龍熙翠，劉貝貝，盧紹波，李志紅，金文嬌，陸金芝，韓雪松

（昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科，云南 昆明 650032）

子宮內(nèi)膜息肉（endometrial polyps，EP）是由于局部子宮內(nèi)膜過度增長而形成的，其組成包括子宮內(nèi)膜腺體、間質(zhì)、血管3部分，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，子宮內(nèi)膜息肉的患病率約為7.8%～34.9%[1-2]。近年來隨著檢測技術(shù)的發(fā)展及人們健康意識的提升，該疾病的檢出率有增高的趨勢。目前子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)病機(jī)制尚不明確，已有研究表明子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生可能與遺傳因素[3]、局部子宮內(nèi)膜激素受體表達(dá)失衡[4]、菌群失調(diào)[5]、代謝失調(diào)[6]、細(xì)胞增生和凋亡[7-8]、新生血管生成[9-10]、免疫與炎癥[11-12]、氧化應(yīng)激等相關(guān)[13]?，F(xiàn)有的研究表明炎癥可能參與子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)病，而目前的研究新熱點(diǎn)細(xì)胞焦亡（Pyroptosis）被認(rèn)為是一種促炎性的細(xì)胞程序性死亡方式，研究表明細(xì)胞焦亡廣泛參與炎癥和感染相關(guān)疾病的發(fā)生[14-17]。基于以上背景本研究將檢測細(xì)胞焦亡相關(guān)因子Caspase-1、IL-1β與IL-18在子宮內(nèi)膜息肉組織中的表達(dá)，為深入探討子宮內(nèi)膜息肉發(fā)病機(jī)制的研究提供新的理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

隨機(jī)收集2020年1月至2021年1月在昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科住院行宮腔鏡探查術(shù)+診刮術(shù)治療的患者60例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）術(shù)后病理學(xué)符合《婦產(chǎn)科病理診斷學(xué)》[18]中對于子宮內(nèi)膜息肉和增生期子宮內(nèi)膜的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）簽署治療知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并系統(tǒng)感染性疾病；（2）合并惡性腫瘤、精神類疾?。唬?）合并心、腦、腎臟器嚴(yán)重病變；（4）糖尿??；（5）高血壓。按照《婦產(chǎn)科診斷病理學(xué)》[18]的診斷標(biāo)準(zhǔn)將術(shù)后病理學(xué)診斷為子宮內(nèi)膜息肉的30例患者納入觀察組，術(shù)后病理學(xué)診斷為增生期子宮內(nèi)膜的30例患者納入對照組。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用免疫組化法檢測Caspase-1、IL-1β與IL-18的表達(dá)情況。按照試劑盒說明將觀察組和對照組各組織經(jīng)過切片、脫蠟及水化、抗原修復(fù)、PBS液沖洗、一抗孵育、二抗孵育、顯色、復(fù)染、脫水、中性樹脂封片等操作過程。結(jié)果判讀參照Remmele等[19-20]提出的包括陽性染色的強(qiáng)度及陽性細(xì)胞百分比的方法進(jìn)行，每個(gè)切片于顯微鏡下隨機(jī)取 10 個(gè)視野進(jìn)行觀察。判讀細(xì)節(jié)包括：（1）染色強(qiáng)度：0 分：無陽性染色；1 分：染色呈淡黃色；2 分：染色呈黃色；3 分：染色呈棕黃色。（2）陽性細(xì)胞百分比：0 分：無陽性細(xì)胞；1 分：陽性率 0%～10%；2 分：陽性率 11%～30%；3 分：陽性率 31%～70%；4 分：陽性率71%～100%；（3）免疫組化反應(yīng)評分（immunoreactive score，IRS）：IRS=染色強(qiáng)度得分×陽性細(xì)胞百分比得分。記錄切片的陽性染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞百分比得分，計(jì)算免疫組化反應(yīng)評分，最終取平均值記錄。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以n（%）的形式表示，采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料服從正態(tài)分布以的形式表示，2組比較采用成組樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，采用GraphPad Prism 8.0 繪制圖。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

2組患者年齡、孕次、產(chǎn)次差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05），見表1。

表1 患者基本情況（）Tab.1 Basal condition of patients（）

表1 患者基本情況（）Tab.1 Basal condition of patients（）

2.2 Caspase-1的表達(dá)情況

Caspase-1主要表達(dá)于胞漿內(nèi)，觀察組的IRS得分為：（4.88±1.82）分，對照組的IRS得分為：（1.37±1.13）分，觀察組Caspase-1的表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.950，P=0.000），見圖1、圖2。

圖1 Caspase-1在觀察組和對照組的表達(dá)Fig.1 Expression of caspase-1in observation group and control group

圖2 Caspase-1在觀察組和對照組的表達(dá)Fig.2 Expression of caspase-1in observation group and control group

2.3 IL-18的表達(dá)情況

IL-18主要表達(dá)于細(xì)胞胞漿和胞核，觀察組的IRS得分為：（6.84±2.41）分，對照組的IRS得分為：1.73±0.90分，觀察組IL-18的表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=10.870，P=0.000），見圖3、圖4。

圖3 IL-18在觀察組和對照組的表達(dá)Fig.3 Expression of IL-18 in observation group and control group

圖4 IL-18在觀察組和對照組的表達(dá)Fig.4 Expression of IL-18 in observation group and control group

2.4 IL-1β在觀察組和對照組的表達(dá)情況

觀察組與對照組IL-1β均為陰性，見圖5。

圖5 IL-1β在觀察組和對照組的表達(dá)Fig.5 Expression of IL-1βin observation group and control group

