周婷婷，陳桂婷，曹楠，何建剛，何功威，肖長(zhǎng)義,，李世剛,*

從腸道菌群改變探討青磚茶對(duì)非酒精性脂肪肝的預(yù)防作用

周婷婷1，陳桂婷1，曹楠1，何建剛2，何功威2，肖長(zhǎng)義1,2，李世剛1,2*

1. 三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 宜昌 443002；2. 湖北長(zhǎng)盛川青磚茶研究所，湖北 宜昌 443000

通過(guò)腸道菌群改變研究青磚茶（GBT）對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝（NAFLD）的預(yù)防作用。C57BL/6小鼠隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組（NC），模型對(duì)照組（MC），陽(yáng)性藥物對(duì)照組（PC）以及青磚茶低劑量組（LD）、高劑量組（HD），高脂飼料喂養(yǎng)小鼠建立NAFLD模型，同時(shí)預(yù)防性給予低、高劑量青磚茶水提取物和陽(yáng)性藥物血脂康，分別測(cè)定小鼠的體重、食物利用率、肝重、肝指數(shù)、TC、LDL-C/HDL-C及ALT含量，HE染色和油紅O染色觀察肝組織病理切片，ELISA檢測(cè)肝組織IL-1、IL-18含量變化，16?S rDNA V3-V4區(qū)高通量測(cè)序分析腸道菌群變化，Spearman相關(guān)性分析方法分析菌群與NAFLD表型的相關(guān)性。與模型組比較，青磚茶組小鼠體重、食物利用率、肝重、肝指數(shù)、血清TC、LDL-C/HDL-C、ALT、肝組織TC、IL-1、IL-18含量均有顯著性降低，肝臟病變程度有所改善；腸道菌群分析及相關(guān)性分析顯示物種豐度降低，且與NAFLD表型呈正相關(guān)，、、物種豐度增加，且與NAFLD表型呈負(fù)相關(guān)，與NAFLD表型相關(guān)性最強(qiáng)的菌群為和。青磚茶對(duì)NAFLD具有一定的預(yù)防作用，其作用可能與影響腸道菌群的改變有關(guān)。

腸道菌群；非酒精性脂肪肝；青磚茶；高通量測(cè)序；相關(guān)性分析

非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是指除酒精或病毒等明確的肝損傷因素引起的，以肝臟脂質(zhì)蓄積和炎癥反應(yīng)為主要特征的營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病，包括單純性脂肪變性、非酒精性脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化以及肝癌[1]。目前，NAFLD全球患病率約為25%[2]，隨著生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變，特別是高脂食物的大量攝入，NAFLD發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重威脅人類健康，已成為全球主要公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。

目前，NAFLD的確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，除了經(jīng)典的“二次打擊”[3]、“多重打擊”學(xué)說(shuō)[4]外，近年來(lái)隨著深入研究，“腸-肝軸”理論得到廣泛的關(guān)注，腸道和肝臟通過(guò)門靜脈直接關(guān)聯(lián)，腸道菌群失調(diào)會(huì)導(dǎo)致腸黏膜屏障受損，腸道通透性增加，腸道菌群及代謝物會(huì)轉(zhuǎn)移到肝臟并引發(fā)相應(yīng)的炎癥免疫反應(yīng)，這些反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致NAFLD的發(fā)生和進(jìn)展[5-6]。腸道菌群與NAFLD具有一定的相關(guān)性，但與NAFLD有關(guān)的腸道菌群具體種類及其明確的相關(guān)關(guān)系仍需進(jìn)一步探究。

青磚茶（Green brick tea，GBT）是中國(guó)特種黑茶，屬于后發(fā)酵茶，主產(chǎn)于湖北省鄂南地區(qū)，是中國(guó)西北高寒地帶以及高脂飲食地區(qū)少數(shù)民族人民的生活必需品[7]，近年來(lái)，隨著其獨(dú)特的品質(zhì)特征及保健功效被人們所認(rèn)知，越來(lái)越多的內(nèi)陸消費(fèi)者開(kāi)始關(guān)注、品飲青磚茶，其不僅具有生津解渴的效果，還具有抑菌、減肥、降脂、抗氧化、改善胃腸道功能等功效[8-9]。動(dòng)物試驗(yàn)研究表明，青磚茶能有效降低大鼠血脂，改善脂質(zhì)代謝，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，減輕高脂對(duì)肝細(xì)胞的損傷[10]；臨床研究顯示，青磚茶可以改善2型糖尿病患者的胰島素抵抗和血脂代謝紊亂[11]，但其具體作用機(jī)理尚不清楚。本研究以高脂飲食建立小鼠NAFLD模型，研究青磚茶對(duì)NAFLD的預(yù)防作用，探討其作用是否與腸道菌群有關(guān)，以期為青磚茶的降脂保肝作用提供一定的理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)C57BL/6小鼠，6～7周齡，雄性，購(gòu)于三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（鄂）2017-0012。

