曾琦 徐作剛

【摘 要】 目的：建立血水草中血根堿、白屈菜紅堿的薄層色譜鑒別方法。方法：樣品加75%乙醇超聲30 min，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取血根堿，白屈菜紅堿對(duì)照品適量，分別加乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。吸取上述三種溶液各2～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲醇-氨水（24∶1∶0.05）的混懸溶液為展開劑，硅膠G薄層板置層析缸中飽和30 min，展開，取出，晾干，在紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果：薄層色譜法檢出血根堿、白屈菜紅堿，且斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)。結(jié)論：該方法可作為血水草中血根堿、白屈菜紅堿的定性的薄層色譜鑒別方法，結(jié)果重復(fù)性、穩(wěn)定性較好。

【關(guān)鍵詞】 血水草;血根堿;白屈菜紅堿;薄層色譜法（TLC）

【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）24-0027-04

Establishment of TLC Identification Method for Salix Officinalis

ZENG Qi1 XU Zuogang2*

1.Qiannan Inspection and Testing Institute，Duyun 558000，China;2.Qiannan Inspection and Testing Institute，Duyun 558000，China

Abstract：Objective To establish a TLC method for the identification of serratine and chelandine in Serratine.Methods The sample was ultrasonicated with 75% ethanol for 30 minutes，and the filtrate was used as the test solution.In addition，proper amount of blood root alkali and chelidonine were added to ethanol to make 0.5 mg solution per 1 mL as the reference solution.Two to five μl of the above three kinds of solutions were absorbed，respectively，on the same silica gel G thin layer plate，the suspension solution of toluene-methanol-ammonia （24∶1∶0.05） was used as the developing agent，and the silica gel G thin layer plate was saturated in the chromatography cylinder for 30 minutes，unfolded，removed，dried，and examined under uv lamp （365 nm）.Results TLC method was used to detect haemorrhagic root alkaloid and chelidonine，and the spots were clear and specific.Conclusion This method can be used as a qualitative TLC method for the identification of serratine and chelidonine in Serratine. The results are reproducible and stable.

Key words：Herba Serrata; Serratine; Chelandine; TLC

血水草（Eomecon chionantha Hance）是中國(guó)亞熱帶第三紀(jì)孑遺物種，是我國(guó)獨(dú)有的單種屬植物。血水草主要分布于貴州南部和北部，福建北部和西部，江西、廣東、廣西、安徽、四川的東部和東南部，浙江西南部，湖南、湖北西南部，云南東部等[1]?！吨袊?guó)植物志》[2]《貴州草藥》[3]《黔本草》[4]《中華本草》（苗藥卷）[5]等均有收載。血水草 “味苦、性寒、有小毒，具清熱解毒、止血、活血止痛之功效，主治目赤腫痛、咽喉疼痛、口腔潰瘍、尿路感染、療瘡腫毒、毒蛇咬傷、癬疹、濕疹、跌打損傷、腰痛、咳血”，全草入藥[6-7]。至今為止，文獻(xiàn)[8-10]報(bào)道己從血水草中分離得到6個(gè)生物堿和1個(gè)三萜類，生物堿類化合物是血水草的主要有效成分，包括白屈菜紅堿、血根堿、原阿托品堿、別隱品堿、氧化血根堿、白屈菜紅默堿等。根據(jù)血水草其化學(xué)成分，為有效控制血水草藥材質(zhì)量，選擇白屈菜紅堿和血根堿為對(duì)照對(duì)血水草進(jìn)行TLC鑒別[11] 。該方法簡(jiǎn)便易操作，專屬性強(qiáng)，結(jié)果重復(fù)性較好。

1 儀器與試藥

SK250LHC超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)儀器有限公司），瑞士梅特勒AG135電子天平，血根堿對(duì)照品（2～10 ℃冷藏）（批號(hào)：510001-201101，含量99.3%，中檢院），白屈菜紅堿（111718-201402，含量80.5%，中檢院），樣品S1于2020年3月采摘于都勻市擺忙鄉(xiāng)，S2 于2020年6月采摘于重慶市奉節(jié)縣，S3于2020年9月采摘于貴定縣巖下村，硅膠G（批號(hào)：20160926），硅膠G （批號(hào)：00081110），均為青島海洋化工有限公司制造;其余試劑均為分析純。樣品采集信息見表1，均經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定。樣品洗凈后曬干，粉碎，過2號(hào)篩，放入干燥器中常溫保存。如圖1所示。

2 試驗(yàn)方法與試驗(yàn)結(jié)果

2.1 樣品中所需成分提取方法的考察 分別取樣品S1～S3各1.0g，按下述方法提?。孩偌蛹状?0 mL，53 HZ超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液;②加75%乙醇20 mL，53 HZ超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液;③加二甲基亞砜20 mL，53 HZ超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

另取血根堿對(duì)照品及白屈菜紅堿對(duì)照品適量，加乙醇分別制成0.5 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述供試品溶液及對(duì)照品溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯-甲醇-氨水（24∶1∶0.05）的混懸溶液為展開劑，飽和30 min后，展開，取出，晾干，在紫外燈（365 nm）下檢視。

