王 玉，周 強(qiáng)，劉雷鳴

(河南省兒童醫(yī)院、鄭州兒童醫(yī)院，河南 鄭州 450053)

骨肉瘤屬于間葉組織肉瘤，青少年高發(fā)，且惡性程度高，致死致殘率高，對(duì)青少年人群的生命健康安全影響較大[1]。骨肉瘤的治療通常采取手術(shù)切除的方式，并根據(jù)疾病惡性程度決定是否給予化療為主的輔助治療[2]。骨肉瘤容易出現(xiàn)化療耐藥，影響化療的治療效果，從而導(dǎo)致治療失敗，影響了預(yù)后[3]。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白，在結(jié)直腸癌、肝癌、胃癌等多種實(shí)體瘤組織中存在高表達(dá)[4-5]。惡性腫瘤細(xì)胞的增殖會(huì)造成機(jī)體內(nèi)的缺氧環(huán)境，缺氧環(huán)境下HIF-1α表達(dá)增加，增加腫瘤細(xì)胞糖酵解，又可以通過(guò)影響血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等促血管生成因子的表達(dá)增高，促進(jìn)腫瘤血管新生，為腫瘤細(xì)胞的惡性增殖提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)腫瘤的周?chē)?rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為的進(jìn)展[6]。E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)屬于跨膜蛋白，主要參與腫瘤細(xì)胞間的粘連等生物學(xué)過(guò)程，在惡性腫瘤發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中表達(dá)下調(diào)，改變腫瘤細(xì)胞連接和結(jié)構(gòu)，誘發(fā)細(xì)胞極性改變，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為[7]。研究證實(shí)，E-cad在胃癌、乳腺癌、肝癌、食管癌等多種實(shí)體瘤中存在異常低表達(dá)，通過(guò)促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化加速惡性腫瘤的疾病進(jìn)展[8-9]。

本研究通過(guò)比較觀(guān)察青少年骨肉瘤組織中HIF-1α、E-cad的表達(dá)情況及兩者與青少年骨肉瘤Enneking分期的關(guān)系，進(jìn)一步探討骨肉瘤組織的疾病進(jìn)展機(jī)制，并嘗試尋找骨肉瘤的診斷和預(yù)后評(píng)估的新指標(biāo)，為骨肉瘤的臨床診治提供一定數(shù)據(jù)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入2012年1月至2018年12月河南省兒童醫(yī)院收治的29例經(jīng)臨床病理學(xué)確診的青少年骨肉瘤和25例正常骨組織患者。29例骨腫瘤患者：男15例，女14例；年齡6～14歲，中位年齡8.6歲；Enneking分期[10]：Ⅰ期8例，Ⅱa期10例，Ⅱb期7例，Ⅲ期4例。納入患者中已經(jīng)排除既往骨肉瘤治療史、合并其他惡性腫瘤、合并精神神經(jīng)性疾病、合并其他嚴(yán)重內(nèi)科疾病患者。25例正常骨組織標(biāo)本均來(lái)自同期我院接受骨腫瘤切除術(shù)患者的癌旁正常骨組織，其中男14例、女11例，年齡7～14歲，中位年齡9.0歲。所有入組患者均已經(jīng)獲得患者及家屬的知情同意并已簽署知情同意書(shū)，并獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)。2組患者性別、年齡等基線(xiàn)資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，具有可比性。

1.2 HIF-1α、E-cad的免疫組化染色所有骨組織標(biāo)本均經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋切片后，進(jìn)行免疫組化S-P染色，以已知陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗為陰性對(duì)照，然后顯微鏡下對(duì)HIF-1α、E-cad進(jìn)行定位，并檢測(cè)兩者的灰度值，進(jìn)一步計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，其中HIF-1α位于骨腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，而E-cad位于骨腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核。