1.1.2 藥品與試劑

高脂飼料購(gòu)于江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：蘇飼證（2014）01008；青磚茶水提物由湖北長(zhǎng)盛川青磚茶研究所提供，提取率為(10±5)%；血脂康購(gòu)于北京北大維信生物科技有限公司；總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）試劑盒購(gòu)于北京普利萊基因技術(shù)有限公司；白介素-1（Interleukin-1，IL-1）、白介素-18（Interleukin-18，IL-18）試劑盒購(gòu)于武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；E.Z.N.ATMMag-Bind Soil DNA Kit購(gòu)于OMEGA公司；Qubit3.0 DNA檢測(cè)試劑盒購(gòu)于Life公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 劑量設(shè)計(jì)

成人茶葉推薦劑量為9.0?g·d-1，成人身體質(zhì)量按60?kg計(jì)，即單位體質(zhì)量的茶葉推薦劑量為0.15?g·kg-1，選擇人體推薦量的5、20倍為小鼠的低、高劑量[12]，青磚茶的水提物提取率按10%計(jì)算，則低、高劑量分別為75、300?mg·kg-1。陽(yáng)性藥物血脂康劑量為成人（60?kg）每日用藥10?mg·kg-1，換算為小鼠的劑量，即為90?mg·kg-1[13]。

1.2.2 分組與給藥方案

60只雄性C57BL/6小鼠在試驗(yàn)環(huán)境下（溫度20～25℃，相對(duì)濕度45%～65%及12?h/12?h光暗循環(huán)）適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由攝食和飲水。按照體重隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組（NC）、模型對(duì)照組（MC）、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（PC）、青磚茶低劑量組（LD）、青磚茶高劑量組（HD），其中NC飼喂普通飼料，其他4組均喂高脂飼料，各組小鼠均自由飲用純凈水。采用預(yù)防模型，同時(shí)給藥與飼喂高脂飼料，LD組和HD組分別灌胃75?mg·kg-1和300?mg·kg-1的青磚茶水提物（均用純凈水新鮮配制）；PC組灌胃90?mg·kg-1的血脂康；NC組和MC組均灌胃等量純凈水，每只小鼠按0.01?mL·g-1灌胃，每周灌胃4次，連續(xù)14周。試驗(yàn)期間觀察每組動(dòng)物飲水、糞便、毛發(fā)、活動(dòng)等情況，每周記錄攝食量和體重。

1.2.3 常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)

每周記錄攝食量（g）和體質(zhì)量（g），試驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱量肝臟質(zhì)量（g），計(jì)算肝指數(shù)。攝食量=給食量－剩食量；食物利用率=體質(zhì)量增量/總食物攝入量×100%；肝指數(shù)=肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%。

1.2.4 組織形態(tài)學(xué)觀察

分別取小鼠肝右葉同一位置少量組織，置于4%多聚甲醛固定液中固定48?h，常規(guī)石蠟包埋，切片，用于HE染色；分別取少量小鼠肝組織，蔗糖溶液脫水，OCT包埋，冰凍切片，用于油紅O染色，顯微鏡下觀察肝組織的脂肪堆積和炎癥反應(yīng)情況。

1.2.5 生化指標(biāo)檢測(cè)

血樣經(jīng)4℃下3?000?r·min-1離心15?min，分離出血清樣本，分裝凍存于–80℃用于后續(xù)試驗(yàn)。稱取100?mg肝組織，加入1?mL裂解液，用生物樣品均質(zhì)器勻漿，離心，取上清液即為肝組織勻漿上清液。血清總膽固醇（Total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白-膽固醇（Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白-膽固醇（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine transferase，ALT）和肝組織上清TC按試劑盒說(shuō)明書要求進(jìn)行測(cè)定。