試驗(yàn)結(jié)果：方法①主斑點(diǎn)清晰;方法②主斑點(diǎn)清晰，且提取溶劑毒性較小;方法③主斑點(diǎn)未能顯示，未能辨別。方法②操作簡(jiǎn)便，溶劑毒性較小，薄層色譜圖譜展距適中，斑點(diǎn)清晰，干擾少，故選擇方法②為供試品溶液的制備方法。

2.2 不同展開系統(tǒng)的考察 取S1～3樣品按提取方法②制成供試品溶液，取供試品溶液和對(duì)照品溶液各2 μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，分別在下述展開系統(tǒng)中展開：①氯仿-甲醇（12∶4）;②氯仿-甲醇-乙酸乙酯（14∶1∶1）;③氯仿-二甲苯-甲醇-氨水（9∶1∶0.2∶0.05）;④甲苯-甲醇-氨水（24∶1∶0.05）。分別均飽和30 min后，在各展開系統(tǒng)中展開，取出，晾干，在紫外燈（365 nm）下檢視。試驗(yàn)結(jié)果如附圖2所示。

試驗(yàn)結(jié)果：系統(tǒng)①②樣品與對(duì)照品完全未分離，系統(tǒng)分離效果非常差，斑點(diǎn)不清晰，拖尾較嚴(yán)重;系統(tǒng)③兩個(gè)主斑點(diǎn)清晰，分離效果好，但展開劑中氯仿毒性較大;系統(tǒng)④兩個(gè)主斑點(diǎn)清晰，分離效果好，展開劑的毒性較小，因此選擇④為血水草薄層色譜鑒別的展開系統(tǒng)。

2.3 耐用性考察 按照國(guó)家藥典委員會(huì)《中藥分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則實(shí)施細(xì)則》的相關(guān)要求，分別進(jìn)行耐用性考察。

樣品點(diǎn)樣量的考察：取S5樣品按提取方法②制成供試品溶液，分別取供試品溶液1、2、3、5、6、8、10 μL，點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯：甲醇：氨水（24∶1∶0.05）溶液為展開劑，飽和30 min后，展開，取出，晾干，在365 nm紫外燈下觀察，結(jié)果供試品溶液以點(diǎn)樣量2 μL效果最佳?？紤]因產(chǎn)地、季節(jié)影響，樣品含量有所差異，故點(diǎn)樣體積選擇為2 μL。

溫度的考察：進(jìn)行了低溫（10 ℃）、室溫（25 ℃）、高溫（35 ℃）的考察，分離效果均較好，斑點(diǎn)清晰，三個(gè)溫度下的展開效果均未有明顯差異。

濕度的考察：進(jìn)行了低濕度（30%）、中等濕度（50%）和高濕度（75%）的考察，結(jié)果表明在上述條件下都能較好分離，未有明顯差異;耐用性較好。

薄層板的考察：選用硅膠G預(yù)制板、自制硅膠G板，結(jié)果均能較好分離。

2.4 血水草的薄層色譜鑒別方法 取本品細(xì)粉1.0 g，加75%乙醇20 mL，超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取血根堿，白屈菜紅堿對(duì)照品適量，加乙醇分別制成每1 mL含0.5 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》 2015版通則0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲醇-氨水（24∶1∶0.05）的混懸溶液為展開劑，硅膠G薄層板置層析缸中飽和30 min，展開，取出，晾干，在紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。10批次樣品薄層色譜圖如圖3所示。

3 討論

生物堿是血水草中的主要成分及藥理活性物質(zhì)，當(dāng)中以白屈菜紅堿和血根堿的含量較高，且易溶于甲醇，乙醇，二甲基亞砜等有機(jī)溶劑。故選取安全、經(jīng)濟(jì)且最常用的75%乙醇作為提取溶劑，且血水草中其他組分對(duì)檢測(cè)干擾較小。文中所用到的③④展開劑，都能達(dá)到預(yù)期效果，但由于展開劑③中氯仿的毒性較大，故選用毒性較小的展開劑④;血水草全草中所顯主要斑點(diǎn)與血根堿對(duì)照、白屈菜紅堿對(duì)照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，位置居中，溫濕度或薄層板厚度對(duì)色譜效應(yīng)的影響較小結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性較好。參照薄層色譜法（2015年版《中國(guó)藥典》通則0502），分別對(duì)展開劑，薄層板等條件進(jìn)行考察，并按照國(guó)家藥典委員會(huì)《中藥分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則實(shí)施細(xì)則》的相關(guān)要求進(jìn)行方法學(xué)耐用性考察。

本方法篩選出的薄層色譜鑒別方法分離度較好，專屬性強(qiáng)，可作為血水草中血根堿和白屈菜紅堿的薄層鑒別方法。

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（收稿日期：2021-05-08 編輯：陶希睿）