3 討論

細(xì)胞焦亡的分子機(jī)制主要包括由Caspase-1介導(dǎo)的經(jīng)典途徑和由Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11直接識別細(xì)菌脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）而引發(fā)的非經(jīng)典途徑[21]。在細(xì)胞焦亡的經(jīng)典途徑中，當(dāng)胞細(xì)胞質(zhì)模式識別受體（Pattern recognition receptors，PRRs）受到病原體相關(guān)分子模式(Pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)、內(nèi)源性危險(xiǎn)信號分子模式(Dangerassociated molecular patterns，DAMPs)刺激時(shí)，該受體可通過（或不通過）凋亡相關(guān)微粒蛋白（Apoptosis-associated speck-like protein，ASC）主動招募炎性小體，促使2分子相鄰的 pro-Caspase-1發(fā)生自身水解轉(zhuǎn)變成為具有活性的Caspase-1。一方面被激活的Caspase-1可以引起GasderminD發(fā)生裂解形成含N端的片段和含C端的片段，含N端的片段可以在細(xì)胞膜上打孔；另一方面被激活的Caspase-1可以引起IL-1β、IL-18等炎性因子的成熟與釋放，而成熟的IL-1β、IL-18經(jīng)細(xì)胞膜上的孔隙流出細(xì)胞外后又可進(jìn)一步誘發(fā)炎癥反應(yīng)[21]?；谏鲜黾?xì)胞焦亡相關(guān)分子機(jī)制，本研究選擇Caspase-1、IL-1β、IL-18三種細(xì)胞因子作為細(xì)胞焦亡通路中的關(guān)鍵因子，通過免疫組化法觀察它們在子宮內(nèi)膜息肉組織中的表達(dá)情況。

本研究發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜息肉組織中Caspase-1與IL-18的表達(dá)高于增生期子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，IL-1β在子宮內(nèi)膜息肉組織中的表達(dá)為陰性。在Yali Zhu等[22-23]人的研究中發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜息肉患者Th17反應(yīng)上調(diào)且存在CD4+T細(xì)胞失衡的現(xiàn)象，與正常人群相比子宮內(nèi)膜息肉患者血清中存在多種炎癥因子包括IFN -γ、TNF、IL-17、IL-1β、IL-6等的釋放。因此可以推測炎癥反應(yīng)參與子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生，且該過程有可能通過細(xì)胞焦亡途徑實(shí)現(xiàn)。在薛娟麗等人[24]的研究中發(fā)現(xiàn)TNF-α、IL-6在子宮內(nèi)膜息肉組織中的表達(dá)明顯高于增生期子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，提示子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生過程中可能伴隨著炎癥反應(yīng)的存在。此外，周寧等人[25]的研究也發(fā)現(xiàn)與正常子宮內(nèi)膜組織相比子宮內(nèi)膜息肉組織中IL-23的表達(dá)增加，且IL-23的表達(dá)與子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生及臨床表現(xiàn)之間存在顯著的關(guān)聯(lián)性。在細(xì)胞焦亡過程中，當(dāng)IL-18、IL-1β被釋放到細(xì)胞外后可進(jìn)一步誘發(fā)級聯(lián)放大的炎癥反應(yīng)。研究表明IL-18主要通過IRAK途徑、MAPK途徑、Fas配體途徑誘導(dǎo)炎癥因子的釋放，IL-1β則通過NFκB途徑誘發(fā)炎癥因子的釋放[26]。因此可以推測TNF-α、IL-6、IL-23等炎癥因子的釋放最初是由于IL-18、IL-1β的釋放而誘發(fā)的。此外，IL-1β屬于白介素-1細(xì)胞因子家族成員，參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化[27]。而IL-1β可以影響中性粒細(xì)胞的激活程度，可以通過加速單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的釋放而影響炎癥反應(yīng)過程；還可以引起其下游細(xì)胞因子IL-10或IL-18的激活，進(jìn)一步形成不同炎癥因子之間互相交錯(cuò)激活的炎癥反應(yīng)[27]。因此，綜合已有的研究結(jié)果和本研究的結(jié)果，是否可以將子宮內(nèi)膜息肉發(fā)病機(jī)制中的炎癥機(jī)制進(jìn)行深入思考，即用細(xì)胞焦亡機(jī)制誘發(fā)炎癥相關(guān)通路的激活來進(jìn)一步解釋子宮內(nèi)膜息肉的炎癥相關(guān)機(jī)制，為子宮內(nèi)膜息肉發(fā)病機(jī)制的深入研究提供一條新的思路。再者，本研究發(fā)現(xiàn)IL-1β在子宮內(nèi)膜息肉組織中的表達(dá)為陰性，研究結(jié)果與Yali Zhu等人[22-23]的不一致，其中的原因可能是IL-1β在子宮內(nèi)膜息肉組織中的敏感度沒有血清中的敏感度高，這一研究結(jié)果也提示在后續(xù)的研究中需采用多種檢測方法聯(lián)合進(jìn)行。

本研究還存在以下不足，研究樣本量小、人群來源單一，在后續(xù)的研究中需擴(kuò)大樣本量，必要時(shí)需進(jìn)一步開展多區(qū)域研究。此外，本研究主要從組織學(xué)層面基于細(xì)胞焦亡的經(jīng)典途徑驗(yàn)證了Caspase-1、IL-18在子宮內(nèi)膜息肉組織中高表達(dá)，IL-1β在子宮內(nèi)膜息肉組織中不表達(dá)，參與細(xì)胞焦亡的因子有很多，因此對于整個(gè)細(xì)胞焦亡過程的驗(yàn)證還不充分，后續(xù)研究應(yīng)該考慮多維度即從人、動物的經(jīng)典途徑和非經(jīng)典途徑進(jìn)行驗(yàn)證，此外對于炎癥相關(guān)因子的檢測應(yīng)將多種方式進(jìn)行結(jié)合。