1.2.6 肝組織IL-1、IL-18含量變化

稱取一定量肝組織，按質(zhì)量體積比1︰12加入預(yù)冷的PBS，再加入少量蛋白酶抑制劑，勻漿，離心，取上清液，按ELISA試劑盒說(shuō)明書要求測(cè)定，IL-1、IL-18含量。

1.2.7 腸道菌群變化

每組隨機(jī)選取3只小鼠，用酒精棉簽刺激小鼠肛門促其排便，分別用高壓滅菌后的離心管儲(chǔ)存每只小鼠的糞便，全程保證無(wú)菌，用于16?S rDNA基因高通量測(cè)序分析。按照E.Z.N.ATMMag-Bind Soil DNA Kit試劑盒步驟提取細(xì)菌DNA，采用16?S rDNA基因V3-V4區(qū)特異性引物[341F（正向引物）：CCTACGGGNGGCWGCAG，805R（反向引物）：GACTACHVGGGTATCTAATCC]進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳檢測(cè)，擴(kuò)增完成后進(jìn)行產(chǎn)物純化，利用Qubit 3.0 DNA檢測(cè)試劑盒對(duì)回收的DNA精確定量，每個(gè)樣品DNA量取10?ng，采用Illumina Miseq 2×300?bp平臺(tái)進(jìn)行高通量測(cè)序，最終上機(jī)測(cè)序濃度為20?pmol，測(cè)序數(shù)據(jù)平均為40?000條。對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，序列預(yù)處理之后得到靶區(qū)域序列，使用Usearch軟件（5.2.236版本），根據(jù)97%的相似度對(duì)序列進(jìn)行OTU聚類，使用R語(yǔ)言根據(jù)各樣本OTU豐度計(jì)算多樣性距離矩陣作主成分分析（Principal component analysis，PCA）圖；采用RDP classifier和Blast對(duì)OTU序列進(jìn)行分類學(xué)分析，比對(duì)RDP數(shù)據(jù)庫(kù)（http://rdp.cme.msu.edu/misc/resources.jsp）和Silva數(shù)據(jù)庫(kù)（www.arb-silva.de），從而對(duì)每個(gè)OTU進(jìn)行物種分類，再利用R語(yǔ)言對(duì)物種注釋結(jié)果進(jìn)行可視化展示；利用LEfSe分析尋找組間差異菌群。

1.2.8 腸道菌群與NAFLD相關(guān)性分析

采用Spearman相關(guān)性分析方法分析腸道菌群與NAFLD表型間的相關(guān)性，其中差異菌群為L(zhǎng)EfSe分析得到的差異菌群，NAFLD表型為血清TC、LDL-C/HDL-C、ALT、肝組織TC、IL-1、IL-18，利用R語(yǔ)言和Cytoscape軟件作相關(guān)分析可視化熱圖和網(wǎng)絡(luò)圖，相關(guān)分析熱圖展示了按至少有一個(gè)相關(guān)性<0.05和/或至少有一個(gè)相關(guān)系數(shù)||>0.5的標(biāo)準(zhǔn)篩選后所有符合標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)據(jù)，相關(guān)分析網(wǎng)絡(luò)圖僅展示<0.05，且||>0.5的相關(guān)菌群。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 各組小鼠體重、食物利用率、肝指數(shù)變化

如圖1所示，各組小鼠給藥前體重差異不明顯，經(jīng)過(guò)14周喂養(yǎng)后，模型組體重最高，增重最多，較正常對(duì)照組差異顯著（<0.01），陽(yáng)性對(duì)照組次之，青磚茶低、高劑量組增重較小，與模型組比較有顯著性差異（<0.01）。

各組小鼠平均進(jìn)食量無(wú)明顯差異，食物利用率模型組最大，而青磚茶低、高劑量組相對(duì)較小（圖2-A和圖2-B），說(shuō)明青磚茶減輕小鼠體重不是由于減少攝食量引起的。與正常對(duì)照組比較，模型組肝重顯著增加（<0.01），肝指數(shù)最大，與模型組比較，青磚茶高劑量組肝重顯著降低，肝指數(shù)顯著減小（<0.01，圖2-C和圖2-D）。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明青磚茶可以有效抑制小鼠體重和肝重的增加，以及肝指數(shù)增大。

