鮑康德，秦宇雯,2#，趙 祺,，宋大偉，范欣榮,4，朱 強，姜程曦,4*

（1.溫州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，溫州325035；2.安徽濟人藥業(yè)有限公司，亳州236800；3.池州市九華山黃精研究所，池州247100；4.安徽省九華山佛教醫(yī)藥研究所，池州247100）

黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.、黃精Polygonatum sibiricum Red. 或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua 的干燥根莖[1]?！睹t(yī)別錄》[2]首次記載正名“黃精” 及其功效。 《中國道地藥材論叢》[3]將安徽九華山所產(chǎn)黃精（安徽省“三珍” 之一[4]）列為上品，取名為“九華黃精（多花黃精）[5-6]” 以突出地方特色，現(xiàn)已成為國家地理標志農(nóng)產(chǎn)品。 現(xiàn)代已有研究證明，其化學(xué)成分主要有多糖類、皂苷類、黃酮類等；具有降糖降脂、改善記憶力、增強免疫力、抗衰老、抗抑郁、抗疲勞等作用[6]。

錢楓等[7]研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)于皖南的多花黃精中多糖含量最高；陳菁瑛等[8]證實多花黃精2～4 年齡節(jié)間多糖積累較快，3～4 年齡節(jié)相對穩(wěn)定，之后多糖積累隨多花黃精的生長明顯下降；黃俊學(xué)[9]等發(fā)現(xiàn)4 年生黃精總糖和還原糖含量相對較高。然而將黃精的年份與其對應(yīng)齡節(jié)比較并將該齡節(jié)單獨炮制的研究，國內(nèi)外鮮見報道。 因此，本研究選擇4 年生九華黃精及其第4 齡節(jié)為研究對象，研究不同清蒸法對其質(zhì)量的影響，比較4 年生九華黃精及其第4 齡節(jié)之間的異同，為九華黃精的炮制工藝研究及其產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

紫外-可見分光光度計（UV-1800PC，上海美普達儀器有限公司）；箱式電阻爐（SX2-2.5-102，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備）；真空烘箱（DZG-6050SBD，上海森信實驗儀器有限公司）；電子調(diào)溫電熱套（DZTW，上海邦西儀器科技有限公司）；電子分析天平（SQP，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；恒溫水浴鍋（HWS，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；循環(huán)水真空泵（SHZ-Ⅱ，上海亞榮生化儀器廠）； 粉碎機 （HL-500A， 上海塞耐機械有限公司）；超聲波清洗機（JP-100S，深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司）。

1.2 材料

蒽酮、3，5-二硝基水楊酸、香草醛、丙三醇、苯酚、高氯酸、甲醇、正丁醇、乙醇、甲苯、硫酸、鹽酸、冰醋酸、氫氧化鈉，以上試劑均為分析純；D(+)-無水葡萄糖標準品、人參皂苷Rb1 標準品。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品采集

2018 年9 月至10 月，在安徽池州九華山黃精研究所種植基地隨機選取種植4 年生的九華黃精新鮮根莖樣品，經(jīng)過溫州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院中藥教研室姜程曦教授鑒定為多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua 的新鮮根莖，并將其分成整體4 年生九華黃精和第四齡節(jié)九華黃精，詳見表1。

表1 樣品采集信息記錄表Table 1 Sample collection information recording table

2.2 樣品處理

九華黃精經(jīng)炮制后可除去麻感，在蒸、曬、燜、潤等加工過程中，其毒性逐漸削弱甚至完全清除；脫水后更便于貯存，防止霉變、蟲蛀等。 因此，黃精的炮制過程至關(guān)重要。 本研究采用七種清蒸法炮制九華黃精，具體工藝詳見表2。

表2 不同清蒸法的炮制工藝Table 2 Processing technology of different steaming methods

2.3 性狀觀察

本品性狀符合《中國藥典》（2020 年版）一部黃精項下多花黃精性狀規(guī)定[1]，發(fā)現(xiàn)生品黃精表面淡黃或黃棕色，不規(guī)則厚片，表面粗糙略呈角質(zhì)樣可見清晰筋脈小點香氣微弱，質(zhì)稍硬而韌味微甜，無苦味咀嚼有些黏性刺激喉嚨，麻痹舌頭。 蒸過的黃精內(nèi)外均漆黑，外表光澤透亮如琥珀軟，糯，黏，味甜，無苦味香氣濃郁類似醬香。

