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        糧食真菌毒素含量檢測(cè)結(jié)果的誤差分析

        2021-10-14 02:25:40申兆燕王杰夫楊思成
        現(xiàn)代食品 2021年15期
        關(guān)鍵詞:制樣黃曲霉毒素

        ◎ 于 鶴,申兆燕,王杰夫,劉 暢,楊思成

        (1.中央儲(chǔ)備糧阜新直屬庫(kù)有限公司,遼寧 阜新 123000;2.黃岡市公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心,湖北 黃岡 438000)

        真菌毒素是真菌在適宜條件下產(chǎn)生的一種低分子量的次生代謝物,大多數(shù)真菌毒素可抑制動(dòng)物體內(nèi)蛋白合成,破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),進(jìn)而影響動(dòng)物體肝臟、腎臟、造血等組織器官的正常工作,具有較強(qiáng)的致癌、致畸、致突變作用,對(duì)人和動(dòng)物的生存與健康造成了重大威脅[1]。在谷物及其制品中,常見的真菌毒素有黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)、玉米赤霉烯酮毒素(Zearalenone,ZEN)、嘔吐毒素(Deoxynivalenol,DON)等[2]。真菌毒素污染是不可忽視的問題,為防止糧食在流通環(huán)節(jié)存在質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn),《糧食流通管理?xiàng)l例》中真菌毒素已被列為必檢項(xiàng)目[3]。糧食衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 2761—2017中規(guī)定,真菌毒素限量指標(biāo)應(yīng)符合表1要求[4]。

        表1 糧食中真菌毒素限量要求表(單位:μg·kg-1)

        糧食生霉粒、霉變粒含量的高低與真菌毒素含量多少無明顯正相關(guān)性,不可通過霉變情況判斷真菌毒素含量,真菌毒素檢測(cè)值高低主要與糧食是否感染產(chǎn)毒霉菌有關(guān)[5]。糧食在生長(zhǎng)、運(yùn)輸、存儲(chǔ)和加工等環(huán)節(jié)都會(huì)受到真菌入侵,在宿主、光照、溫度、水分活度等適宜環(huán)境條件下,產(chǎn)毒霉菌會(huì)產(chǎn)生真菌毒素,產(chǎn)生的真菌毒素具有隨機(jī)性、分布不均—的特點(diǎn)[6],且真菌毒素通常只有ppm或ppb級(jí)別(ppm級(jí)別相當(dāng)于32 kg糧食中的一顆)[7],致使準(zhǔn)確檢測(cè)谷物中真菌毒素的含量十分困難。

        1 影響糧食真菌毒素含量檢測(cè)結(jié)果的因素

        同其他檢測(cè)項(xiàng)目一樣,糧食真菌毒素含量的檢測(cè)也包括抽樣、制樣、分析檢測(cè)等步驟。每個(gè)步驟都會(huì)不可避免的引入誤差,對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成直接或間接的影響[8]。

        1.1 扦樣環(huán)節(jié)對(duì)糧食真菌毒素含量檢測(cè)結(jié)果的影響

        扦樣是糧食真菌毒素檢測(cè)的第一步,直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,如果扦樣方法不合理、樣品數(shù)量不具代表性,任何精密儀器的分析結(jié)果將毫無意義。在糧食儲(chǔ)運(yùn)中常見的扦樣類型有運(yùn)糧汽車扦樣(對(duì)入庫(kù)車輛進(jìn)行自動(dòng)扦樣器扦樣)和靜態(tài)糧倉(cāng)扦樣(人工對(duì)不同扦樣點(diǎn)進(jìn)行電動(dòng)吸風(fēng)機(jī)扦樣),見圖1[9]。

        圖1 扦樣示意圖

        扦樣要做到多點(diǎn)、隨機(jī)、均勻,使得每個(gè)部位都有相同的概率被取到?!都Z食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法》(GB 5491—1985)對(duì)扦樣方法作出了明確要求,尤其在倉(cāng)房扦樣中需做到分區(qū)設(shè)點(diǎn)、分層扦樣[10],糧庫(kù)扦樣點(diǎn)位如圖2所示。

