趙智萍

宮頸癌作為世界范圍內(nèi)較常見的婦科癌癥，發(fā)病人數(shù)占婦科所有惡性腫瘤的15%[1]。HPV作為臨床較多見的嗜人黏膜鱗狀上皮及皮膚的脫氧核糖核酸(DNA)病毒，能在侵入基底細(xì)胞后不斷復(fù)制，損害宮頸組織后會(huì)引起宮頸上皮異型增生，從而發(fā)展為宮頸癌[2]。但HPV感染作為一個(gè)始動(dòng)因素，可能存在其它因素參與協(xié)同，共同促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展[3]。致病菌、炎性細(xì)胞作為較多疾病的致病因子，可能通過影響陰道微環(huán)境而促進(jìn)宮頸的癌性病變[4]。本研究選取我院近2年來收治的宮頸病變患者110例作為研究對象，探討HPV感染宮頸癌患者陰道菌群及宮頸炎性因子表達(dá)變化，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 基礎(chǔ)資料

選取我院2017年9月至2019年9月收治的宮頸病變患者110例作為研究對象，按照其病變程度不同將其分為宮頸癌組和癌前病變(宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變)組，每組55例，其中宮頸癌組主要包括鱗癌35例、腺癌12例、腺鱗癌8例，癌前病變組主要包括低級別子宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)32例、高級別子宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)23例，比較兩組患者一般資料，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)實(shí)行。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①參照《婦產(chǎn)科學(xué)》[5]診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有患者均被確診為宮頸癌及子宮頸上皮瘤樣病變，且經(jīng)病理學(xué)切片檢查證實(shí)；②34～65歲；③患者及其家屬知情并簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①合并子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等其它生殖道腫瘤；②既往存在放化療史；③伴有糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等免疫性疾??；④既往無性生活史；⑤已行全子宮切除術(shù)。

1.4 方法

①陰道、宮頸分泌物收集：兩組患者均于治療前進(jìn)行分泌物采集，先用不涂潤滑劑的無菌窺器暴露陰道，再用精密pH試紙接觸陰道壁，通過三根無菌長棉簽在陰道側(cè)壁往上1/3段近穹窿處進(jìn)行旋轉(zhuǎn)，若棉簽上可見清晰的分泌物附著即代表取材成功；采用無菌窺器暴露宮頸陰道部后先用無菌棉球擦拭宮頸口表面黏液，接著將專用無菌棉拭子插入宮頸管內(nèi)1.5～2 cm，棉拭子朝宮頸方向轉(zhuǎn)動(dòng)5～8 s，取出棉拭子時(shí)注意不要觸碰到陰道壁以免影響檢測結(jié)果。②HPV檢測：采用HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀和配套試劑盒對患者宮頸分泌物進(jìn)行分型檢測，本次檢測共檢測出HPV-16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等16種亞型，其中以HPV-16、18為主要高危亞型，采用DML2000型HCⅡ基因雜交信號擴(kuò)大儀對宮頸分泌物中細(xì)胞HPV病毒載量進(jìn)行檢測，按照配套的人類乳頭瘤病毒-脫氧核糖核酸(HPA-DNA)試劑盒說明書進(jìn)行裂解、雜交、捕獲、信號放大、分析等實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，并讀取相對應(yīng)的光學(xué)單位(RLU)，以HPV-DNA病毒載量>1.0 ng/l為陽性[6]。③陰道菌群檢測：采用懸滴法對陰道分泌物進(jìn)行檢測以確定滴蟲感染，通過革蘭氏染色法來確定細(xì)菌、霉菌感染，通過培養(yǎng)基培養(yǎng)試子來確定支原體和衣原體感染。④炎性因子水平：將宮頸口分泌物置于生理鹽水無菌試管內(nèi)并進(jìn)行離心處理，采取雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測檢測炎性因子干擾素γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素2(IL-2)、白細(xì)胞介素4(IL-4)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平，儀器均為日立7060型全自動(dòng)生化分析儀，試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.5 觀察指標(biāo)

①比較兩組HPV-16、HPV-18、其它型、混合型、HPV-DNA陽性患者比例。②比較兩組滴蟲、細(xì)菌、支原體、衣原體、霉菌、混合菌、菌群感染陽性患者比例。③比較兩組炎性因子IFN-γ、IL-2、IL-4、TNF-α水平。④通過Spearman系數(shù)分析HPV-DNA陽性率與陰道菌群感染陽性率及IFN-γ、IL-6、IL-10、TNF-α水平的相關(guān)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組HPV感染類型及HPV-DNA陽性率比較

宮頸癌組HPV-16、HPV-18、混合型及HPV-DNA陽性患者比例顯著高于癌前病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組HPV感染類型及HPV-DNA陽性率比較(例，%)

2.2 兩組陰道群菌感染類型及陽性率比較

宮頸癌組滴蟲、細(xì)菌、支原體、衣原體、菌群感染陽性患者比例顯著高于癌前病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組陰道群菌感染類型及陽性率比較(例，%)

2.3 兩組宮頸分泌物炎性因子水平比較

宮頸癌組IFN-γ、IL-2水平顯著低于癌前病變組，IL-4水平顯著高于癌前病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 兩組宮頸分泌物炎性因子水平比較