2.4 檢查

2.4.1 水分測定

按《中國藥典》（2020 年版）一部黃精項下水分測定法：甲苯法（通則0832）[1]，平行3 次，測定結(jié)果均≤15%，符合規(guī)定；測定16 批樣品的折干率：4 年生九華黃精折干率24.79% (n=8)，其第4 齡節(jié)折干率26.58% (n=8)，詳見表3。

2.4.2 灰分測定

2.4.2.1 總灰分

按《中國藥典》（2020 年版）一部黃精項下總灰分測定法（通則2302）[1]，平行2 次，測定結(jié)果均≤4%，均符合規(guī)定，結(jié)果見表3。

2.4.2.2 酸不溶性灰分

按《中國藥典》（2020 年版）一部黃精項下酸不溶性灰分測定法（通則2302）[1]，平行2 次，測定結(jié)果均≤1%，符合規(guī)定，結(jié)果見表3。

表3 九華黃精不同炮制品檢查Table 3 Inspection results of different processed products of Polygonatum sibiricum Hua

2.4.3 浸出物

按《中國藥典》（2020 年版）一部黃精項下醇溶性浸出物測定法 （通則2201）[1]， 平行2 次， 測定結(jié)果均≥45%，符合規(guī)定，結(jié)果見表5。

2.5 含量測定

2.5.1 黃精多糖

按《中國藥典》（2020 年版）一部黃精項下多糖含量測定法[1]，平行3 次。 得回歸方程，詳見表4；測定結(jié)果均≥4%，符合規(guī)定，結(jié)果見表5。

2.5.2 還原糖

2.5.2.1 標準曲線制備

精密量取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 ml，分別置10 ml 具塞刻度試管中，各加水至4 ml；以空白溶液為對照，照UV-Vis（通則0401），在540 nm 處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線[10-12]，得回歸方程，詳見表4。

2.5.2.2 溶液制備

對照品溶液：取經(jīng)105 ℃干燥至恒重?zé)o水葡萄糖對照品50.0 mg，精密稱定，置50 ml 容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得[10,13]。

空白溶液：加水至4 ml，加入5 ml DNS 溶液，搖勻后置沸水浴中加熱6 min， 冰浴冷卻至室溫， 加水至刻度，搖勻，即得[10-12]。

供試品溶液： 取黃精樣品200 g，60 ℃干燥至恒重，粉碎，過80 目篩，備用。 取黃精樣品粉末1.00 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80 %乙醇100 ml，水浴回流提取1h，趁熱過濾，濾渣用80%乙醇洗3 次，每次10 ml，取濾液，揮盡乙醇，轉(zhuǎn)移至250 ml 容量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1.0 ml 定容至50 ml，備用。 精密量取上述溶液4 ml，同“2.5.2.1” 項下操作[10,13]，平行3 次。 實驗結(jié)果見表5。

2.5.3 小分子總糖

2.5.3.1 標準曲線制備

精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml，分別置50 ml 容量瓶中，加水至刻度，搖勻，分別精密量取上述稀釋后的對照品溶液各1 ml， 置10 ml 具塞試管中，加水至2 ml，搖勻，以空白溶液為對照，同“2.5.2.1” 項下標準曲線繪制（λ=490 nm），得回歸方程[10-12]，詳見表4。

2.5.3.2 溶液制備

對照品溶液：同“2.5.2.2” 項下的對照品溶液制備[10,13]。

空白溶液：加水至2 ml，加5%苯酚溶液1 ml，加濃硫酸溶液7 ml，混勻，靜置5 min，水浴加熱20 min，冰浴冷卻至室溫，搖勻，即得[10-12]。

供試品溶液：同“2.5.2.2” 項下的供試品溶液制備。精密量取上述溶液1 ml，同“2.5.3.1” 項下操作[11-13]，平行3次。 結(jié)果見表5。

2.5.4 總皂苷

2.5.4.1 標準曲線制備

取對照品溶液10、20、40、80、120、160、200 μL，置10 ml 具塞試管中， 揮盡溶劑， 以空白溶液為對照，同“2.5.2.1” 項下標準曲線繪制(λ=550 nm)，得回歸方程[10-11]，詳見表4。

表4 多成分標準曲線的回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)Table 4 regression equation, linear range and correlation coefficient of each component standard curve

2.5.4.2 溶液制備

對照品溶液：取人參皂苷Rb1 對照品11.3 mg，精密稱定，加甲醇溶解，定容至10 ml，搖勻，即得[11-12]。

空白溶液：加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 ml（新鮮配制），冰浴時加高氯酸0. 8 ml，混勻，60 ℃水浴加熱15 min，冰浴2 min，加冰醋酸5 ml，混勻，靜置5 min，即得[10-11]。