        圖2 糧庫(kù)扦樣布點(diǎn)示意圖

        在高大平房倉(cāng)的扦樣中,每區(qū)面積不超過50 m2,各區(qū)設(shè)中心4角共5個(gè)點(diǎn),兩區(qū)邊界的點(diǎn)為共有點(diǎn),糧堆邊緣的點(diǎn)設(shè)在距邊緣50 cm處;糧堆高度在23 m,分上、中、下3層,上層在糧面下10~20 cm處,中層在糧堆中間,下層在距底部20 cm處,堆高在35 m,應(yīng)分4層;在圓筒倉(cāng)扦樣中,每層按圓筒倉(cāng)直徑分內(nèi)(中心)、中(半徑的一半處)、外(距倉(cāng)邊30 cm處)3圈。直徑在8 m以下的,每層按內(nèi)中外設(shè)1、2、4共7個(gè)點(diǎn),直徑在8 m以上的,每層按內(nèi)中外設(shè)1、4、8共13個(gè)點(diǎn)。按區(qū)按點(diǎn),從上至下,逐層扦樣。

        扦樣點(diǎn)對(duì)真菌毒素檢測(cè)結(jié)果的影響較大,余敦年等[11]對(duì)糧倉(cāng)不同空間位置的稻谷進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),上、中、下層的黃曲霉B1含量均存在差異,近墻部位黃曲霉B1含量和超標(biāo)率較大,中層黃曲霉B1含量高于其他部位。同時(shí)各點(diǎn)受真菌毒素的污染情況不一樣,有些糧堆中受真菌污染的糧食顆粒少,但受污染的顆粒真菌毒素含量極高[12],致使檢測(cè)結(jié)果超標(biāo)。在儲(chǔ)藏過程中,隨著糧堆水分和溫濕度的改變,受侵染的區(qū)域還會(huì)發(fā)生蟲霉交替的演變,適應(yīng)環(huán)境的菌種會(huì)更有利于生長(zhǎng),受感染糧粒的真菌毒素含量和類型隨之改變。糧庫(kù)扦樣過程中,不同空間位置和不同糧粒受真菌毒素污染程度差異較大,是檢測(cè)結(jié)果的主要誤差來源。

        扦樣量也會(huì)對(duì)真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果造成差異影響,表2為在一卡車玉米中加標(biāo)20 μg·kg-1的黃曲霉毒素污染情況[13]。從表2可以看出,在一卡車中扦樣量取4.50 kg,玉米黃曲霉毒素檢測(cè)范圍在11.6~28.4 μg·kg-1;在一卡車中扦樣量取0.45 kg,檢測(cè)范圍在0~46.9 μg·kg-1。由此可見,適當(dāng)提高扦樣量可減小檢測(cè)結(jié)果的誤差。原料扦樣后按照分樣器法進(jìn)行分樣,分出約1 kg樣品進(jìn)行混勻[14],這樣可以保證檢測(cè)的最低檢測(cè)量和檢測(cè)樣品的霉菌毒素的分布均一性。

        表2 一卡車玉米中有20 μg·kg-1黃曲霉污染的情況表

        1.2 制樣環(huán)節(jié)對(duì)真菌毒素含量檢測(cè)結(jié)果的影響

        樣品的均勻性是制樣環(huán)節(jié)的主要誤差,在糧食入庫(kù)時(shí)節(jié),基層檢驗(yàn)員在使用快捷設(shè)備進(jìn)行真菌毒素檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn),同一樣品的不同粉末檢測(cè)結(jié)果相差較大,而取同一提取液的檢測(cè)結(jié)果平行性良好,制粉的均勻性問題給收糧工作帶來很大困擾,尤其是對(duì)超標(biāo)附近的檢測(cè)結(jié)果難以把控。從真菌毒素在糧食顆粒的分布來看,不同部位含量也有所差異。對(duì)一批黃曲霉毒素超標(biāo)的稻谷進(jìn)行液相分析,發(fā)現(xiàn)碾磨后的精米中黃曲霉毒素B1含量在正常范圍內(nèi),糙米中黃曲霉毒素B1含量較高,而糠粉中黃曲霉B1含量最高,且占稻谷籽粒黃曲霉毒素B1含量的90%。為保證樣品的均勻性,需要選擇合適的研磨方式對(duì)脫殼后的糙米進(jìn)行研磨,研磨產(chǎn)生的顆粒足夠小,可使制成的樣品均勻性良好,從而減少平行樣品間的變異性,減小分析誤差。GB 5009.22—2016規(guī)定谷物粉碎后的粒徑通過2 mm孔徑試驗(yàn)篩,在稱樣前建議先攪拌搖勻,再進(jìn)行下一步的儀器設(shè)備分析。