注：NC：正常對(duì)照組，MC：模型對(duì)照組，PC：陽(yáng)性藥物對(duì)照組（血脂康90?mg·kg-1），LD：青磚茶低劑量組（75?mg·kg-1），HD：青磚茶高劑量組（300?mg·kg-1）。n=8，±SD，與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。下同

2.2 各組小鼠肝組織病理切片

HE染色結(jié)果（圖3）顯示，正常對(duì)照組小鼠的肝細(xì)胞界限分明，細(xì)胞核清晰，胞漿均勻，肝索排列整齊，肝竇結(jié)構(gòu)清晰；模型組小鼠的肝細(xì)胞大小不一，細(xì)胞界限不清，部分細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，肝索排列出現(xiàn)紊亂，肝竇變小，肝細(xì)胞胞漿有圓形空泡，同時(shí)伴有炎癥浸潤(rùn)；陽(yáng)性藥物組小鼠及青磚茶干預(yù)組小鼠肝臟病理有不同程度改善。油紅O染色結(jié)果（圖4）顯示，模型組小鼠肝組織有大量脂滴存在，陽(yáng)性藥物及青磚茶干預(yù)組有所改善。這些結(jié)果表明高脂飲食可以引起小鼠肝細(xì)胞脂肪變性和炎癥，青磚茶可有效預(yù)防高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪肝的發(fā)生。

圖2 各組小鼠食物利用率和肝指數(shù)

2.3 各組小鼠生化指標(biāo)變化

如圖5和圖6所示，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠血清TC、LDL-C、ALT和肝組織TC含量均顯著增高（<0.01），HDL-C含量有所降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（>0.05），而LDL-C/HDL-C顯著性增高（<0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組小鼠血清TC顯著性降低（<0.05），LDL-C/HDL-C、肝組織TC水平極顯著性降低（<0.01），青磚茶干預(yù)組小鼠血清TC、LDL-C/HDL-C、ALT和肝組織TC含量均極顯著性降低（<0.01）。這些結(jié)果表明，青磚茶能有效調(diào)節(jié)小鼠的脂質(zhì)代謝平衡，降低血脂，改善高脂小鼠的肝功能，減輕肝組織受損的程度。

2.4 各組小鼠肝組織IL-1β、IL-18含量變化

由圖7可見(jiàn)，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織IL-1、IL-18含量均極顯著增高（<0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組及青磚茶干預(yù)組上述指標(biāo)均極顯著降低（<0.01）。結(jié)果表明，14周高脂飲食可以引起小鼠肝臟產(chǎn)生炎癥，青磚茶可有效改善炎癥的發(fā)生。

2.5 腸道菌群變化分析

通過(guò)對(duì)各組小鼠糞便中的16?S rDNA基因V3-V4區(qū)進(jìn)行高通量測(cè)序，主成分分析結(jié)果顯示青磚茶干預(yù)組小鼠腸道菌群的整體分布與模型組小鼠明顯不同（圖8）?；诜诸悓W(xué)分析結(jié)果，青磚茶干預(yù)組小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)和豐度與模型組小鼠有明顯區(qū)別（圖9和圖10）。LEfSe分析結(jié)果顯示，屬水平差異菌群有4種，即、、和（圖11），其中，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠物種豐度增加，、、物種豐度降低；與模型組比較，干預(yù)組小鼠物種豐度降低，、、物種豐度增加（圖12）。

圖4 油紅O染色結(jié)果（×400）

圖5 血清和肝組織中TC濃度變化

圖6 血清中LDL-C/HDL-C和ALT變化

圖7 肝組織中IL-1β和IL-18含量變化

圖8 主成分分析3D圖和2D圖

圖9 屬水平各組群落結(jié)構(gòu)分布圖

圖10 屬水平物種豐度熱圖

圖11 LEfSe分析環(huán)形樹(shù)狀圖

注：n=3，±SD。與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。A：各組小鼠擬桿菌屬菌群豐度變化，B：各組小鼠乳桿菌屬菌群豐度變化，C：各組小鼠擬普雷沃菌屬菌群豐度變化，D：各組小鼠Saccharibacteria_genera_incertae_sedis菌群豐度變化

