楊麗娜 欒曉飛 左慧靜 徐榮榮 王 鵬

急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是一種起源于B系或T系淋巴細(xì)胞在骨髓內(nèi)異常增生的惡性腫瘤性疾病[1]，在兒童急性白血病(acute leukemia，AL)中約占80%，目前其臨床治療方法以化療為主的綜合治療方法[2]。現(xiàn)如今，隨著醫(yī)療水平的不斷發(fā)展，急性淋巴細(xì)胞白血病的預(yù)后已得到很大改善，約70%的患兒均能夠得到完全緩解，30%患兒有治愈可能[3]。但是急性淋巴細(xì)胞白血病患兒在治療過(guò)程中，出血仍然是威脅其生命的重要因素，其中血小板數(shù)目的減少程度是評(píng)估出血風(fēng)險(xiǎn)的決定因素。李永倩[4]在研究中報(bào)道了神經(jīng)導(dǎo)向因子-1(Netrin-1)表達(dá)異常與急性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)系。Netrin-1是一種可溶性神經(jīng)軸突導(dǎo)向因子，通過(guò)吸引與排斥的雙向調(diào)節(jié)促使軸突往靶向部位正確生長(zhǎng)。近幾年，大量研究發(fā)現(xiàn)Netrin-1及受體在非神經(jīng)系統(tǒng)組織外亦有廣泛表達(dá)，在乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等疾病中均有表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象，在腫瘤細(xì)胞抗凋亡、增強(qiáng)和遷移中扮演著重要作用[5]。然而，關(guān)于Netrin-1在急性淋巴細(xì)胞白血病中的相關(guān)表達(dá)和對(duì)預(yù)后作用的相關(guān)研究卻鮮有報(bào)道，因此，本研究通過(guò)檢測(cè)急性淋巴細(xì)胞白血病患兒外周血Netrin-1和血小板水平，并對(duì)其相關(guān)性和預(yù)后做出探究，以期能為臨床尋找新的急性淋巴細(xì)胞白血病的危險(xiǎn)因素和檢測(cè)靶標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至2019年12月期間在我院兒科收治的ALL患兒65例，其中男性37例，女性28例，年齡5～9歲，平均(6.82±2.14)歲；免疫學(xué)分型：B系57例，T系8例；危險(xiǎn)度分型：高危17例，中危20例，低危28例。另選擇本院同期進(jìn)行體檢的健康兒童50例作為對(duì)照組，其中男性29例，女性21例，年齡4～9歲，平均(6.56±2.62)歲。經(jīng)檢驗(yàn)，2組性別、年齡均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

1.2 納入與排除

(1)觀察組患兒均符合ALL基本診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)年齡≤9歲；(3)患兒家長(zhǎng)簽訂知情協(xié)議書；(4)排除合并有其他腫瘤性疾??；(5)入試前未接受其他相關(guān)治療。

1.3 方法

抽取患兒及受試兒童空腹外周靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min取上清，-80 ℃儲(chǔ)存。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測(cè)定血清Netrin-1表達(dá)水平，儀器為NDM-9602G 型全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀(北京普朗新技術(shù)有限公司)。采用全自動(dòng)凝血分析儀(北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司)對(duì)血小板計(jì)數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV)以及血小板分布寬度(PDW)水平進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)所用試劑由美國(guó)R&D 公司提供。所有試劑均在有效期內(nèi)使用，嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行所有操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料組間構(gòu)成比、率的比較采用卡方檢驗(yàn)；計(jì)量資料2組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，2組以上均數(shù)比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，對(duì)計(jì)量資料間的相關(guān)性進(jìn)行Pearson檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組Netrin-1及血小板水平比較

觀察組Netrin-1水平顯著高于對(duì)照組，PLT水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，MPV、PDW比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，具體如表1。

表1 2組Netrin-1及血小板水平情況

2.2 Netrin-1水平與ALL患兒各指標(biāo)的相關(guān)性

Netrin-1在不同PLT水平下存在顯著性差異(P<0.05)，但在性別、淋巴結(jié)腫大、骨質(zhì)破壞、腎臟浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)、染色體異常等臨床指標(biāo)中無(wú)顯著差異(P>0.05)，如表2。

表2 各臨床指標(biāo)下Netrin-1水平情況

2.3 不同危險(xiǎn)度分級(jí)ALL患兒Netrin-1水平及血小板水平比較

隨著患兒危險(xiǎn)度分級(jí)增加Netrin-1水平顯著升高，PLT顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 觀察組各危險(xiǎn)分級(jí)Netrin-1水平及血小板水平情況

2.4 Netrin-1水平與PLT相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson檢驗(yàn)，Netrin-1水平與PLT呈負(fù)相關(guān)(γ=-0.034，P=0.019)，其水平越高，患兒PLT水平越低，出血風(fēng)險(xiǎn)越大，預(yù)后越差。

