云洪巖，董 愉，李冰

（1佛山復(fù)星禪誠(chéng)醫(yī)院有限公司，佛山 528000；2中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，廣州 510080）

抗酸菌主要有結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌，在組織切片上檢出抗酸菌，對(duì)結(jié)核和麻風(fēng)的病理診斷有重要意義。在常規(guī)HE染色難以確定患者是否有抗酸菌的感染，用抗酸染色可以清晰顯示抗酸桿菌。為了更好的觀察抗酸菌，需要進(jìn)行復(fù)染將組織結(jié)構(gòu)顯示出來(lái)，以觀察抗酸菌在組織中的定位。因此抗酸染色后復(fù)染劑的選擇就尤為重要。常用的復(fù)染劑的有多種，各有優(yōu)缺點(diǎn)。本文對(duì)常用復(fù)染劑Mayer氏蘇木精、亞甲藍(lán)、和亮綠進(jìn)行比較，探討哪一種復(fù)染劑更適合抗酸染色，更有利于抗酸菌的觀察。

材料與方法

1 材料

收集本院病理診斷為結(jié)核或麻風(fēng)的病例10例，連續(xù)石蠟切片5張，厚度均為3μm。

2 染色方法

5張切片同時(shí)行抗酸染色：切片脫蠟蒸餾水洗后，用苯酚堿性品紅液染色20min，蒸餾水洗去染液，20%硫酸液分化，流水沖水后分別用Mayer氏蘇木素、亞甲藍(lán)和亮綠進(jìn)行復(fù)染，復(fù)染時(shí)間分別為40~60s、1~2s和 1~2s。

結(jié) 果

抗酸菌呈紅色，胞核及背景根據(jù)不同復(fù)染試劑呈不同顏色。復(fù)染Mayer氏蘇木精細(xì)胞核呈藍(lán)色，沒(méi)有背景染色；復(fù)染亞甲藍(lán)染色細(xì)胞核呈藍(lán)色，背景呈深淺不一的藍(lán)色；復(fù)染甲基綠細(xì)胞核呈綠色，沒(méi)有背景染色（表1，圖1）。

圖1 3種復(fù)染試劑染色結(jié)果比較。 A，結(jié)核桿菌紅色，細(xì)胞核藍(lán)色，復(fù)染蘇木精；比例尺，50μm。B，麻風(fēng)桿菌紅色，細(xì)胞核藍(lán)色，復(fù)染蘇木精；比例尺，200μm。C，結(jié)核桿菌紅色，細(xì)胞核綠色，復(fù)染甲基綠；比例尺，200μm。D和E，結(jié)核桿菌紅色，細(xì)胞核和背景呈不同藍(lán)色，復(fù)染亞甲藍(lán)；比例尺，200μmFig. 1 Comparison of the staining results with three counter-staining reagents. A, counter-staining with hematoxylin, TB bacilli were stained in red,nuclei in blue; scale bar, 50μm; B, counter-staining with hematoxylin, leprosy bacilli were stained in red, nuclei in blue; scale bar, 200μm. C, counter-staining with methyl green, TB bacilli were stained in red, nuclei in green; scale bar, 200μm. D and E, counter-staining with methylene blue, TB bacilli were stained in red, nuclei and background in deep or light blue; scale bar, 200μm

表1 抗酸染色后不同復(fù)染試劑染色效果比較Tab.1 Comparison of the staining effect of different counter-staining reagents after acid-fast staining

討 論

苯酚堿性品紅染色法是檢測(cè)結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌的經(jīng)典方法。苯酚堿性品紅將結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌染成紅色，一旦著染后可以抵抗酸的脫色作用，因此稱為抗酸菌[1]。結(jié)核桿菌多見(jiàn)于結(jié)核性干酪樣壞死灶，它主要侵犯肺、淋巴結(jié)和腎臟。麻風(fēng)桿菌主要侵犯皮膚、黏膜和外周神經(jīng)，在泡沫細(xì)胞（麻風(fēng)細(xì)胞）內(nèi)可見(jiàn)到大量麻風(fēng)桿菌?？顾崛旧珜⒖顾?/p>

菌染成紅色后，還需要進(jìn)行復(fù)染，將組織結(jié)構(gòu)顯示出來(lái)，使抗酸菌與背景對(duì)比清晰，可更好的觀察到抗酸菌在組織中的定位，如在干酪樣壞死灶可見(jiàn)結(jié)核桿菌，在泡沫細(xì)胞（麻風(fēng)細(xì)胞）內(nèi)可見(jiàn)到大量麻風(fēng)桿菌。特殊染色后進(jìn)行復(fù)染主要分為細(xì)胞核復(fù)染和背景復(fù)染，用于細(xì)胞核復(fù)染的試劑主要是呈藍(lán)色的蘇木精、呈紅色的核固紅和呈綠色的甲基綠；復(fù)染背景的試劑主要是呈藍(lán)色的亞甲藍(lán)，呈紅色的曙紅和呈綠色的光綠。細(xì)胞核復(fù)染可以清晰看到細(xì)胞核，對(duì)抗酸菌的定位較好，易于分辨抗酸菌定位在細(xì)胞漿還是細(xì)胞外。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核后細(xì)胞核呈藍(lán)色，與紅色的抗酸菌對(duì)比清晰，蘇木精是常規(guī)HE染色中常用染料，容易獲得，不容易褪色。甲基綠復(fù)染細(xì)胞核后細(xì)胞核呈藍(lán)色，與紅色的抗酸菌對(duì)比清晰，但甲基綠比較容易褪色，不能長(zhǎng)時(shí)間保存，而且甲基綠配制較繁瑣。核固紅由于將細(xì)胞核染成紅色，與紅色的抗酸菌對(duì)比不佳。亞甲藍(lán)復(fù)染細(xì)胞核和背景呈不同藍(lán)色，與紅色的抗酸菌紅藍(lán)對(duì)比清晰，但是亞甲藍(lán)復(fù)染不容易掌握，如果染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，整個(gè)背景的藍(lán)色較深，會(huì)遮蓋紅色的抗酸菌，使抗酸菌不容易觀察，因此在復(fù)染亞甲藍(lán)時(shí)要淺染，并在鏡下觀察復(fù)染效果，將細(xì)胞核染成藍(lán)色，背景為淺藍(lán)色，使紅色的抗酸菌在淺藍(lán)色的背景下容易觀察到，但亞甲藍(lán)較蘇木精更容易褪色。 綜所上述，抗酸染色后，用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核最好，最有利于病理醫(yī)生觀察抗酸菌。