        次級(jí)分析樣品的取樣量也會(huì)對(duì)真菌毒素的檢測(cè)結(jié)果造成影響。王松雪等[15]對(duì)總體黃曲霉污染水平為20 ng·g-1的樣品進(jìn)行薄層色譜分析,發(fā)現(xiàn)次級(jí)分析樣品的取樣量從50 g提高到100 g,測(cè)定結(jié)果范圍從(20±36.9)ng·g-1降低為(20±20.5)ng·g-1,適當(dāng)提高次級(jí)分析樣品的取樣量,可減少真菌毒素的分析誤差。在制樣過程中,如果只是簡(jiǎn)單地減少樣品量大小,直接取少量的樣品進(jìn)行研磨,會(huì)進(jìn)一步降低樣品的代表性,在研磨前建議用四分法分出約100 g樣品進(jìn)行脫殼、制粉。

        1.3 分析方法對(duì)糧食真菌毒素含量檢測(cè)結(jié)果的影響

        近年對(duì)分析檢測(cè)過程中的誤差研究較多,主要集中在送檢到實(shí)驗(yàn)室后樣品的提取、凈化、分離和檢測(cè)上,目前已建立了一系列的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和方法,常見的有高效液相色譜法、免疫層析法等,各種方法的特點(diǎn)如表3所示。

        表3 不同分析方法檢測(cè)真菌毒素含量比較表

        免疫層析法法更適用于批量樣品的初篩,容易出現(xiàn)假陰性和假陽性結(jié)果,難以用于準(zhǔn)確定量分析。在定量分析檢測(cè)中,高效液相色譜法具有精準(zhǔn)度高、檢出限低、靈敏度強(qiáng)的優(yōu)勢(shì),大大減少了分析檢測(cè)過程中引入的誤差,是糧油質(zhì)檢機(jī)構(gòu)出具檢測(cè)報(bào)告的常用方法。另外,近年來全自動(dòng)免疫磁珠凈化儀等前處理裝置的研發(fā),避免了液相過親和柱、氮吹等前處理步驟,解決了液相前處理操作煩瑣的問題[23]。隨著新技術(shù)的發(fā)展,真菌毒素檢測(cè)研究開始出現(xiàn)在納米材料和識(shí)別原件上,運(yùn)用微流控技術(shù)、拉曼光譜等新技術(shù)構(gòu)建真菌毒素指紋圖譜,結(jié)合智能化手機(jī)可實(shí)現(xiàn)真菌毒素的實(shí)時(shí)在線監(jiān)測(cè)[24],但作為新技術(shù)在真菌毒素的準(zhǔn)確定量分析上還存在不足,需要進(jìn)一步研究和完善。

        2 結(jié)語

        目前在分析方法上,運(yùn)用大型精密設(shè)備基本可避免出現(xiàn)真菌毒素檢測(cè)的誤差問題,然而,扦樣和制樣過程中引入的誤差仍亟待解決?,F(xiàn)有的糧油扦樣標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于扦樣方法和扦樣量只做了簡(jiǎn)單介紹,實(shí)際工作中難以對(duì)不同運(yùn)糧車輛、不同倉(cāng)型和倉(cāng)容的糧庫(kù)在扦樣要求上形成統(tǒng)一。因此,還需要進(jìn)一步規(guī)范真菌毒素檢測(cè)的具體扦樣步驟。在制樣過程中,人工分樣、機(jī)械研磨等步驟也都會(huì)造成真菌毒素分布不均一,而引入具備充分混勻樣品能力的自動(dòng)分樣器和連續(xù)粉碎裝備可減少誤差來源。只有完善扦樣和制樣過程中的具體規(guī)定,避免真菌毒素分布分布不均一問題,才能從根本上減小糧食真菌毒素檢測(cè)的誤差。

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