中FOXP3 高表達患者的腫瘤最大徑更小、區(qū)域淋巴結轉移范圍更小且程度更輕，可為患者病情和預后評估提供科學參考。但本研究僅獨立評估胃癌組織和癌旁組織中FOXP3表達情況，尚未比較胃癌組織、癌旁組織中FOXP3均高表達或低表達患者的生存情況，有待于進一步研究明確。同時，本研究納入的樣本量較小，有待于進一步擴大樣本量進行驗證。

綜上所述，F(xiàn)OXP3 在胃癌組織和癌旁組織中的表達情況無明顯差異，其高表達往往提示腫瘤最大徑更小、區(qū)域淋巴結轉移范圍更小且程度更輕，患者生存期更長。