1.3 觀(guān)察內(nèi)容比較觀(guān)察青少年骨腫瘤組織與青少年正常骨組織中HIF-1α、E-cad的相對(duì)表達(dá)量，并比較觀(guān)察兩者與青少年骨肉瘤Enneking分期的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 青少年骨肉瘤組織和青少年正常骨組織中HIF-1α、E-cad相對(duì)表達(dá)量比較青少年骨肉瘤組織中HIF-1α、E-cad相對(duì)表達(dá)量分別為109.34±19.38、65.32±8.22，與青少年正常骨組織的38.02±9.87、96.31±14.33比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=16.621，P<0.001；t=9.915，P<0.001)。見(jiàn)表1。

表1 青少年骨肉瘤組織和青少年正常骨組織中HIF-1α、E-cad相對(duì)表達(dá)量比較

2.2 不同Enneking分期青少年骨肉瘤組織中HIF-1α、E-cad相對(duì)表達(dá)量比較Enneking分期Ⅰ～Ⅱa期青少年骨肉瘤組織中HIF-1α、E-cad相對(duì)表達(dá)量分別為78.37±15.62、86.29±10.41，與Ⅱb～Ⅲ期青少年骨肉瘤的160.02±30.15、31.01±5.92比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.635，P<0.001；t=16.028，P<0.001)。見(jiàn)表2。

表2 不同Enneking分期青少年骨肉瘤組織中HIF-1α、E-cad相對(duì)表達(dá)量比較

3 討論

骨肉瘤屬于青少年高發(fā)腫瘤，大多臨床表現(xiàn)為患側(cè)肢體疼痛、行動(dòng)不便等，由于其高度惡性、易致死致殘的性質(zhì)，對(duì)青少年人群的健康造成嚴(yán)重影響，導(dǎo)致其已成為臨床研究的熱點(diǎn)問(wèn)題[10]。骨肉瘤治療以手術(shù)為主，化療等作為輔助手段有助于改善預(yù)后，但化療耐藥發(fā)生率較高，這嚴(yán)重影響了骨肉瘤預(yù)后的進(jìn)一步提升[11-12]。為了進(jìn)一步探討骨肉瘤的發(fā)病機(jī)制，探索臨床診斷輔助新手段，改善骨肉瘤的預(yù)后，本研究選擇HIF-1α、E-cad等研究較為深入的惡性腫瘤診斷與鑒別診斷的免疫組化指標(biāo)，并以青少年正常骨組織為對(duì)照，研究青少年骨肉瘤組織中HIF-1α、E-cad的表達(dá)及與骨肉瘤Enneking分期的關(guān)系。關(guān)國(guó)鋒等[13]研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1α、CXCR4高表達(dá)可能促進(jìn)骨肉瘤的惡性進(jìn)展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，兩者聯(lián)合檢測(cè)可用于骨肉瘤的惡性生物學(xué)行為評(píng)估、診斷與鑒別診斷、靶向治療指導(dǎo)和預(yù)后判斷。唐志斌等[14]證實(shí)，骨肉瘤組織中Ezrin蛋白、E-鈣黏蛋白存在異常表達(dá)，且可能與患者的轉(zhuǎn)移、預(yù)后關(guān)系密切。

本研究顯示：青少年骨肉瘤組織中HIF-1α、E-cad相對(duì)表達(dá)量分別為109.34±19.38、65.32±8.22，與青少年正常骨組織的38.02±9.87、96.31±14.33比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=16.621，P<0.001；t=9.915，P<0.001)。Enneking分期Ⅰ～Ⅱa期青少年骨肉瘤組織中HIF-1α、E-cad相對(duì)表達(dá)量分別為78.37±15.62、86.29±10.41，與Ⅱb～Ⅲ期青少年骨肉瘤的160.02±30.15、31.01±5.92比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.635，P<0.001；t=16.028，P<0.001)。這說(shuō)明青少年骨肉瘤組織中存在HIF-1α的異常高表達(dá)和E-cad的異常低表達(dá)，且表達(dá)水平與青少年骨肉瘤的Enneking分期有關(guān)。

綜上所述，青少年骨肉瘤組織中的HIF-1α、E-cad存在異常表達(dá)，兩者異常表達(dá)與骨肉瘤的疾病進(jìn)展關(guān)系密切，聯(lián)合檢測(cè)可能有助于骨肉瘤的診斷與鑒別診斷、療效評(píng)估和用藥指導(dǎo)等。