2.6 腸道菌群變化與NAFLD表型相關(guān)性分析

腸道菌群與NAFLD表型相關(guān)分析可視化結(jié)果見(jiàn)圖13和圖14，NAFLD表型與呈正相關(guān)，與、、呈負(fù)相關(guān)，其中，相關(guān)性最強(qiáng)的菌群為和。

3 討論

NAFLD為非酒精因素引起的肝臟代謝綜合征，常以高脂飲食誘導(dǎo)動(dòng)物模型模擬人類NAFLD發(fā)病機(jī)制。本課題組前期體外研究發(fā)現(xiàn)青磚茶對(duì)HepG2細(xì)胞脂肪變性具有改善作用[14]，在此基礎(chǔ)上，本研究以14周高脂飲食誘導(dǎo)小鼠NAFLD模型并予以青磚茶干預(yù)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組小鼠體重、肝重均顯著性升高，食物利用率、肝指數(shù)最大，病理切片顯示脂肪堆積和炎癥浸潤(rùn)，血清TC、LDL-C/HDL-C、ALT、肝組織TC、IL-1、IL-18含量均有顯著性升高，表明模型組造模成功，而青磚茶干預(yù)組小鼠體重、肝重均有顯著性降低，食物利用率、肝指數(shù)較小，肝臟脂質(zhì)沉積與炎癥反應(yīng)有所改善，血清TC、LDL-C/HDL-C、ALT、肝組織TC、IL-1、IL-18含量均有顯著性降低，說(shuō)明青磚茶可有效預(yù)防NAFLD的發(fā)生及進(jìn)展。

圖13 相關(guān)分析熱圖

圖14 相關(guān)分析網(wǎng)絡(luò)圖

目前，NAFLD確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚。近年來(lái)腸道菌群成為研究熱點(diǎn)，作為與宿主存在共生關(guān)系包含1?000～1?500種約10～100萬(wàn)億細(xì)菌的復(fù)雜生態(tài)系統(tǒng)，約為人體基因組的150倍，人類腸道菌群主要包括厚壁菌、擬桿菌、放線菌以及少量的變形桿菌[15-16]。正常情況下，菌群間、菌群與宿主間存在一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)平衡出現(xiàn)紊亂，就會(huì)引起多種疾病的發(fā)生，越來(lái)越多文獻(xiàn)報(bào)道腸道菌群與NAFLD有關(guān)[17-18]。解剖結(jié)構(gòu)上腸道和肝臟通過(guò)門靜脈直接關(guān)聯(lián)，腸道菌群紊亂會(huì)直接影響肝臟，即通過(guò)“腸-肝軸”促進(jìn)NAFLD的發(fā)生和進(jìn)展[19]。本研究探究與NAFLD相關(guān)的腸道菌群以及青磚茶對(duì)其的影響，結(jié)果顯示，模型組小鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)和豐度與正常對(duì)照組比較有明顯不同，而青磚茶可有效調(diào)節(jié)小鼠腸道菌群的變化，使之趨于正常對(duì)照組，分析找到4種屬水平差異菌群，其中，模型組物種豐度增加，、、物種豐度降低，而青磚茶干預(yù)組物種豐度降低，、、物種豐度增加。4種屬水平差異菌群與NAFLD表型作相關(guān)分析顯示，與NAFLD表型正相關(guān)，、、與NAFLD表型呈負(fù)相關(guān)，其中，相關(guān)性最強(qiáng)的菌群為和。有研究報(bào)道，與健康個(gè)體相比，NAFLD患者中擬桿菌數(shù)量增加，厚壁菌數(shù)量減少[20]，另有研究表明，攝取乳酸桿菌，如嗜酸乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌和植物乳桿菌，可以通過(guò)降低膽固醇來(lái)改善非酒精性脂肪變性的發(fā)展[21]，本試驗(yàn)研究結(jié)果與這些相關(guān)研究報(bào)道一致。