3 討論

Netrin-1家族是一類層粘連蛋白相關(guān)的可分泌蛋白，是一類重要的神經(jīng)突起導(dǎo)向因子，在結(jié)構(gòu)上高保守。Netrin-1是Netrin家族中研究較多的重要成員之一，近年來(lái)研究顯示，Netrin-1不僅在神經(jīng)導(dǎo)向、神經(jīng)遷移和神經(jīng)可塑性中發(fā)揮重要作用，還能引起包括血管和腺管在內(nèi)的所謂管脈系統(tǒng)生長(zhǎng)，甚至可以調(diào)節(jié)白細(xì)胞遷移[7]。高永生等[8]發(fā)現(xiàn)Netrin-1與乳腺癌細(xì)胞的存活及轉(zhuǎn)移有關(guān)，Netrin-1表達(dá)有利于乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，在乳腺癌中Netrin-1高表達(dá)則乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移性強(qiáng)。張旭等[9]在研究中指出Netrin-1在結(jié)直腸癌腫瘤內(nèi)異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)，當(dāng)DCC和Netrin-1在同一細(xì)胞株內(nèi)表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，DCC蛋白的下調(diào)和失活可能與Netrin-1有關(guān)。劉鴻運(yùn)等[10]則在肺癌的研究中指出Netrin-1在肺癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中表達(dá)強(qiáng)烈，Netrin-1可能在肺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。張春霞等[11]則認(rèn)為Netrin-1在體外時(shí)增強(qiáng)癌細(xì)胞凋亡抗性，在體內(nèi)時(shí)卻能抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)，這可能與Netrin-1介導(dǎo)的不同受體有關(guān)。以上研究均提示Netrin-1在多種腫瘤疾病中呈現(xiàn)表達(dá)異常，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其機(jī)制可能為Netrin-1通過(guò)結(jié)合不同依賴性受體，如UNC5B、DCC、Neogenin等，產(chǎn)生不同作用。但是在Netrin-1的研究中相關(guān)ALL的研究卻鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)對(duì)65例ALL患兒以及50名健康兒童作為對(duì)照組的外周血Netrin-1和PLT、MPV和PDW檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：觀察組Netrin-1水平顯著高于對(duì)照組，PLT水平顯著低于對(duì)照組，而MPV、PDW比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示：Netrin-1水平與PLT水平在ALL患兒中表達(dá)異常，可能參與了ALL的發(fā)生發(fā)展過(guò)程；而MPV、PDW無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能因?yàn)楣撬柚性技?xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞的極度增生，從而使巨核細(xì)胞受到抑制導(dǎo)致血小板的生成減少，但血小板的大小仍較為一致。但是Z等[12]在血小板與急性淋巴細(xì)胞白血病的研究中顯示ALL患者M(jìn)PV水平比正常對(duì)照組低，與本研究存在差異，我們分析可能原因?yàn)閆等研究中患兒接受化療治療，化療后由于化療藥物對(duì)骨髓抑制作用，使MPV、PDW降低。

為了進(jìn)一步明確Netrin-1與ALL患兒生物學(xué)特征之間的相關(guān)性，本研究對(duì)不同臨床指標(biāo)性別、淋巴結(jié)腫大、骨質(zhì)破壞、腎臟浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)、染色體異常、PLT下Netrin-1水平進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)Netrin-1在不同PLT水平下存在顯著性差異，在性別、淋巴結(jié)腫大、骨質(zhì)破壞、腎臟浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)、染色體異常等臨床指標(biāo)中無(wú)顯著差異。然后，對(duì)在臨床指標(biāo)中存在顯著差異的PLT和Netrin-1在不同危險(xiǎn)分級(jí)中進(jìn)行對(duì)比顯示：隨著患兒危險(xiǎn)度分級(jí)增加Netrin-1水平顯著升高，PLT顯著降低，經(jīng)Pearson檢驗(yàn)，Netrin-1水平與PLT呈負(fù)相關(guān)(γ=-0.034)，其具體病理機(jī)制目前尚不清楚，可能與Netrin-1增強(qiáng)了白血病細(xì)胞侵襲能力有關(guān)。An等[13]在研究中指出，Netrin-1可能通過(guò)激活MAPK信號(hào)通路與P13K信號(hào)通路促進(jìn)白血病細(xì)胞惡性增殖與轉(zhuǎn)移。PLT是直接反映血小板生成與衰亡的動(dòng)態(tài)指標(biāo)，在ALL中白血病細(xì)胞在骨髓和其他造血組織中大量增殖并浸潤(rùn)其他器官和組織，使正常造血組織受到抑制從而減少了血小板生成[14]。近幾年血小板作為一種非入侵檢查，能有效反映體內(nèi)血小板的增殖動(dòng)力學(xué)，對(duì)ALL早期的診斷、動(dòng)態(tài)療效以及預(yù)后觀察具有重要意義。此外，危險(xiǎn)度分級(jí)也是一個(gè)綜合性預(yù)后指標(biāo)，而研究中隨著患兒危險(xiǎn)度分級(jí)增加Netrin-1水平顯著升高，PLT顯著降低說(shuō)明：Netrin-1可能是ALL患兒一個(gè)預(yù)后不良的指標(biāo)，對(duì)ALL患兒預(yù)后有一指導(dǎo)意義。

盡管如此，本研究仍存在一定不足之處：①研究中僅納入65例ALL患兒，樣本量較小，存在一定局限性；②未能進(jìn)一步對(duì)Netrin-1分子、基因進(jìn)行深入研究，無(wú)法闡明Netrin-1在ALL患兒中的具體病理機(jī)制；③未能在研究中給與患兒相應(yīng)治療，無(wú)法得知在治療后Netrin-1水平變化。以上問(wèn)題都需我們進(jìn)行更多基礎(chǔ)研究進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，急性淋巴細(xì)胞白血病患兒外周血Netrin-1水平存在異常表達(dá)，與PLT呈負(fù)相關(guān)，其水平越高，患兒預(yù)后越差。