2.4 HPV-DNA陽性率與陰道菌群、炎性水平相關(guān)性分析

HPV-DNA陽性率與菌群感染陽性率、IL-4水平呈正相關(guān)，與IFN-γ、IL-2水平呈負(fù)相關(guān)，見表5。

表5 HPV-DNA陽性率與陰道菌群、炎性水平相關(guān)性分析

3 討論

宮頸病變包括發(fā)生于宮頸的各種疾病，其中最常見的就是宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸癌。宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變作為宮頸癌發(fā)生過程的必經(jīng)階段，屬于1種癌前病變，多發(fā)生于性生活活躍的的婦女群體，因此通過比較宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變及宮頸癌患者陰道微環(huán)境變化，更有利于了解宮頸癌性病變的協(xié)同因素[7]。在宮頸病變發(fā)展過程中，局部組織會(huì)出現(xiàn)壞死、出血，從而發(fā)生感染，給致病菌在陰道的大量繁殖創(chuàng)造條件，而致病菌對陰道微環(huán)境平衡的打破會(huì)影響宿主免疫機(jī)制進(jìn)而引起炎性因子表達(dá)的異常，因此需要增加對宮頸癌患者陰道微環(huán)境變化的研究，以為未來臨床預(yù)防及治療提供新思路[8]。

本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組HPV-16、HPV-18型、混合型及HPV-DNA陽性患者比例顯著高于癌前病變組，提示宮頸癌患者高危及混合型HPV感染比例、病毒載量顯著多于宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變患者。HPV是乳頭瘤病毒亞群中一組無包膜、結(jié)構(gòu)簡單的DNA病毒，沒有囊膜但包含72個(gè)殼微粒，目前已知數(shù)百種HPV基因型，其中大約有40種亞型和人類生殖器皮膚黏膜病變相關(guān)，根據(jù)致病能力可將其分為高危型和低危型，HPV-16、HPV-18即為最常見的高危感染型別，能隨基底細(xì)胞分化成熟而在表層顯露，一旦表層脫落，病毒即可釋放到周圍環(huán)境并游離于細(xì)胞核內(nèi)，當(dāng)機(jī)體免疫力低下或宿主基因發(fā)生突變時(shí)，HPV病毒發(fā)生整合進(jìn)而發(fā)展為持續(xù)感染，從而促進(jìn)癌性病變[9]。同時(shí)，胥莎莎等[10]的研究表明，多重混合型HPV感染是病毒持續(xù)性感染的危險(xiǎn)因素，更易導(dǎo)致癌前病變，使得宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增高。低水平的HPV-DNA載量容易被機(jī)體免疫系統(tǒng)清除，而HPV-DNA病毒載量的升高能引起機(jī)體持續(xù)感染、使整合的病毒激活原癌基因，導(dǎo)致宮頸惡性病變。

宮頸癌組滴蟲、細(xì)菌、支原體、衣原體、菌群感染陽性患者比例顯著高于癌前病變組，提示陰道菌群失衡可影響宮頸病變的發(fā)生發(fā)展。滴蟲作為侵犯泌尿生殖道的一種常見病原體，侵入機(jī)體后能引起免疫應(yīng)答反應(yīng)，使得機(jī)體難以對HPV病毒進(jìn)行免疫清除，給HPV大量繁殖創(chuàng)造條件。細(xì)菌中的厭氧菌能通過代謝產(chǎn)生胺及帶有致癌作用的亞硝基胺，并分泌磷脂酶C和A2，使得HPV的易感性增加。當(dāng)支原體進(jìn)入女性生殖道后，生殖道會(huì)發(fā)生局部炎性細(xì)胞浸潤，局部非特異性免疫反應(yīng)的增強(qiáng)使得巨噬細(xì)胞不斷吞噬支原體，同時(shí)傳遞抗原給T淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞被活化進(jìn)而分泌多種炎性因子，導(dǎo)致免疫應(yīng)答[11]。衣原體吸附于生殖道黏膜可損傷上皮細(xì)胞，使得機(jī)體發(fā)生炎性反應(yīng)，其代謝產(chǎn)物增加宮頸局部堿度，損害宮頸及陰道局部免疫屏障，給其它病原體的吸附和侵入提供機(jī)會(huì)，HPV易感性增高。這與韓華等[12]的研究相符。

宮頸癌組IFN-γ、IL-2水平顯著低于癌前病變組，IL-4水平顯著高于癌前病變組，提示局部炎癥因子的表達(dá)在宮頸癌發(fā)展中發(fā)揮重要作用。IFN-γ由活化的自然殺傷細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，能幫助機(jī)體進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)，增加其抵抗病毒感染的能力，因而可以對患者輸卵管損傷及其炎癥發(fā)展程度進(jìn)行一定的反映。IL-2作為免疫應(yīng)答及免疫調(diào)節(jié)中的核心因子，其表達(dá)的降低會(huì)減少巨噬細(xì)胞對腫瘤的殺傷活性，IL-4受激活的Th2細(xì)胞分泌，使得Th細(xì)胞向Th2細(xì)胞的分化加快，能使得淋巴細(xì)胞激活殺傷細(xì)胞等功能受到限制，從而減少腫瘤細(xì)胞的增殖和分化[13]。同時(shí)，HPV-DNA陽性率與菌群感染陽性率、IL-4水平呈正相關(guān)，與IFN-γ、IL-2水平呈負(fù)相關(guān)，也提示HPV病毒與陰道菌群及炎性細(xì)胞水平可能存在協(xié)同作用共同促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，這與韓志娟等[14]的研究相符。

綜上，患者從癌前病變向?qū)m頸癌進(jìn)展過程中高危及混合型HPV病毒載量明顯增加，陰道菌群失衡更加明顯，炎性因子可出現(xiàn)異常表達(dá)，需要臨床醫(yī)師注意相關(guān)指標(biāo)的異常表達(dá)。