腸道菌群促進(jìn)NAFLD發(fā)展的機(jī)制主要包括：（1）腸道菌群紊亂會(huì)導(dǎo)致機(jī)體對(duì)游離脂肪酸的吸收增加及產(chǎn)熱減少，最終引起儲(chǔ)存的脂肪量增加，引起肥胖；（2）腸道菌群紊亂會(huì)改變腸道黏膜通透性，有害菌尤其是革蘭氏陰性菌增多，引起脂多糖-內(nèi)毒素-TLRs介導(dǎo)炎癥反應(yīng)；（3）腸道菌群通過(guò)其代謝產(chǎn)物介導(dǎo)NAFLD：如增加短鏈脂肪酸；參與膽堿代謝；調(diào)節(jié)膽汁酸代謝；增加內(nèi)源性乙醇量等[22-24]。本課題后期試驗(yàn)將研究腸道菌群代謝產(chǎn)物膽汁酸與NAFLD的關(guān)系，探究腸道菌群的改變引起的代謝產(chǎn)物膽汁酸產(chǎn)生的變化與NAFLD的內(nèi)在聯(lián)系。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群與NAFLD表型呈正相關(guān)，與NAFLD表型呈負(fù)相關(guān)，青磚茶干預(yù)后物種豐度降低，物種豐度增加，青磚茶通過(guò)影響腸道菌群變化對(duì)NAFLD具有一定的預(yù)防作用，這為青磚茶的實(shí)際應(yīng)用提供了一定的試驗(yàn)依據(jù)，然而這些差異菌群參與NAFLD的發(fā)病機(jī)制還需通過(guò)更多的動(dòng)物及臨床糞便移植研究進(jìn)一步驗(yàn)證，以期腸道菌群作為代謝性疾病潛在的診斷工具和治療靶點(diǎn)成為現(xiàn)實(shí)。

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Preventive Effect of Green Brick Tea on Non-alcoholic Fatty Liver Disease via Gut Microbiota Changes

ZHOU Tingting1, CHEN Guiting1, CAO Nan1, HE Jiangang2,HE Gongwei2, XIAO Changyi1,2, LI Shigang1,2*

1. Medical College of China Three Gorges University, Yichang 443002, China; 2. Changshengchuan Green-brick Tea Research Institute of Hubei Province, Yichang 443000, China

The preventive effect of green brick tea (GBT) on the mouse non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) model was studied by affecting changes in gut microbiota.C57BL/6 mice were randomly divided into 5 groups, including normal control group (NC), model control group (MC), positive drug control group (PC), low-dose group (LD) and high-dose group (HD) of GBT. A NAFLD model was established by feeding mice with high-fat diet, and supplemented with low and high doses of GBT water extract and positive drug (Xuezhikang) respectively. The body weight, food utilization efficiency, liver weight, liver index, TC, LDL-C/HDL-C and ALT contents of mice were determined. Liver tissue pathological sections were observed by HE staining and Oil Red O staining. ELISA method was used to detect changes of IL-1and IL-18 in liver tissue. The changes of gut microbiota were analyzed by high-throughput sequencing in 16?S rDNA V3-V4 region, and Spearman's correlation analysis method was used to analyze the correlation between gut microbiota and NAFLD phenotype. Compared with the model control group, the body weight, food utilization efficiency, liver weight, liver index, serum TC, LDL-C/HDL-C, ALT, liver tissue TC, IL-1, and IL-18 contents of mice in the GBT group were significantly reduced, and the degree of liver disease was improved. Gut microbiota analysis and correlation analysis show that the species abundance ofdecreased, and it was positively correlated with the NAFLD phenotype. The species abundance of,, andincreased, and they were negatively correlated with the NAFLD phenotype.andhad the strongest correlation with NAFLD phenotype.Green brick tea has a certain preventive effect on NAFLD, and its effect may be related to the changes in gut microbiota.

gut microbiota, NAFLD, green brick tea, high-throughput sequencing, correlation analysis

S571.1；Q946.84+1

A

1000-369X(2021)05-669-12

2021-02-05

2021-04-23

湖北省區(qū)域創(chuàng)新發(fā)展科技專項(xiàng)（2020BGC015）、宜昌市科技研究與開(kāi)發(fā)項(xiàng)目（A21-1-075）、三峽大學(xué)學(xué)位論文培優(yōu)基金資助項(xiàng)目（2020SSPY112）

周婷婷，女，碩士，主要從事中藥有效性與安全性評(píng)價(jià)方面的研究。*通信作者：fox201@163.com

（責(zé)任編輯：趙鋒）