供試品溶液： 取黃精樣品各200 g，60 ℃干燥至恒重，粉碎，過80 目篩，備用。取黃精樣品粉末1.00 g，精密稱定，加14 倍量水飽和正丁醇（約17.3 ml），40 ℃超聲提取50 min，過濾，濾渣再提取一次，合并兩次濾液，置25 ml 容量瓶中，加水飽和正丁醇至刻度，搖勻。 精密量取上述溶液100 μL，揮盡溶劑，同“2.5.4.1” 項下操作[10,14]，平行3 次。 結(jié)果見表5。

2.5.5 方法學(xué)考察

取同一備用樣品分成5 份，按各自“供試品溶液制備” 操作，測其精密度及重復(fù)性；量取適量各自對應(yīng)的對照品溶液，分別加入上述5 份樣品中，測其回收率；取同一供試品溶液5 份， 以相應(yīng)試劑為空白， 分別于0、20、40、60、80、100、120 min 時， 在各自波長下測其穩(wěn)定性[7,15]。 考察后發(fā)現(xiàn)該儀器精密度良好，該法重復(fù)性良好、回收性良好，經(jīng)顯色后2 h 內(nèi)吸光度較穩(wěn)定。

2.6 綜合評價

九華黃精不同炮制品的評價指標為： 醇溶性浸出物、糖類成分、總皂苷的含量，通過綜合評分法評定其優(yōu)劣。 醇溶性浸出物、多糖、還原糖、小分子總糖、總皂苷的測定結(jié)果及黃精的總糖、非還原性低聚糖含量的計算結(jié)果[10]，詳見表5。 先將實驗數(shù)據(jù)進行歸一化處理（各個實驗數(shù)值的最高數(shù)值為參照），由浸出物、糖類成分、總皂苷的成分和加工方法的重要性決定，分別給予各個指標的加權(quán)系數(shù)是0.3、0.4、0.3，最后求和得綜合評分[10,13]，計算公式如下：

表5 不同炮制品主要成分含量測定Table 5 Determination of effective components in different processed products

計算結(jié)果如表6 所示。

表6 不同炮制品的綜合評分Table 6 Comprehensive scoring results of different processed products

3 討論

本研究基于九華黃精道地產(chǎn)區(qū)的樣品采集、炮制工藝（氣候、工具、方法、人員）等因素下，得出重蒸法Ⅱ及九蒸九曬法Ⅱ較優(yōu)，其第4 齡節(jié)質(zhì)量略優(yōu)的結(jié)論，其正確與否尚需通過HPLC 進一步驗證；不同炮制品之間主要成分含量有所差異，其轉(zhuǎn)化過程也有待深入研究。 從表2、 表5、 表6 及圖1 可以看出： “重蒸法Ⅱ” 樣品（20180930E-CZⅡ）表面棕黑色、無光澤，中心棕色，其綜合評分是最高的(87.53)；20180930H-JZJSⅡ樣品內(nèi)外均漆黑，外表光澤透亮如琥珀，其綜合評分(87.19)，僅次之。 與生品比較，具有極顯著差異性（**P＜0.01，***P＜0.001）；炮制品的醇浸出物、黃精多糖、小分子總糖（除20180930H-JZJSⅡ外）、非還原性低聚糖、總糖的含量均下降，而還原糖和總皂苷的含量均增加。 與其第4 齡節(jié)比較，均具有顯著差異性（#P＜0.05，##P＜0.01）；發(fā)現(xiàn)4 年生樣品多糖、還原糖、小分子總糖及總皂苷含量均略低于其第4 齡節(jié)樣品。 綜上，重蒸法Ⅱ及九蒸九曬Ⅱ下的樣品綜合評分較高， 可視為九華黃精的較優(yōu)炮制方法，其第4 齡節(jié)可作為九華黃精的產(chǎn)品開發(fā)優(yōu)選材料。

圖1 不同樣品多指標綜合評分Fig.1multi-indexcomprehensivescoreofdifferentsamples

九華黃精作為典籍記載的歷代延年益壽、辟谷長生之“仙藥”，也是現(xiàn)代藥食同源物質(zhì)之一，其養(yǎng)生保健功效值得深度挖掘。通過九華黃精炮制工藝方法的不斷完善，為今后九華黃精的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。